2株鱉源致病菌的鑒定及藥敏結果差異性的比較

1、2014年第6期939檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪［14］朱大玲，李愛華，汪建國，等嗜水氣單胞菌毒力與毒力基因分布的相關性［J］中山大學學報:自然科學版，2006，45(1):82－85［15］王志錚，趙蓓蓓，王忠發(fā)，等四株鱉源致病性嗜水氣單胞菌(Aeromonashyhila)的表型、分子鑒定及其毒力基因檢測［J］海洋與湖沼，2010，41(5):776－783［16］黃

2、鈞，黃艷華，胡大勝，等黃沙鱉白底板病病原菌的分離鑒定及6種毒力基因檢測［J］水生生物學報，2013，37(5):844－854(責任編輯:高峻)收稿日期:20140409基金項目:杭州市農業(yè)科研攻關專項(20130432B12)浙江省公益技術研究農業(yè)項目(2012C22065)作者簡介:蔡麗娟(1978－)，女，浙江紹興人，工程師，本科，研究方向為水產病害。文獻著錄格式:蔡麗娟，朱麗敏，林啟存，等2株鱉源致病菌的鑒定及藥敏結果差異性的比

3、較［J］浙江農業(yè)科學，2014(6):939－9402株鱉源致病菌的鑒定及藥敏結果差異性的比較蔡麗娟，朱麗敏，林啟存，許寶青，劉凱(浙江省杭州市農業(yè)科學研究院，浙江杭州310024)摘要:對分離自溫室和外塘發(fā)病甲魚肝臟的2株鱉源致病菌，分別進行細菌鑒定并測定其對19種抗生素的藥物敏感性，對比分析藥敏結果的差異。經鑒定，2株菌均為嗜水氣單胞菌，且均存在一定程度的耐藥性，其中分離自溫室甲魚的嗜水氣單胞菌耐藥狀況相對較嚴重。關鍵詞:鱉源致病菌

4、嗜水氣單胞菌鑒定藥敏中圖分類號:TS254文獻標志碼:A文章編號:05289017(2014)06093902鱉(Pelodiscussinensis)俗稱甲魚、水魚、團魚等，卵生爬行動物，水陸兩棲生活，因鱉肉味鮮美、營養(yǎng)豐富，深受消費者喜愛。近幾年來隨著集約化養(yǎng)殖的發(fā)展，養(yǎng)殖環(huán)境惡化程度加劇，病原滋生，疾病已成為制約甲魚產業(yè)發(fā)展的瓶頸。其中原發(fā)性和繼發(fā)性細菌性疾病占據(jù)了很大的比重，主要有腐皮病、穿孔病、疥瘡病、白點病、紅脖子病、出血性

5、敗血癥等，死亡率均很高，給養(yǎng)鱉業(yè)造成了巨大的損失。面對致病菌的肆虐，抗生素是最強有力的武器，但由于抗生素長期無度使用已導致了一定比例耐藥菌的出現(xiàn)，給養(yǎng)殖用藥造成很大的困擾。試驗中2株菌株A1、A2分別分離自本地區(qū)有明顯出血性敗血癥癥狀的溫室鱉和外塘鱉，用VITEK32對其進行鑒定，并用紙片法［1］分別測定其對19種抗生素的藥敏結果，對比2株致病菌的藥敏結果差異?，F(xiàn)將有關結果報道如下。1材料與方法1.1材料主要耗材。血平板，GNI鑒定卡，

6、MH培養(yǎng)基均購自法國梅里埃生物公司。試驗菌株。2株試驗菌株A1、A2分別分離自本地區(qū)發(fā)病的溫室甲魚和外塘甲魚。發(fā)病癥狀，病鱉肝臟有明顯出血點，腸道無食且內壁明顯充血，發(fā)病后死亡率很高。取病鱉肝臟組織，用無菌方式在血平板上分離出溶血嚴重的優(yōu)勢菌群，經動物回歸后確診為該鱉病的致病菌，用30%甘油制成菌懸液置于冰箱－70℃超低溫冷凍保種。藥敏紙片。恩諾沙星(ENＲ，5μg片－1)、氟哌酸(NOＲ，10μg片－1)、慶大霉素(GEN，10μg片

7、－1)、四環(huán)素(LET，3μg片－1)、丁胺卡那(AMI，30μg片－1)、強力霉素(DOX，30μg片－1)、復方新諾明(COS，23.751.225μg片－1)、青霉素(P，10μg片－1)、鏈霉素(SM，10μg片－1)、利福平(ＲIF，5μg片－1)、頭孢唑啉(CZO，30μg片－1)、萘啶酸(NAL，30μg片－1)、氨芐青舒巴坦(SAM，1010μg片－1)、頭孢呋辛(CEP，30μg片－1)、頭孢他啶(FOＲ，30μg片－

8、1)、左氟沙星(LEV，5μg片－1)、克林霉素(CM，2μg片－1)、妥布霉素(TOB，10μg片－1)、氯霉素9402014年第6期(CL，30μg片－1)購自杭州微生物試劑有限公司。主要儀器。VITEK32微生物鑒定系統(tǒng)，NU6382E超低溫冰箱，恒溫恒濕培養(yǎng)箱。1.2方法細菌鑒定。2株鱉源致病菌A1，A2分別采用生物梅里埃的VITEK32全自動化微生物鑒定系統(tǒng)進行鑒定。KB紙片法藥敏試驗。將致病菌A1，A2經過24h培養(yǎng)后，用無

9、菌生理鹽水配置成濃度為0.5個麥氏的菌懸液，用無菌棉拭子均勻涂抹至MH培養(yǎng)基上，按序貼上所需藥敏紙片，置30℃培養(yǎng)箱內培養(yǎng)24h，觀察并測量抑菌圈直徑，并對結果進行判定。2結果與分析2.1VITEK32鑒定A1，A22株鱉源致病菌的VITEK32鑒定生化反應結果如表1。VP試驗、GAS試驗均陽性，VITEK32鑒定結果顯示A1，A22株鱉源致病菌均為嗜水氣單胞菌。2.2藥物敏感性經KB紙片法藥敏試驗，用游標卡尺測量藥敏圈直徑，具體結果如

10、表2。表12株鱉源致病菌A1，A2VITEK32鑒定結果生化反應結果生化反應結果生化反應結果生化反應結果生化反應結果DP3OFGGCACE－ESCUＲE－CIT－MAL－TDA－PXB－MLTMANXYL－ＲAF－SOＲ－INO－ADO－COUH2S－ONP－AＲAGLUAＲGLYS－OＲN－PLILAC－SUCＲHA－OXI－注:為陽性，－為陰性。表22株鱉源致病菌A1，A2對19種抗生素的藥敏結果菌株ENＲGENCLESMFZDTC

11、COSCMAMICEFⅤＲIFKNOＲDOXFOＲFUCTXLEVA1ＲSＲSＲＲＲＲＲSＲＲSＲＲSIIＲA2ＲSSSIＲＲＲＲSSIＲＲSSISI注:Ｒ表示耐藥，I表示中間，S表示敏感。表3顯示，同為鱉源嗜水氣單胞菌的2株菌A1和A2對19種抗生素的耐藥百分比存在較大的差異，A2耐藥率為36.8%，A1的耐藥率為63.2%明顯高于A2。表32株鱉源致病菌A1，A2的耐藥率菌株抗生素種ＲIS耐藥率%A1122563.2A274836.

12、83小結與討論鱉源致病菌A1，A2經鑒定均為嗜水氣單胞菌。嗜水氣單胞菌屬氣單胞菌科氣單胞菌屬，為條件致病菌，廣泛存在于池塘及土壤中。當放養(yǎng)密度、水溫、水質等環(huán)境不適宜于養(yǎng)殖動物時，通?？芍吗B(yǎng)殖動物感染嗜水氣單胞菌，從而發(fā)?。?］。因此在養(yǎng)殖過程中須嚴格控制好養(yǎng)殖密度與水質，這對預防嗜水氣單胞菌感染具有積極的作用。試驗表明，不管來自溫室甲魚還是外塘甲魚的嗜水氣單胞菌均存在一定的耐藥性率，其中來自溫室甲魚的耐藥情況更為嚴重，這與溫室甲魚較外

13、塘甲魚更易發(fā)病，抗生素使用更為頻繁有一定關系，一般情況下用藥背景復雜的養(yǎng)殖環(huán)境更容易產生耐藥菌［3］。鑒于甲魚養(yǎng)殖業(yè)尤其溫室甲魚出現(xiàn)耐藥菌的概率較高，經驗用藥已不再有效，建議當養(yǎng)殖場出現(xiàn)爆發(fā)性疾病的時候，養(yǎng)殖場工作人員最好持發(fā)病甲魚就近求助于基層水產技術站或水產科研機構，進行確診，并借助藥敏檢測技術選擇合適的抗生素。參考文獻:［1］張卓然，夏夢巖，倪語星微生物耐藥的基礎與臨床［M］北京:人民衛(wèi)生出版社，2007［2］王增福，謝紅梅，張靜