利用目標(biāo)區(qū)域捕獲測序鑒定全色盲致病基因.pdf

1、目的：全色盲是一個主要因視錐細(xì)胞損傷丟失導(dǎo)致的嚴(yán)重的先天性常染色體隱性視網(wǎng)膜遺傳病。在此，本課題主要著重于運(yùn)用目標(biāo)區(qū)域捕獲技術(shù)探究全色盲家系的基因突變，以及全色盲基因型與表型的相關(guān)性。
　　方法：收集了兩個散發(fā)的全色盲家系，并采集了詳細(xì)的臨床資料。用目標(biāo)區(qū)域捕獲測序技術(shù)對這兩個家系的先證者進(jìn)行致病基因篩查，應(yīng)用的基因序列面板覆蓋了201個遺傳性視網(wǎng)膜疾病相關(guān)致病基因。過濾階段篩出可疑致病突變并通過生物信息學(xué)方法對突變進(jìn)行致病性和結(jié)

2、構(gòu)功能影響分析，包括突變致病性預(yù)測、多重序列比對、拓?fù)淠Ｐ秃?D結(jié)構(gòu)模型。
　　結(jié)果：通過對2個全色盲家系的篩查，報道了3個CNGA3基因突變，包括一個新突變和兩個已知突變。家系1中的復(fù)合雜合突變（c.1074G＞A，p.W358X；c.1706G＞A， p.R569H）是首次發(fā)現(xiàn)的組合，但均是已知突變；家系2中的純合突變（c.968C＞A， p.A323D）是第一次被報道。多重序列比對顯示了R569H和A323D錯義突變都影響C

3、NGA3在進(jìn)化上高度保守的氨基酸區(qū)域。突變R569H主要位于拓?fù)淠Ｐ偷腸GMP結(jié)合結(jié)構(gòu)域中，而突變A323D主要影響跨膜螺旋S5。3D結(jié)構(gòu)建模直觀地顯示了突變所處的蛋白空間結(jié)構(gòu)存在微小變化。突變R569H，突變后的組氨酸與第508位氨基酸----酪氨酸之間產(chǎn)生了新的結(jié)合。而另一個純合突變A323D，突變后從丙氨酸轉(zhuǎn)為天冬氨酸，在空間結(jié)構(gòu)上增加了一個氫鍵結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)論：采用目標(biāo)區(qū)域捕獲測序技術(shù)成功對全色盲先證者進(jìn)行了分子診斷，鑒定