外科常用手術(shù)器械識(shí)別與使用

1、輸血科知識(shí)培訓(xùn),1,一 復(fù)習(xí)：有關(guān)血型的簡(jiǎn)單知識(shí)與概念血型是人體血液的一種遺傳性狀，各種血液成分包括紅細(xì)胞、白細(xì)胞、 血小板及某種血漿蛋白在個(gè)體之間均具有抗原成分的差異，受獨(dú)特的 遺傳基因控制。由若干個(gè)相互關(guān)聯(lián)的抗原抗體組成的血型體系，稱(chēng)為血型系統(tǒng)。血型被認(rèn)為是指各種血液成分的遺傳多態(tài)性標(biāo)記?！懊庖哐簩W(xué)”在臨床醫(yī)學(xué)、人類(lèi)學(xué)、遺傳學(xué)、法醫(yī)學(xué)、考古學(xué)等方面的應(yīng)用日趨廣泛， 尤其是在

2、輸血、器官移植、骨髓移植等臨床實(shí)踐中發(fā)揮著重要作用。,2,人類(lèi)最重要的幾個(gè)血型系統(tǒng)紅細(xì)胞血型系統(tǒng) ABO血型系統(tǒng) Rh血型系統(tǒng)其他血型系統(tǒng) 白細(xì)胞抗原系統(tǒng) 血小板抗原及抗體 血清蛋白成分的抗原特異性,3,血型抗原與抗體的幾個(gè)特性,A或B抗原在胚胎期及出生時(shí)便能檢出，但敏感性較低，到20歲左右時(shí) 才達(dá)高峰。抗原性終身

3、不變，但到老年敏感性有所下降。ABO血型系統(tǒng)抗體有免疫抗體和天然抗體之分。 抗體有抗A和抗B兩種。 人在出生前尚未產(chǎn)生抗體，出生后3-6個(gè)月才開(kāi)始出現(xiàn)，至青春期達(dá)高 峰。產(chǎn)生抗體的功能可延續(xù)終身，但其效價(jià)隨著年齡增長(zhǎng)而逐漸降低。 天然抗體可能是由一種無(wú)覺(jué)察的抗原刺激而產(chǎn)生。 血型抗體是免疫球蛋白，免疫性抗體主要是IgG，天然抗體主要是IgM。,4,5,ABO血型分型原則,6,血型鑒定前的準(zhǔn)備,一、標(biāo)本的采

4、集 1.紅細(xì)胞懸液標(biāo)本 門(mén)診血型常用手指血做正定性。但現(xiàn)在已經(jīng)不提倡了。采集EDTA-K2抗凝的靜脈血離心，取紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌配制紅細(xì)胞懸液：2％紅細(xì)胞懸液用于抗體效價(jià)的測(cè)定； 5 ％紅細(xì)胞懸液用于血型鑒定、交叉配血試驗(yàn)， 2.血漿或血清標(biāo)本,7,血型及配血標(biāo)本的要求,護(hù)士根據(jù)送檢單的要求，雙人核對(duì)采集標(biāo)本。采集后立即送檢。輸血科工作人員注意核對(duì)接收標(biāo)本兩個(gè)小時(shí)內(nèi)要完成血型的檢驗(yàn)。配血標(biāo)本要三天內(nèi)的。

5、標(biāo)本要保存七天。,8,ABO血型鑒定方法,血型鑒定抗原+抗體反應(yīng)正向定型（direct typing）: 已知特異性抗體（標(biāo)準(zhǔn)血清） 檢測(cè)紅細(xì)胞上的未知抗原 反向定型（indirect typing): 已知血型的標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞 檢測(cè)血清中的未知抗體,,,,9,ABO血型正、反向鑒定及結(jié)果判斷,10,鑒定ABO血型常用方法,1. 生理鹽水凝集法

6、 鹽水介質(zhì)原理：Ag+Ab AgAb,,,,11,用生理鹽水為介質(zhì)，檢測(cè)的是IgM性質(zhì)抗體 玻片法試管法,12,正定型血型鑒定操作程序圖（玻片法）,13,血型鑒定,14,試管法,1、每個(gè)被檢者準(zhǔn)備小試管1支，貼好名簽，加入等滲鹽水1ml。從毛細(xì)血管采血配成5%的紅細(xì)胞懸液，注意血液不能凝結(jié)。2、每個(gè)被檢者準(zhǔn)備小試管3支，分別貼上A、B標(biāo)簽，并標(biāo)上姓名，按標(biāo)簽分別加抗A、

7、B抗體2滴。3、兩管各加被檢紅細(xì)胞懸液1滴混勻。4、放在離心機(jī)內(nèi)，用1000~3000轉(zhuǎn)/分，1分鐘，觀察現(xiàn)象。,15,加被檢紅細(xì)胞懸液,16,加試劑抗體血清,17,離心,18,相對(duì)應(yīng)的抗原抗體反應(yīng),19,觀察結(jié)果,20,鏡下的凝集與非凝集,21,反向定型,一、用途：當(dāng)沒(méi)有合適的標(biāo)準(zhǔn)血清，或用標(biāo)準(zhǔn)血清鑒定出現(xiàn)可疑結(jié)果時(shí)，可用此法核對(duì)。二、標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液的配置：分別取已知敏感性高的標(biāo)準(zhǔn)A、B、0、三型 人的紅細(xì)胞紅洗滌三次，配成5%

8、的紅細(xì)胞懸液（若無(wú)標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞，可用5個(gè)A型，2個(gè)B型，2個(gè)O型人紅細(xì)胞，分別按型混合，代作已知標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞）三、方法1、從被檢者靜脈，制成血清或血漿。2、試管的準(zhǔn)備，同標(biāo)準(zhǔn)血清鑒定法3、在A管放標(biāo)準(zhǔn)A型紅細(xì)胞1滴，B管放標(biāo)準(zhǔn)B型紅細(xì)胞1滴，在O型管放標(biāo)準(zhǔn)o型紅細(xì)胞1滴。4、各加被檢血清2滴，分別混勻，離心后判斷結(jié)果同前。,22,ABO血型正、反向鑒定及結(jié)果判斷,23,在特殊環(huán)境，沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)血清和標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞，僅知一個(gè)A型（或B型）人

9、時(shí)，若用血液，怎么來(lái)鑒定人的血型？,問(wèn)題,24,2.微柱凝膠技術(shù),微柱凝膠技術(shù)是液相技術(shù)與固相技術(shù)的巧妙組合，是凝膠過(guò)濾技術(shù)、離心技術(shù)、紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)技術(shù)（特異性抗體抗原反應(yīng)）的完美結(jié)合。通過(guò)對(duì)凝膠種類(lèi)的選擇和凝膠濃度的調(diào)節(jié)來(lái)控制分子篩孔徑大小,使分子篩只允許游離紅細(xì)胞通過(guò),從而達(dá)到分辯凝集紅細(xì)胞和非凝集紅細(xì)胞的目的。微柱凝膠技術(shù)是目前最易大規(guī)模推廣、最適于常規(guī)試驗(yàn)的最好血型血清學(xué)試驗(yàn)技術(shù)。,25,微柱凝膠技術(shù)原理,當(dāng)抗原抗體反應(yīng)時(shí)紅細(xì)

10、胞發(fā)生凝集（包括已致敏的紅細(xì)胞通過(guò)抗人球蛋白的橋連作用發(fā)生的凝集），在一定的離心力作用下，凝集的紅細(xì)胞不能通過(guò)凝膠間隙而留在凝膠分離柱上層或分散在凝膠分離柱中，此為陽(yáng)性反應(yīng)；而未凝集的紅細(xì)胞在離心力的作用下可通過(guò)凝膠間隙而沉積于凝膠分離柱的底部，此為陰性反應(yīng)。,26,微柱凝膠種類(lèi),（一）中性膠（又稱(chēng)空白膠，僅含有葡聚糖凝膠）：用做檢測(cè)IgM抗體與相應(yīng)抗原紅細(xì)胞的反應(yīng)。如ABO反定型。（二）特異性膠（如加入過(guò)抗-A、抗-B、抗-D等特異

11、性抗體的凝膠）：利用包被的抗體檢測(cè)相應(yīng)抗原。（三）抗球蛋白膠（包被了單特異性或多特異性抗人球蛋白試劑的凝膠）。用于檢測(cè)IgG抗體與相應(yīng)抗原紅細(xì)胞的反應(yīng)。,27,28,微柱凝膠法做ABO、Rh血型實(shí)例,紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在微柱凝膠介質(zhì)中發(fā)生凝集發(fā)應(yīng),29,ABO、Rh血型鑒定質(zhì)量控制,1、技術(shù)上的失誤假陰性①抗體試劑與紅細(xì)胞比例不對(duì)應(yīng)。②紅細(xì)胞懸液過(guò)淡。③離心速度、時(shí)間不夠。④忽略觀察溶血現(xiàn)象，因溶血也是陽(yáng)性反應(yīng)。

12、,30,假陽(yáng)性①離心速度過(guò)大或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。②使用了受到細(xì)菌污染的抗體試劑和鹽水。③使用不干凈的試管等。,31,造成假陽(yáng)性或假陰性的人為原因：①標(biāo)本張冠李戴。②未加入或使用了失效的試劑。③操作者不能正確識(shí)別和解釋試驗(yàn)結(jié)果。④人為的書(shū)寫(xiě)錯(cuò)誤。,32,2、被檢人血清標(biāo)本的問(wèn)題①嬰兒及老年人，4～6月嬰兒血清中ABO抗體很弱②疾病影響引起假凝集或弱凝集。③治療措施的影響,33,3、被檢者紅細(xì)胞的問(wèn)題①紅細(xì)胞

13、上抗原位點(diǎn)過(guò)少或抗原性減弱如弱A、弱B亞型和白血癥或惡性腫瘤患者②紅細(xì)胞獲得性異常，如O型或A型病人因腸道細(xì)菌感染使紅細(xì)胞上獲得類(lèi)B抗原③細(xì)菌污染,34,正反定型結(jié)果不一致的解決辦法,首先重復(fù)試驗(yàn)，不符則繼續(xù)做下列試驗(yàn)。（1）重新采集獻(xiàn)血員和受血者的新鮮血液標(biāo)本（2）多次洗滌被測(cè)紅細(xì)胞和標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞（3）用抗A1、抗AB檢測(cè)紅細(xì)胞。（4）如懷疑血清中有抗A1，可用數(shù)份A2紅細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行檢驗(yàn)。（5）如果試驗(yàn)結(jié)果未見(jiàn)凝集，應(yīng)

14、將正向及反向試驗(yàn)至少在室溫在40℃放置30min，用顯微鏡檢查核實(shí)。（6）若懷疑是由于抗原減弱造成的正反定型不符，可進(jìn)一步做木瓜酶試驗(yàn)、直接抗球蛋白試驗(yàn)、吸收放散試驗(yàn)等加以鑒別。,35,二、 Rh血型 （Rh －Rhesus monkey的縮寫(xiě)）,2、主要類(lèi)型,Rh陰性：RBC上無(wú)Rh（D）抗原,Rh陽(yáng)性：RBC上有Rh（D）抗原,,1、系統(tǒng)組成： (1)抗原：RhD、RhC、Rhc、RhE、Rhe

15、 主要成分為多肽鏈 (2)抗體：抗-D、抗-C 、抗-c 、抗-E 、抗-e 性質(zhì)：IgG性質(zhì) (3)基因：RHD和RHCE基因,36,3、特點(diǎn)（1）絕大多數(shù)為IgG抗體 Rh陰性者接受Rh陽(yáng)性血后通過(guò)免疫產(chǎn)生免疫性抗體。（2）抗體可通過(guò)胎盤(pán) 其抗原性強(qiáng)弱依次為D、E、C、c、e，以D抗原性最強(qiáng)。 我們稱(chēng)含D抗原的紅細(xì)胞為Rh陽(yáng)性，不含D抗原的為Rh陰性。我國(guó)人

16、中Rh陰性者甚為少見(jiàn)。 （3）天然抗體極少。抗D抗體最常見(jiàn) Rh抗體有完全抗體和不完全抗體兩種。完全抗體在機(jī)體受抗原刺激初期出現(xiàn)，一般屬I(mǎi)gM型，分子量大，不能通過(guò)胎盤(pán)，存留時(shí)間短。機(jī)體繼續(xù)受抗原刺激，則出現(xiàn)不完全抗體，屬I(mǎi)gG型，分子量小，可通過(guò)胎盤(pán)，存留時(shí)間長(zhǎng)，常在完全抗體出現(xiàn)后出現(xiàn)，引起新生兒溶血病。,37,4、Rh血型的鑒定僅用抗D血清進(jìn)行鑒定，粗略地分為Rh陽(yáng)性和陰性?xún)深?lèi)。鑒定方法 完全抗體：生理鹽水凝

17、集試驗(yàn) 不完全抗體：膠體介質(zhì)法、木瓜酶法、抗人球蛋白法等,38,5、Rh血型系統(tǒng)的臨床意義Rh血型系統(tǒng)所致的溶血性輸血反應(yīng)：第一次輸血不必考慮Rh血型，第二次輸血需考慮Rh血型是否相同。新生兒Rh溶血病：Rh-的母親 ①若輸過(guò)血，懷孕后其孕兒為Rh+者，孕婦的抗Rh的抗體，可通過(guò)胎盤(pán)導(dǎo)致胎兒溶血。②第一次孕兒為Rh+，胎兒的RBC因某種原因(如胎盤(pán)絨毛脫落)進(jìn)入母體，或分娩時(shí)進(jìn)行胎盤(pán)剝離過(guò)程中血液擠入母體,孕婦體內(nèi)產(chǎn)生抗Rh的

18、抗體。第二次妊娠時(shí),孕婦體內(nèi)的抗Rh的抗體，通過(guò)胎盤(pán)導(dǎo)致胎兒溶血。,39,40,6、Rh血型鑒定方法：鹽水法：?jiǎn)慰寺gM抗D，化學(xué)結(jié)合抗D凝聚胺法：抗球蛋白法：經(jīng)典法，改良法酶法：菠蘿酶，木瓜酶。微柱凝膠法：,41,7、臨床意義（1）Rh陽(yáng)性和Rh陰性輸血（2）Rh－HDN（3）中國(guó)人RH基因多態(tài)性,42,二、抗體篩查（卡式）,43,三、交叉配血試驗(yàn)1.交叉配血實(shí)驗(yàn) 分別將供血者的RBC與受血者的血清及供血者

19、的血清與受血者的RBC進(jìn)行的配合試驗(yàn)2.交叉配血實(shí)驗(yàn)的意義（1）檢驗(yàn)血型鑒定是否有誤。（2）檢驗(yàn)血清中是否有不規(guī)則抗體。 （3） “交叉配血”是保證輸血安全的關(guān)鍵措施。,44,交叉配血試驗(yàn)主要方法,根據(jù)性質(zhì)分：（1）鹽水配血試驗(yàn)（2）凝聚胺配血試驗(yàn)（3）抗人球配血試驗(yàn)（4）特殊配血試驗(yàn)等（酶法、特殊介質(zhì)配血等）根據(jù)方法分（1）試管法（2）卡式（3）全自動(dòng),45,,,紅細(xì)胞,紅細(xì)胞,血清,血清,（主側(cè)）,（次側(cè)）,（供血者）,（

20、受血者）,交叉配血試驗(yàn)示意圖,兩側(cè)均無(wú)凝集反應(yīng)，可以輸血。主側(cè)有凝集反應(yīng)，絕對(duì)不能輸血。次側(cè)有凝集反應(yīng)，一般不宜輸血。,結(jié)果判讀,46,配血方法的選擇1、生理鹽水法：無(wú)輸血史及妊娠史2、間接抗人球蛋白法：有反復(fù)輸血史及妊娠史，尤其是有輸血反應(yīng)史、生育過(guò)新生兒溶血病嬰兒的婦女。大量輸血時(shí)須同時(shí)做供血者之間的交叉配血實(shí)驗(yàn)。,47,交叉配血的方法,均不凝集：配血相合主側(cè)凝集：配血不合主側(cè)不凝，次側(cè)凝集：只在應(yīng)激情況下少量緩慢，或