奶粉中三聚氰胺的測(cè)定文獻(xiàn)綜述

1、高效液相色譜(HPLC-UV)法測(cè)定奶粉中 三聚氰胺的含量摘要：本文介紹了三聚氰胺對(duì)人體的危害，不法廠家向乳制品中摻入三聚氰胺的原因以及各種檢測(cè)奶粉中三聚氰胺含量的方法，包括液相色譜-紫外法，氣相色譜-質(zhì)譜法，熒光光譜法，電化學(xué)方法，毛細(xì)管電泳法等。關(guān)鍵詞：三聚氰胺；奶粉；液相色譜；熒光光譜；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用；三聚氰胺：三聚氰胺(melamine)化學(xué)式為C3H6N6，是一種三嗪類含氮雜環(huán)有機(jī)化合物，俗稱密胺、蛋白精。三聚氰胺的危害以

2、及不法廠家摻入三聚氰胺的目的：2008年9月發(fā)生了“毒奶粉”事件，很多生產(chǎn)奶粉的公司非法向奶粉中添加三聚氰胺以提升奶粉中的氮含量。由于三聚氰胺(含氮量66%)與蛋白質(zhì)(平均含氮量16%)相比含有更高比例的氮元素，所以被一些不法分子利用，添加在食品中以造成食品蛋白質(zhì)含量較高的假象。由于當(dāng)時(shí)國(guó)家使用的蛋白質(zhì)中氮含量的測(cè)定方法是凱氏定氮法通過樣品消解將樣品中所有氮元素轉(zhuǎn)化為氨，通過H2SO4或HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行滴定，所以無法區(qū)分蛋白質(zhì)氮和非蛋

3、白質(zhì)氮，摻入三聚氰胺可以提升氮含量從而達(dá)到提升“蛋白質(zhì)含量”的目的[2]。然而三聚氰胺對(duì)人體是有危害的，尤其奶粉是給小孩子吃的，危害更大。大劑量的三聚氰胺導(dǎo)致當(dāng)時(shí)很多食用奶粉的嬰幼兒出現(xiàn)泌尿系結(jié)石。研究表明，三聚氰胺對(duì)腎小球、腎小管功能有損害, 且年齡越小、服用三聚氰胺污染奶粉時(shí)間越長(zhǎng)損害程度越重[3]。2008 年10 月7 日，衛(wèi)生部等5 部門聯(lián)合發(fā)布公告，確定了乳與乳制品中三聚氰胺臨時(shí)管理限量值（即嬰幼兒配方乳粉中三聚氰胺的限量值

4、）為1 mg/kg，液態(tài)奶(包括原料乳)、奶粉、其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值為2.5 mg/kg。三聚氰胺含量測(cè)定的各種方法：1.高效液相色譜法:1.1.實(shí)驗(yàn)方法：[4]以三氯乙酸-乙腈超聲提取后離心，取上層清液過濾后定容，轉(zhuǎn)移至混合型陽(yáng)離子交換固相色譜柱用氨化甲醇洗脫，50℃下氮?dú)獯蹈?，用流?dòng)相定容，渦旋，過微孔濾膜后供HPLC測(cè)定，測(cè)定條件：C18柱（250mm*4.6mm，5μm），流動(dòng)相為離子對(duì)試劑緩沖溶液-乙腈（90：10）

5、，流速1.0mL/min，柱溫40℃。測(cè)量波長(zhǎng)240nm。1.2.小結(jié)：該法預(yù)處理過程略復(fù)雜；色譜流動(dòng)相添加的離子對(duì)試劑（己烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉等）易與C8 或C18 柱形成化學(xué)結(jié)合，所以柱平衡時(shí)間長(zhǎng)，選擇性差；而離子對(duì)試劑的使用將縮小各物質(zhì)間的差異，奶粉中多種物質(zhì)（如水溶性維生素、核酸等）均可與離子對(duì)試劑3.4.小結(jié)：該法的最大特點(diǎn)是檢測(cè)限低，適用于痕量三聚氰胺分析。檢測(cè)限為0.0985μg/kg。線性范圍在0.5~10μg/kg。回

6、收率在95%到96%，符合測(cè)量要求。預(yù)處理過程也比較簡(jiǎn)單，但是反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng)（12小時(shí)），且線性范圍不在測(cè)量奶粉中三聚氰胺含量的范圍內(nèi)。但是線性范圍低，可以稀釋后測(cè)定，所以仍然符合我們的測(cè)量要求。4.高效液相色譜法（改進(jìn)）：[1]4.1.實(shí)驗(yàn)方法：將15.00 g 樣品置于50ml 具塞刻度試管中，加入22 g/L 乙酸鉛溶液5 ml，加入25 ml 甲醇-水溶液（1+1），漩渦混勻，加水至刻度，漩渦混勻，振搖2 min

7、后，過濾，取上清濾液，經(jīng)0.45 μm有機(jī)相濾膜過濾后進(jìn)樣。檢測(cè)條件：鍵合磺酸基的強(qiáng)陽(yáng)離子交換C18 色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），以50 mmol/L 磷酸鹽緩沖溶液+乙腈（70+30）作為流動(dòng)相，流量為1.0 ml/min，柱溫為25 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為240 nm，進(jìn)樣量為20 μl。將三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1.00×10^3 mg/L）用甲醇-水溶液（1+1） 逐級(jí)稀釋得到濃度為0.20、0.

8、50、2.00、5.00、20.00、50.00 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，以峰面積（y）對(duì)濃度（x）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。4.2.小結(jié)：該法檢出限為0.05 mg/kg，線性范圍在0.2～50mg/L。改進(jìn)了國(guó)標(biāo)法，操作較簡(jiǎn)單快速，回收率與靈敏度都較高。適合用于分析乳制品中三聚氰胺殘留量。5.電化學(xué)方法：[7]5.1.實(shí)驗(yàn)方法：先用三氯乙酸溶解牛奶樣品，通過固相萃取提取其中的三聚氰胺。將玻碳電極在含三聚氰胺的牛奶樣品提取液中進(jìn)行循環(huán)伏安法掃描，

9、在0.7V 左右會(huì)出現(xiàn)一對(duì)氧化還原峰。這一對(duì)峰的峰電流的大小與三聚氰胺的含量呈正比，據(jù)此可進(jìn)行三聚氰胺的定量分析。5.2.小結(jié)：此峰電流與三聚氰胺含量在15～345mg/kg 的范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，該方法檢測(cè)三聚氰胺的檢測(cè)限為5mg/kg，測(cè)定方法的回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為97.3%～101.2% 和3.5%～4.5%。檢測(cè)限偏高，標(biāo)準(zhǔn)偏差也偏高。該法主要還是三聚氰胺的定性檢測(cè)，用于定量有點(diǎn)不大合適。6.毛細(xì)管電泳法：[8]6.1.實(shí)驗(yàn)

10、方法：采用高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定，以30mmol/L 磷酸鹽緩沖液(pH5.0)為電泳介質(zhì)，未涂層石英毛細(xì)管(75μm× 78cm，有效長(zhǎng)度70cm)為分離通道，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)240nm，分離電壓10kV。6.2.小結(jié)：在10.0～50.0μg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9992。平均加標(biāo)回收率為97.04%，平均RSD 為1.24%(n=3)。該法快速簡(jiǎn)便，線性范圍略偏高，標(biāo)準(zhǔn)偏差較小，可以用于三聚氰胺含量的定量分析。7