臨床標本檢驗

1、臨床標本的細菌學檢驗,基本要求,認真核對：了解診斷：聯(lián)系臨床：,正確采集和處理標本,無菌操作：對無菌或有菌標本不同處理盛放容器：無菌容器采集時間、部位：送檢時間、方法：及時送檢、低溫或保溫保存安全防護：及時檢驗和報告：,選擇合適的培基養(yǎng)和培養(yǎng)方法,血液和骨髓,采血時間與次數(shù)：采集血培養(yǎng)都應該在使用在使用抗生素之前進行；對間歇性寒戰(zhàn)，應該估計寒戰(zhàn)或體溫高峰時間。 采血部位：肘靜脈或肘動脈骨髓采集：增菌培養(yǎng)：培養(yǎng)基中加入

2、SPS,檢測方法和報告,普通培養(yǎng)：分別做厭氧和需氧培養(yǎng)陽性表現(xiàn)： 均勻渾濁，革蘭陰性菌 渾濁有綠色，肺炎鏈球菌 表面有菌膜有綠色熒光，銅綠假單胞菌 下面沉淀，鏈球菌 溶血，溶血性鏈球菌 渾濁有膠胨，葡萄球菌 灰白色菌膜，枯草芽孢桿菌涂片革蘭染色鏡檢，直接藥敏、分離培養(yǎng)報告臨床陰性結果7天報告,檢測方法和報告,特殊培養(yǎng) 腦膜炎奈瑟菌培養(yǎng)：37℃加5-10%CO2 傷寒或其

3、它沙門菌：接種葡萄糖膽汁肉湯或膽鹽肉湯 草綠色鏈球菌：胰酶酪蛋白大豆肉湯，同時做需要、CO2和厭氧培養(yǎng) L型細菌：高滲液體培養(yǎng)基，“油煎蛋”菌落 厭氧培養(yǎng)： 真菌培養(yǎng)：,臨床意義,確診菌血癥和敗血癥金黃色葡萄球菌見癤、癰、膿腫引起的敗血癥革蘭陰性菌見尿路、膽道、胃腸道引起的敗血癥草綠色鏈球菌引起亞急性心內膜炎銅綠、金葡引起燒傷后敗血癥,尿液的處理,標本采集： 一般培養(yǎng)采用清潔中段尿。采樣前，用肥皂水或清水清洗外陰

4、，排出尿液前段需丟棄，中段和后段尿液10-20ml盛裝于無菌的容器。 腎盂尿采集法 膀胱穿刺尿采集法 結核菌涂片或培養(yǎng)用24小時尿取沉淀。,檢測方法和報告,直接鏡檢 -離心沉淀涂片革蘭染色 -淋球菌鏡檢假絲酵母鏡檢結核分枝桿菌鏡檢,檢測方法和報告,分離培養(yǎng) -普通培養(yǎng)： -淋球菌培養(yǎng)： -厭氧菌培養(yǎng)： -真菌培養(yǎng)：,檢測方法和報告,菌落計數(shù) 傾注平皿法： 尿液稀釋成1：10、1：1

5、00、1：1000，取此液1ml放入直徑9cm滅菌平皿內，同時加入已熔化并冷至50℃的培養(yǎng)基與尿混合，待凝固后置35 ℃培養(yǎng)。 定量接種環(huán)涂抹法：使用 1ul的定量接種環(huán)沾滿尿液，在分離培養(yǎng)基分離培養(yǎng)。生長的菌落數(shù)乘以 1000，等于每毫升尿中的菌數(shù)。報告： 革蘭陰性菌>105cfu/ml， 革蘭陽性菌>104cfu/ml有臨床意義 陰性報告為“48h培養(yǎng)無菌生長”,患者徐某，男，26歲，因燒傷入住某院燒傷

6、病房等待植皮手術。期間，患者燒傷創(chuàng)面有藍綠色有甜腥氣味的粘稠分泌物滲出，隨后患者出現(xiàn)41℃高熱、呼吸急促、血壓下降、昏迷。臨床診斷為敗血癥休克，立即給予廣譜抗生素抗菌治療與對癥支持治療，同時采集血標本送檢驗科微生物室檢驗并要求做藥敏試驗。請問，該患者可能為哪種細菌感染？血培養(yǎng)將會出現(xiàn)什么現(xiàn)象？該如何進一步鑒定？,患者周某，男，65歲，結腸癌術后化療三日后出現(xiàn)高熱，常規(guī)應用抗生素治療無效，遂臨床采集血標本送檢驗科微生物室，要求血培養(yǎng)鑒定病

7、原菌及藥敏試驗。微生物室工作人員血標本經18h培養(yǎng)后，出現(xiàn)均勻混濁，酚紅指示劑變色。請問該病人可能是什么細菌感染？如何進一步鑒定？,患者李某，女，57歲，術后留置導尿3d后出現(xiàn)發(fā)熱（38℃以上）、尿痛、排尿困難，查體有下腹觸痛與腎區(qū)叩痛，臨床初步判斷為腎盂腎炎，病房要求檢驗科派人協(xié)助采集尿液標本送檢。請問如何正確采集標本，并如何進行檢驗？,糞便標本,自然排便法：挑取膿血、黏液的糞便2-3g于無菌的紙盒中，或放置于增菌液中送檢直腸肛拭子

8、法：直接送檢或放入運送培養(yǎng)基中送檢,檢測方法,直接鏡檢：針對特殊細菌，如霍亂弧菌、結核、真菌等 -霍亂弧菌：魚群樣排列的革蘭陰性菌，動力陽性 -葡萄球菌：金葡菌引起的假膜性腸炎 -結核分枝桿菌： -艱難梭菌：革蘭陽性粗大桿菌，無莢膜、有芽孢 -空腸彎曲桿菌：細小、弧形、S形或螺旋形革蘭陰性,檢測方法,分離培養(yǎng) -沙門菌及志賀菌：增菌培養(yǎng)或直接接種于SS和MAC、CB，37℃18-24h培養(yǎng)，挑取可疑菌

9、落接種KIA/MIU，進一步做生化和血清凝集試驗 -霍亂弧菌：堿性蛋白胨水37℃增菌6h，挑取菌膜接種TCBS平板， 37℃培養(yǎng)16-20h，挑選可疑菌落氧化酶陽性，多價“O”診斷血清凝集試驗 -大腸桿菌培養(yǎng)：挑取膿血、黏液的糞便接種于MAC或EMB， 37℃培養(yǎng)18-24h，挑取可疑菌落接種KIA/MIU，進一步做生化和血清凝集試驗 -金黃色葡萄球菌培養(yǎng)：接種于高鹽甘露醇瓊脂， 37℃培養(yǎng)18-24小時 -副溶

10、血弧菌培養(yǎng)：增菌后接種與弧菌選擇性培養(yǎng)基與SS培養(yǎng)基。,檢測方法,分離培養(yǎng) -小腸耶爾森培養(yǎng)：接種NYE、MAC及SS，22-25℃及37℃培養(yǎng)，挑取可疑菌落接種KIA/MIU，進一步做生化鑒定。 -空腸彎曲桿菌：接種彎曲菌培養(yǎng)基，43℃微需氧培養(yǎng)24-72h -艱難梭菌培養(yǎng)：取黃色偽膜狀糞便，接種于CCFA平板，37℃厭氧培養(yǎng)48h，挑取可疑菌落檢測毒素,臨床意義,檢測引起腹瀉、食物中毒的腸道菌致病菌檢測腸道正常菌群，預

11、防菌群失調,患者楊某，女，24歲，2日前到某海濱城市旅游，并在街邊小店食入大量海鮮?；丶液蟪霈F(xiàn)腹痛、腹瀉、嘔吐、低熱到醫(yī)院就診。臨床采集糞便標本送檢驗科微生物室。標本性狀為糊狀，常規(guī)接種SS平板與CB平板，培養(yǎng)18h后發(fā)現(xiàn)SS平板上除乳糖陽性菌落外有扁平、無色透明、蠟滴狀小菌落生長，CB平板上未見乳糖陰性菌落生長。請問患者可能是何種細菌感染？如何進一步鑒定？,患者張某，男，24歲，因餐后2h出現(xiàn)惡性、嘔吐、發(fā)熱伴腹瀉入院治療，臨床初步判

12、斷為食物中毒。采集糞便標本后送檢驗科微生物室檢查。糞便性狀為糊狀。微生物室工作人員收到標本后直接接種于SS與MAC培養(yǎng)基分離培養(yǎng)，24小時后僅見乳糖陽性菌落生長，請問是何原因？該如何進一步進行檢驗？,某位病人因肺炎住院，經抗生素治療7天后出現(xiàn)腹痛、腹瀉、發(fā)熱等癥狀。病房留糞便標本送檢驗科微生物室檢查。觀察糞便性狀呈粘液血便，帶有條狀偽膜。微生物室工作人員收到標本后直接接種于SS與MAC培養(yǎng)基分離培養(yǎng)，24小時后僅見乳糖陽性菌落生長，請問

13、是何原因？該如何進一步進行檢驗？,呼吸道標本,標本采集： 咽拭子采集法： 自然咯痰法： 小兒取痰法： 氣管鏡采集法： 胃內采痰法： 氣管穿刺法：,檢測方法,顯微鏡檢查 直接鏡檢：觀察痰液質量 染色鏡檢：觀察細菌或分枝桿菌,分離培養(yǎng),培養(yǎng)前處理： 均質化： 凈化：普通培養(yǎng)：接種于BA，10%CO237℃培養(yǎng)18-24小時，挑取可疑菌落涂片、染色，進一步做生化鑒定

14、。結核桿菌培養(yǎng)：,分離培養(yǎng),厭氧菌培養(yǎng)：接種兩個BA，同時做厭氧與需氧培養(yǎng)真菌培養(yǎng)：接種SA，37℃或22℃培養(yǎng)48小時白喉棒狀桿菌：接種亞碲酸鹽培養(yǎng)基上， 37℃培養(yǎng)48小時，典型菌落做生化、毒力試驗百日咳鮑特菌：接種BG培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)2-5天，挑取可疑菌落涂片、血清學試驗,臨床意義,呼吸道標本有正常菌群用于檢測呼吸系統(tǒng)，鼻咽部的感染。與臨床聯(lián)系，找到病原菌。,患者王某，男，63歲，入院后經氣管插管手術48h后出現(xiàn)發(fā)熱

15、、咳嗽、咯痰，X線檢查顯示有較新炎癥病灶，初步判斷為肺部感染。取病人痰液標本送檢驗科微生物室檢驗。病人痰液呈磚紅色似果醬樣，粘稠。請問該病人可能是何種病原菌感染？將如何鑒定？,某醫(yī)院檢驗科微生物室收到一痰液標本，色黃、粘稠。該檢驗科工作人員收到標本登記后，將其用40g/L NaOH消化處理后，進行抗酸染色，鏡檢未見抗酸陽性桿菌，遂發(fā)出初步報告：“××標本經抗酸后未見結核分枝桿菌”。請問該工作人員的做法是否存在問題？如

16、果是你將如何進行檢驗？,腦脊液,標本采集 醫(yī)師以最嚴格的無菌技術做腰椎穿刺。氣溫較低時，應保溫送檢或床邊接種后，立即孵育,檢驗方法,顯微鏡檢查： -腦脊液外觀：結核性膜炎常為毛玻璃樣。 其它細菌引起化膿性腦膜炎，腦脊液都明顯渾濁。 -涂片鏡檢：混濁或膿樣腦脊液可直接涂片,革蘭染色，鏡檢。無色透明的腦脊液,應以3000r/min離心10-15分鐘,取沉淀物涂片,革蘭染色鏡檢，根據(jù)染色反應及

17、形態(tài)特征，可初步提出感染細菌的種類。,檢測方法,顯微鏡檢查： 革蘭陰性雙球菌 革蘭陽性雙球菌 革蘭陰性小桿菌 革蘭陽性小桿菌,分離培養(yǎng),用接種環(huán)挑取混濁腦脊液或離心沉淀物，分別接種于BA或CA平皿上，置35℃5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)18-24小時，檢視有無細菌生長。根據(jù)菌落特點及染色后鏡檢的特征，初步判斷細菌種類，并進一步做生化鑒定及血清學檢查加以鑒定，并作出報告。,臨床意義,細菌性腦膜炎的病原學診斷鑒別診

18、斷病毒性腦膜炎治療療效評估,膿液及創(chuàng)傷分泌物,標本采集 封閉性膿腫：注射器抽取 開放性膿腫： 燒傷創(chuàng)面：,檢驗方法,涂片： 革蘭染色鏡檢 放線菌挑取硫磺顆粒鏡檢,檢驗方法,分離培養(yǎng) -普通細菌培養(yǎng)：分別接種于BA或EMB平皿上，置37℃培養(yǎng)18-24小時，檢視有無細菌生長。根據(jù)菌落特點及染色鏡檢特征，初步判斷細菌種類，并進一步做生化鑒定 -厭氧培養(yǎng)：接種BA，或增菌后80℃20分鐘

19、加熱后移種BA， 37℃培養(yǎng)18-24小時，挑取可疑菌落染色鏡檢，并進一步做生化試驗、動物試驗。,臨床意義,檢測細菌性創(chuàng)傷感染檢測氣性壞疽檢測燒傷的創(chuàng)面感染,患者黃某，男，48歲，為北方某林區(qū)管理員，在一次例行林區(qū)巡視時發(fā)現(xiàn)有大量老鼠死亡，回家2日后出現(xiàn)發(fā)熱、頭痛、淋巴結腫大伴疼痛，立即到當?shù)乜h城醫(yī)院就診，后轉送市中心醫(yī)院ICU隔離病房。對患者淋巴結穿刺液涂片染色鏡檢，查見革蘭陰性兩端濃染的短小桿菌。請問該患者可能為何種細菌感染？如

20、何進一步進行檢驗？,患者趙某，女，63歲，患有糖尿病，晚期伴毛細血管病變。一日因足部不慎被玻璃劃傷到社區(qū)醫(yī)院進行了常規(guī)傷口處理，但傷口經久不愈，并出現(xiàn)化膿性感染。遂到社區(qū)醫(yī)院復診，醫(yī)生進行了傷口清洗處理，并給予口服抗生素治療。兩周后傷口仍不愈合，并出現(xiàn)發(fā)黑、發(fā)臭，有黑色膿血滲出，又到某三級醫(yī)院治療。臨床采集了傷口附近壞死組織，并送檢驗科微生物室檢驗，請判斷可能是由何種細菌感染，并說明該如何進行檢驗。,生殖道標本,標本采集 醫(yī)師采集

21、，女性采集尿道口、陰道、子宮頸或直腸的（懷疑淋球菌感染）男性采集尿道口分泌物及前列腺等分泌物標本。用棉花拭子采集標本，收集于無菌試管內送檢。,檢驗方法,顯微鏡檢查 一般細菌及淋病奈瑟氏菌涂片檢查：制成涂片，干后進行革蘭氏染色，鏡檢發(fā)現(xiàn)有革蘭氏陽性或陰性細菌，即可根據(jù)形態(tài)做出報告。 梅毒螺旋體做暗視野或鍍銀染色檢查 假絲酵母：,檢驗方法,分離培養(yǎng) 一般細菌及淋病奈瑟氏菌培養(yǎng)：一般情況下可用BA，35℃孵育。若培養(yǎng)

22、淋病奈瑟氏菌則應增加1個CA，置5～10% CO2環(huán)境孵育。 厭氧培養(yǎng) 支原體培養(yǎng)：,臨床意義,診斷泌尿生殖系統(tǒng)炎癥性病的診斷,眼、耳、口腔標本,標本采集 -采取標本時,耳,鼻,咽拭子會被皮膚或粘膜上正常菌群污染,采取和分離時應注意。 -采取眼分泌物時,應先用無菌生理鹽水沖洗眼部,然后用棉拭子拭干,再以無菌棉拭子采集。 -沙眼衣原體用無菌小刀刮取穹隆部或眼結膜上皮細胞。,檢驗方法,顯微鏡檢查 一般細菌