利用細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和通訊機(jī)制檢測(cè)胰高血糖素和皮質(zhì)醇.pdf

1、本論文共分為三部分： 第一章我們通過(guò)雙酶催化熒光分光光度計(jì)的方法實(shí)現(xiàn)了對(duì)葡萄糖的定量測(cè)定。我們運(yùn)用了酶對(duì)底物的高選擇性，GOD-HRP-ADHP反應(yīng)體系催化無(wú)熒光的底物ADHP生成有熒光產(chǎn)物試鹵靈的原理，葡萄糖被葡萄糖氧化酶(GlucoseOxidase,GOD)催化生成過(guò)氧化氫(H<,2>O<,2>)，過(guò)氧化氫和10-乙酰基-3，7，二羥基吩嗪(10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine,ADHP)在

2、過(guò)氧化物酶(HorseradishPeroxidase,HRP)催化下產(chǎn)生熒光產(chǎn)物試鹵靈。在此基礎(chǔ)上，對(duì)激發(fā)波長(zhǎng)、GOD的比活力、HRP的比活力、孵育時(shí)間等方面進(jìn)行了最佳實(shí)驗(yàn)條件的討論：最后在最佳實(shí)驗(yàn)條件下確定了雙酶催化熒光底物檢測(cè)葡萄糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍和檢測(cè)限。 第二章中，我們研究了利用細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制實(shí)驗(yàn)了對(duì)胰高血糖素的定量檢測(cè)。方法原理是：當(dāng)胰高血糖素與細(xì)胞膜上專一性的蛋白質(zhì)受體結(jié)合后，細(xì)胞膜上與受體偶聯(lián)的腺苷酸環(huán)化酶

3、催化ATP分解為cAMP和焦磷酸。由于細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度增高，最終引起糖原分解，使磷酸葡萄糖的含量急劇增加，以葡萄糖的形式釋放到細(xì)胞外。再通過(guò)雙酶(GOD-HRP-ADHP)催化反應(yīng)測(cè)定肝細(xì)胞釋放的葡萄糖測(cè)定溶液中的胰高血糖素的濃度。較高的細(xì)胞密度可以獲得較高的信號(hào)放大倍數(shù)。以細(xì)胞密度為1.0×10<'6>個(gè)/mL的細(xì)胞的反應(yīng)體系作為細(xì)胞傳感器時(shí)，胰高血糖素的濃度信號(hào)被放大了約50倍。 第三章中，我們利用細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和通訊機(jī)制實(shí)