gm-csf對(duì)抗原化抗體基因免疫th細(xì)胞應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用

1、· l l 6·華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜老生筮 塹鲞笠G M — C S F對(duì)抗原化抗體基 因免疫 T H 細(xì)胞應(yīng)答 的調(diào)節(jié)作用 夏明燦儲(chǔ) 以微 林怡 熊思東 2 o o 5．Vo l2 5．N o． 2【 摘要 】目的 研究 G M — C S F ( 粒． 單核巨噬細(xì)胞集落刺激因子) 與抗原化抗體聯(lián)合基因免疫時(shí)，G M — C S F 對(duì) T H 細(xì)胞應(yīng)答 的調(diào)節(jié)作用。方法 在編碼免疫球蛋 白重鏈的質(zhì)粒 中分別克隆黏

2、蛋 白 1( M U C 1 ) 中特異性 P U I ' R P 抗原表位和 G M ． C S F 編碼基因， 構(gòu)建含 P 陰1 R P 和 G M — C S F編碼基因的抗原化 抗體表達(dá)重組體。經(jīng)脾免疫和肌肉加強(qiáng)的方式免疫 B A L B ／ c 小 鼠。采用 E L I S A方法檢測(cè)小 鼠血清中特異性抗體的水平及其亞類并動(dòng)態(tài)觀察 ； R T - P C R方法檢測(cè) T H 細(xì)胞分化中細(xì)胞因子和轉(zhuǎn)錄因子的表 達(dá)水平。

3、結(jié)果 抗原化抗體基因免疫能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答。G M ． C S F 增強(qiáng)抗原化抗體基 免疫 誘生的抗 P U I ' R P 特異性 I g G抗體水平并且伴隨 I g G 1 ／ I g G 2 a 顯著性升高， 同時(shí)可增強(qiáng)淋 巴細(xì)胞 T H 2細(xì)胞因子及轉(zhuǎn)錄因子( I L 廠 4 、 G A T A 一 3 ) m R N A的表達(dá)水平。 結(jié)論 G M ． C S F 在增強(qiáng)抗原化抗體基 因免疫 誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答的同時(shí)使得

4、免疫應(yīng)答 向 T H 2 方向偏移?！?關(guān)鍵詞 】 粒． 單核巨噬細(xì)胞集落刺激因子； T輔助細(xì)胞； 抗原化抗體； 基因免疫 ； 黏蛋白 1F _ , f e e t0 fGM — CS FO nt h eT h e l p e rc e l lr e s p o n s ei n d u c e db yg e n ei mmu n i z a t i o n wi t h a n l i g e n i z ~la n t i b

5、 o d yM i n g - c a n ，C H UY i - w e i ， L I NY i ， X I O N GS i — d o n g ， D e p a r t m e n to f I r r u m m ~ l o g y ，咖 M e d i c a lC o l l e g eo fF u d a nU n i v e r s i t y，S h a n g h a i2 0 0 0 3 2， C h i

6、n aCo r r e ~o n d i n ga l ~ h o r：X I ONGS i - d o n g。E ma i l ： s d x i o n g@ s h mu． e d u． m 【 A b s t r a c t 】 O b j e c t i v eT oi n v e s t i g a t et h ee f e c to fG M — C S Fo nt h eTh e l p e rc e Hr e s

7、p o n s ei n d u c e db yg e n ei mmu n i z a t i o nc o mb i n e d w i l hGM— C S Fa n da n t i g e n i z e da n t i b o d y ．M e t h 0 d sA DN Ap l a smi dt h a tc o n t a i n se p i t o p eo fm u c i n1p o l y p e p

8、 t i d eP 1 ) r r R Pa ndi r f l i n l l n ea d j u v a ntG M — C S Fw a sc o n s t r u c t e dw i 山a nt i g e n i z e da nt i b o d y ． As p e c i f i ci m mu n er es p o n s ea g a i n s tP DT R Pwa se l i c i t e d

9、v i ai n t r a s p l e n i cg e n ei m mu n i z a t i o na n db o o s t e d 、 r i ai ． n lg e n ei mmu n i z a t i o n．T h es e r aw e r e c o H e c t e d a n d山el e v e l so fs p e c i f i ca n t i b o d ywe r e d e

10、 t e ct e db yE L I S A．T h ee x p r e s s i o n so fk e ymo l e c u le si nT tc e Hd i f e r e n t i a t i o nw e r ed e t e r mi n e d b yR T - P C R．Re s u l tT h es p e c i f i ci m u n er es p o n s ew a si n d u

11、c e d b ya nf i g e n i z e d a n t i b o d y．GM— C S Fe n h a n c e dt hel e v e l so fI g Gw i t h I g G2 a ／ I g G1r a t i oi n c r e a s i n gs i g n i f i —c a nf l ya ndt hee x p r e s s i o no fT H 2 一 t y p

12、ec y t o k i n e sa ndt r a n s c r i p t i o nf a c t o r s ．C o n c l u s i o n G M— C S Fc o u l de n ha nc et h ei m u n er e s p on s ea ndi m p r o v eT H 2t y p ei m u n er e s p on s ei n d u c e d b yg e n ei m

13、 u n i z a t i o nw i t ha nt i g e n i z e da nt i b o d y ．【 K e yw o r d s 】G m n u l o c y t e - m a c r o p h a gec l o l n ys t i m u l a t i n gf a c t o r ( G M — C S F ) ； Th e l p e rc e H ； A n t i g e n i z e

14、 da n—t i b o d y ；G e n ei m u n i z a t i o n ；Mu c i n12 0 世紀(jì) 9 0 年代初 ， 基 因免疫作為一種新型 的免疫技術(shù)和手段受到 了越來 越多 的關(guān)注 ， 如何增強(qiáng) 基因免疫誘 導(dǎo)的免疫應(yīng)答 的強(qiáng)度并調(diào)節(jié)其免疫應(yīng)答 的 類型一直是人們研究的熱點(diǎn)。粒一 單核巨噬細(xì)胞 集落刺激 因子 ( G M — C S F ) 是一種新 型 的免疫 分子佐 劑， 具有多種生物效應(yīng)， 它能

15、促進(jìn)粒細(xì)胞和單核細(xì)胞 的成熟 ， 并增強(qiáng)單核細(xì)胞表面 M H CI 和 M H CI I 類分 基金項(xiàng) 目： 上海 一 聯(lián)合利 華研究與發(fā)展基 金資助 課題 ( 2 0 1 0 ) ； 國(guó)家自 然 科 學(xué) 基 金 面 卜項(xiàng) 目 ( 3 0 1 7 0 8 6 7 ) ； 國(guó) 家 “ 8 6 3 ” 計(jì) 劃 項(xiàng) 目( 2 0 ~A A 2 1 5 2 4 2 )夏 明燦 ， 儲(chǔ) 以微同為第一 作者 作者單位 ： 2 0 0 0 3 2 上

16、海 ， 復(fù) 旦大學(xué) 上海醫(yī)學(xué)院免疫學(xué) 系通訊 作 者 ： 熊 思 東 ， E m a i l ： s d x i o n g@ $ h n l H ． e d u ． 1 2 1 1 。 電 話 ： 0 2 1 ．5 4 2 3 7 3 6 2． 抗 體 工 程 ．子的表達(dá)及協(xié) 同刺激分子 的表 達(dá) ， 進(jìn)一步促進(jìn) 抗原 提呈 ； 同時(shí)能募集 更多 的 A P C細(xì)胞 至抗原 局部 ， 促 進(jìn) A P C細(xì)胞 對(duì)抗原 的攝取 。。M

17、U C 1 是 一種廣 泛 分布于腺上皮細(xì)胞 的跨膜糖 蛋 白， 在正 常細(xì)胞 和腫 瘤細(xì)胞上均有 表達(dá) '。作 為腫瘤相 關(guān)抗原 ， M U C 1在腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞中的糖基化存在差異。腫瘤細(xì)胞表面 M U C 1 的 O型寡糖側(cè)鏈較短 ， 暴露了 M U C 1中串聯(lián)重復(fù)序列 P D 耵 殘基 '?？乖贵w是一 種新型 的基因工程抗體 ， 研究表明 ， 通過基因免疫的 方式 ， 抗原化抗體 的可變區(qū)能誘 導(dǎo)機(jī)

18、體產(chǎn) 生特異性 體液 免疫 和 細(xì) 胞 免 疫 應(yīng) 答 '。 因此 ， 本 研 究 以 M U C 1 重復(fù)序列 中的核心序 列 P D 1P為靶抗原 ， 通 過抗原化抗體 與 G M — C S F經(jīng)脾聯(lián) 合基 因免疫 ， 并以 肌肉免疫加強(qiáng) 的方式 ， 探 討 G M ． C S F對(duì)基 因免疫后 維普資訊 http://www.cqvip.com 2 5巷 第 2期 CⅡJc a x ／ o i o l『 m Ⅱ 山

19、．F e h n t a ~ , 2 口 0 5 ．V2 5P D T R P 與 P D T R P ／ G M ． C S F免疫后血清中特異性抗體 Il 、 I g G 2 a 水平均顯著性升高， 以 Il 的升高最為 明顯( P<0 ． 0 0 1 ) 。P ~ I G M ． C S F免疫組， 血清中 1l 與 I g G 2 a 的比值顯著性高于質(zhì)粒f 1 D T R P 免疫組 及空質(zhì)粒對(duì)照組( P< 0 ．

20、 0 5 )結(jié)果表明， 基因免疫 后誘導(dǎo)了以體液免疫為主的免疫應(yīng)答 ， G M — C S F 對(duì)基 因免疫誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答有增強(qiáng)作用( 圖2 ) 。圖 1 基因免瘦后小鼠血清抗 P t r r R P - l g G的檢測(cè)F i g化抗體聯(lián)合基因免疫對(duì)免疫應(yīng)答中細(xì)胞因子表達(dá)類 型的可能影響， 我們選擇 Ⅱ、 I F N ．這兩個(gè)在 T細(xì) 胞分化中有代表性 的細(xì)胞 因子 為研究對(duì)象， 以P D T R I ~ G M ． C S F重

21、 組 質(zhì) 粒免 疫 小 鼠， 并 以質(zhì) 粒 P D T R P 和空質(zhì)粒為對(duì)照。結(jié)果發(fā)現(xiàn)， 質(zhì)粒 P D T R P tG M ． C S F 和 P D ' r I ~ P免疫組小鼠脾細(xì)胞經(jīng)P D T R P多肽 刺激后， I L 廣 4 、 I F N 一的表達(dá)量均有不同程度的升高 ( P< 0 ． 0 5 ) 。在質(zhì)粒 P D T R P ／ G M — C S F免疫組中， l L _ 4的升高較 I F N 一更

22、為明顯( P<0 ． 0 5 ) 。這表明 G M —C S F 使抗原化抗體基因免疫誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答向 T H 2方向偏移， 即以體液免疫應(yīng)答為主( 圖3 ) 。m? n m h¨ 2468I ?ce)圖2 基因免疫后小 鼠血清抗 P D T R P - I ~； 1 ( A ) 、 抗 t n m ~ P ． I g C d a ( B 】 和抗 P I ) T R P抗體 I ~ G l t l g G 2 ac

23、 C ) 的檢測(cè) n g 2 -o f t h es p e a r r em a t i - P l Y l ~Pl g G 1 ( A】 ． i m l i -P ' I Y r R PI g G 2 a ( B ) a n dm a i - P l Y r R PI g G 1 ／ I g G 2 a ( C 】 ． 岫4 ． G M- C S I F 對(duì)抗原化抗體基 因免疫后細(xì)胞 因子 幾_ 4 和 I F N - ~

24、' 表 達(dá)的影 響： 為研究 G M - C S F 抗原 圖 3 基園免疫后細(xì)胞因子 I F N - ~ 和 U ． - 4的表達(dá)f A 】 和 表達(dá)■的比 較( B )n g 3 ． D 驢 d ∞ I F N - 7a n dⅡ ， 4 f A) a n dc o m p t ~ t mlo f a ∞ I F N - 7a n dn , - , t ( B 】 船缸 “m婦衄帕 A： L a n e1 ：P I 刪 G

25、 t V l · C S F； l a n e2 ： P D ' I T d ' ：l me3 ：m5 ． G M- C S F 對(duì)抗原化抗體基因免疫后轉(zhuǎn)錄因子T · b e t 和 GA T l A ． 3 表達(dá)的影響： 為研究 G M ． C S F 抗 原化抗體聯(lián)合基因免疫對(duì)免疫應(yīng)答中 轉(zhuǎn)錄因子表達(dá) 類型的可能影響， 我們選擇 T - b e t 和 G A T A - 3 這兩個(gè) 在 T 細(xì)胞

26、分化中有代表性的轉(zhuǎn)錄因子為研究對(duì)象，以 P D T R P t G M ． C S F重組 質(zhì)粒免疫小 鼠， 并 以質(zhì)粒 P l Y r R P 和空質(zhì)粒為對(duì)照 結(jié)果發(fā)現(xiàn)， 質(zhì)粒 P I Y l I W／G MC S F 和P l y n L p 免疫組小鼠脾細(xì)胞經(jīng) P D 1， 多肽 刺激后 。 T - b e t 和 G A T A ． 3的表達(dá)量均有不同程度的 升高( P< 0 ． 0 5 ) 。在質(zhì)粒 P D T R P

27、t G M ． C S F 免疫組中，G A T A 一 3 的升高較 T - b e t 更為明顯( P< 0 ． 0 5 ) 。這表 明 G M — C S F 使抗原化抗體基因免疫誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答 向 T H 2 方向 偏移， 即以體液免疫應(yīng)答為主( 圖4 ) 。討 論 隨著分子生物學(xué)和免疫學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展， 基 因免疫作為一種新型的免疫技術(shù)和手段誘導(dǎo)以T ． 1¨ ¨如 ¨0■ l 維普資