久效磷對斑馬魚（Danio rerio）2世代繁殖的影響.pdf

1、隨著有機磷農藥生產、使用種類和數(shù)量的不斷增加，對環(huán)境的危害也越來越嚴重，其造成的生物繁殖力降低、生殖畸形、種群數(shù)量下降等環(huán)境問題日益突出。久效磷農藥是一種高水溶性的有機磷農藥，具有環(huán)境雌激素活性，對水生生物和人類健康具有潛在的威脅。因此，本研究選用OECD推薦的斑馬魚為模式生物，以斑馬魚全生命周期實驗方法，統(tǒng)計分析了0.01、0.10和1.00mg L<'-1>久效磷暴露條件下，斑馬魚Fo(成魚，暴露期28d)和F<,1>(150d齡，

2、暴露期從開始受精到發(fā)育成熟)兩代的主要繁殖指標，包括總產卵量、一次產卵量、總產卵次數(shù)、受精率和孵化率等，并選擇卵黃原蛋白(VTG)為指標，利用免疫印跡技術(Western-bolt)，探討了久效磷對Fo雄性斑馬魚體內卵黃原蛋白(VTG)的誘導作用，結合Fo雄魚和雌魚精巢和卵巢的組織學觀察以及精子和卵子的超顯微結構觀察，研究了久效磷對斑馬魚2世代的繁殖影響，為進一步了解久效磷農藥的環(huán)境雌激素效應提供基礎資料和理論依據。研究結果表明：

3、 (1)久效磷對Fo斑馬魚繁殖的抑制效應不具有劑量效應關系，0.01、0.10和1.00mg L<'-1>久效磷暴露組的斑馬魚繁殖力呈U型，即0.01、1.00mg L<'-1>久效磷對繁殖的抑制效應小于0.10mgL<'-1>，0.10mg L<'-1>久效磷繁殖的抑制效應最強，明顯造成了對繁殖行為和后代繁殖數(shù)量的減少，而對卵的受精率和孵化率的影響不明顯。將F<,1>雌魚與對照組雄魚配對，在對照水體中進行15d的繁殖研究發(fā)現(xiàn)，1.0

4、0mg L<'-1>暴露組F<,1>雌魚產的卵受精率和孵化率明顯降低，分別為70.93％和19.4％，說明卵子質量出現(xiàn)下降，表明長期的久效磷暴露對卵巢卵子的發(fā)育過程具有影響。 (2)斑馬魚F<,1>幼魚對久效磷敏感。在發(fā)育0-30d(雌雄同體期)內，卵黃吸收期結束的第一周(8-15d)對久效磷最敏感，1.00mg L<'-1>久效磷暴露能夠造成幼魚死亡率增加，表明該濃度久效磷對幼魚具有較強的致死毒性效應。幼魚高的死亡率也可能會導

5、致斑馬魚種群數(shù)量下降。 (3)采用金魚VTG多克隆抗血清的Western-blot檢測，結果表明久效磷能夠誘導雄性斑馬魚產生了VTG，該VTG具有3個蛋白亞基，亞基分子量分別為135kDa、107kDa和96kDa，其中0.10mg L <'-1>組的3條VTG亞基的蛋白條帶顏色最深且較寬，蛋白含量最高，表明0.10mg L<'-1>久效磷誘導雄性斑馬魚VTG能力最強，對雄魚的內分泌干擾效應最強。我們認為0.10mg L<'-1

6、>久效磷對繁殖的抑制效應最強，可能與VTG的大量被誘導產生有關。 (4)久效磷對雄魚生殖腺組織結構的影響表現(xiàn)為，精原細胞、精母細胞以及小葉基膜的水腫。對精子進行超微結構觀察發(fā)現(xiàn)，久效磷對精子的影響主要表現(xiàn)為對膜系統(tǒng)的損傷，細胞膜、核膜和線粒體的外膜內嵴都普遍出現(xiàn)水腫、斷裂和溶解現(xiàn)象，部分細胞周圍出現(xiàn)空泡，可能與胞內物質出現(xiàn)外溢有關。其中，久效磷對精子細胞期和囊內精子期生殖細胞發(fā)育的影響最大，細胞核染色質不能完全收縮甚至出現(xiàn)溶解。

7、謝爾托立氏細胞數(shù)量增多且胞質內具有大量被吞噬的壞死精子。 (5)久效磷對雌魚卵子發(fā)育過程的影響表現(xiàn)為，在卵母細胞發(fā)育早期階段，久效磷暴露使卵母細胞的核質發(fā)生萎縮，核仁形態(tài)異常，在卵母細胞大生長期(卵黃卵母細胞)主要表現(xiàn)在卵黃發(fā)生溶解，初生卵黃數(shù)量減少，次生卵黃發(fā)生凝集，細胞核膜水腫部分溶解，與卵黃或細胞質出現(xiàn)互溶現(xiàn)象。超微結構也觀察到卵母細胞初生卵黃和次生卵黃發(fā)的溶解和萎縮，同時還觀察到暴露早期卵膜出現(xiàn)的外放射帶局部斷裂和內放射