c.jejuni毒力及耐藥基因的分析和糞便中的c.jejuni快速鑒定

1、河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師( 或指導(dǎo)小組) 的指導(dǎo)下，由本人獨立完成。本學(xué)位論文研究所獲得研究成果，其知識產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名單位為河北醫(yī)科大學(xué)，試驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報專利等知識產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。研究生簽名：虢師簽章：薪二級學(xué)院簽章卜珈。j 年 2N ；i I ：醫(yī)科大

2、學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名：援握導(dǎo)師簽章：鉚≯’三年j 月溈E t中文摘要C ．j e j u n i 毒力及耐藥基因的分析和糞便中的C ．j e j u n i 快速鑒定摘 要目的：l 選取空腸彎曲菌的1 2 對毒力相關(guān)基因和8 對耐藥基因?qū)? 株

3、吉蘭一巴雷綜合征( ，G u i l l a i n ．B a r r e s y n d r o m e ，G B S ) 相關(guān)空腸彎曲菌( C a m p y l o b a c t e r ，e j u n i ，C ．j e j u n i ，C ．J ．) 及N C T C l11 6 8 共4 種菌株進(jìn)行相關(guān)基因分析和比較，了解致C ．j e j u n i 菌株毒力基因及耐藥基因性的特征，探討C ．j e j u n i

4、致G B S 機制。2 傳統(tǒng)的對空腸彎曲菌的分離實驗是通過傳代進(jìn)行培養(yǎng)，經(jīng)過形態(tài)學(xué)鑒定及生化鑒定疑似空腸彎曲菌以后再做分子方面的鑒定實驗，至少要花費三天的時間。常見的特異性生化實驗馬尿酸實驗，由于放置的時間的差異會出現(xiàn)假陰性，降低分離率。而分離方法，需要經(jīng)驗豐富的實驗員挑取可疑單菌落，經(jīng)過純種傳代后，一些毒力及耐藥性可能因為這種非自然的傳代而喪失，影響我們對其分子方面的研究。本次實驗旨在模擬從糞便中直接檢測出空腸彎曲菌的過程，找出特異性

5、及靈敏度高的檢測方法，通過P C R 對空腸彎曲菌進(jìn)行快速而準(zhǔn)確的鑒定。方法：1 選取空腸彎曲菌的1 2 對毒力相關(guān)基因包括：黏附相關(guān)基因c o d F 矛1 ] r a c R ，鞭毛蛋白基因f l a A ，毒素調(diào)節(jié)基因c d t A 、c d t B 、c d t C 、w l a N和v i r B l1 質(zhì)?；颍瑹嵝菘说鞍缀娃D(zhuǎn)運相關(guān)蛋白基因d n a J ，c e u E ，C i 猖和p l d A 基因，8 對耐藥相關(guān)基

6、因包括對環(huán)丙沙星耐藥g y r A ，p a r C 基因，對四環(huán)素耐藥基因t e t ( o ) ，對大環(huán)內(nèi)脂類耐藥基因m u t a t i o n ，C J l ／D P I ，C J l 8 ／C J l 9e l i c J 2 0 ／s J 21 ，對妥布霉素一慶大霉素耐藥基因i n t l 。應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)( P o l y m e r a s e C h a i n R e a c t i o n ，P C R )

7、對菌株的毒力及耐藥基因進(jìn)行擴增，通過擴增出來的條帶確定空腸彎曲菌的毒力及耐藥基因的差別。2 利用平板傳代法對N C l 1 1 6 8 菌株傳代至P 2 代，經(jīng)過生化及分子鑒定；隨機收集病區(qū)中沒有腹瀉及吉蘭巴雷綜合征的患者的新鮮糞便1 6 份，分別置于布氏肉湯中；將肉湯中的糞便振蕩分散后，利用濾膜過濾和P B S離心處理；在濾液中加入調(diào)整濁度后的N C l l 1 6 8 菌液，根據(jù)添加菌液濃度的不同進(jìn)行分組，實驗組分五組，分別為1 0