相分離技術(shù)分離純化膜蛋白-翻譯

1、相分離技術(shù)分離純化膜蛋白摘要相分離是用來(lái)純化和濃縮洗滌劑溶膜蛋白的一種簡(jiǎn)單、高效且廉價(jià)的方法。盡管如此，在膜蛋白科學(xué)中相分離并沒(méi)有被廣泛使用，并且只有相對(duì)較少的去污劑膜蛋白的結(jié)合體具有隨時(shí)可以使用的實(shí)驗(yàn)方案。在這里，我們總結(jié)了影響用于膜蛋白研究的常見(jiàn)去污劑的相分離行為的理化參數(shù)。并列舉出了用這種方法以不同種類的去污劑純化膜蛋白的成功例子。在許多下游應(yīng)用（如膜蛋白結(jié)晶或功能分析）中，去污劑的選擇是至關(guān)重要的，我們討論了對(duì)于一個(gè)給定的去污劑

2、緩沖系統(tǒng)如何來(lái)給出新的相分離實(shí)驗(yàn)方案。去污劑是兩親性分子，通常由一個(gè)極性或電荷頭基和憎水烴鏈組成。在非常低的濃度下，這些分子可溶于水的單體。當(dāng)增大去污劑濃度超過(guò)所謂的臨界膠束濃度（CMC），去污劑分子聚集形成一個(gè)非常窄尺寸分布，稱為膠束。膠束的大小取決于去污劑的類型；去污劑常用于膜生物化學(xué)，膽酸鈉的聚集數(shù)（如，去污劑分子每膠束）的變化幅度為2到3，TritonX100的聚集數(shù)約為140。此外，膠束的大小和臨界膠束濃度（CMC）取決于離子

3、強(qiáng)度和去污劑溶液的溫度。雖然離子去污劑的臨界膠束濃度（CMC）隨鹽濃度的增加而降低，但受溫度影響較小，非離子去污劑的臨界膠束濃度（CMC）不受鹽的影響，但隨溫度的上升而增長(zhǎng)[7]。其它影響膠束的大小和臨界膠束濃度的因素是壓力，pH值，以及雜質(zhì)的存在[6]。濁點(diǎn)和相分離通過(guò)提高去污劑濃度，或者通過(guò)改變溫度，又或者改變膠束去污劑水溶液的鹽濃度來(lái)達(dá)到所謂的濁點(diǎn)。膠束溶液會(huì)變混濁；膠束不能與水混合并形成較大的聚集體，從而區(qū)分于水相。大多數(shù)但并非

4、所有的去污劑都可分成富去污劑相，而反過(guò)來(lái)其仍然包含了大量的水。依靠去污劑和緩沖體系，富去污劑相可以完全清澈或混濁并可以建立在貧去污劑相上方或下方。這一過(guò)程被稱為相分離，或者有時(shí)稱為濁點(diǎn)萃取。相分離是由于單相和兩相體系的熵的差異產(chǎn)生，同時(shí)也具備溫度依賴性。結(jié)果類似于蛋白質(zhì)沉淀因使用聚乙二醇（PEG）或（NH4）2SO4而沒(méi)有足夠的自由水可保持蛋白質(zhì)充分水化，從而得到溶解。同樣，少量的水覆蓋去污劑膠束聚集體的表面從而形成一個(gè)獨(dú)立相，這種聚集