蠟梅(chimonanthuspraecox(l.)link)lea蛋白基因cplea1和cplea2的克隆及原核表達研究

1、西南大學碩士學位論文蠟梅（Chimonanthus praecox（L.）Link）LEA蛋白基因Cplea1和Cplea2的克隆及原核表達研究姓名：馮曉昆申請學位級別：碩士專業(yè)：細胞生物學指導教師：李名揚20091101兩南大學碩十學何論文碼蛋白進行生物信息學分析，得到其核酸和蛋白序列組成、蛋白質(zhì)疏水性、跨膜區(qū)、二級結(jié)構預測、信號肽、磷酸化和糖基化位點等多種數(shù)據(jù)。然后擴增同收目的基因片段。最后構建原核表達載體建立原核表達體系。主要實驗

2、結(jié)果如下：1 ．在構建蠟梅e D N A 文庫及E S T 分析的基礎上，通過隨機克隆測序，克隆了2 個蠟梅L E A蛋白的e D N A 基因，命名為C p l e a l 和C p l e a 2 。C p l e a l 的編碼蛋白與毛果楊和蕪菁L E A 蛋白氨基酸序列相似性較高；C p t e a 2 的編碼蛋白與毛果楊和榛子L E A 蛋白氨基酸序列相似性較高。進一步序列比較分析表明，C p l e a l 和C p l e

3、 a 2 是從蠟梅中克隆到的2 個編碼L E A 蛋白的基因。C p l e a l e D N A 基因全長5 7 7 b p ，其中含有2 7 3 b p 的開放閱讀框，編碼一個含有9 0 個氨基酸的L E A 蛋向；C p t e a 2e D N A 基岡全長5 7 2 b p ，其中含有2 5 8 b p 的開放閱讀框，編碼一個含有8 5個氨基酸的L E A 蛋白。2 ．運用生物信息學方法分析兩種目的基岡及其編碼蛋白的序列并預

4、測蛋白的結(jié)構。分析結(jié)果顯示，兩種蛋白具有良好的親水性。C p L E A l 蛋白中A l a 、L y s 、G l n 、S e r 的含量最高，C p L E A 2蛋白中A l a 、G l n 、S e r 、T h r 的含量最高。兩種蛋白的二級結(jié)構中均有人量的f t ．螺旋。兩種蛋白含有多個磷酸化位點，推測翻譯后蛋白可能進行多樣化修飾，這可能與L E A 蛋白功能的多樣化有關。3 ．將蠟梅C p l e a l 和C p