豬肉組織中β2-受體激動(dòng)劑殘留檢測(cè)方法研究.pdf

1、β2-受體激動(dòng)劑是一類苯乙胺類藥物，起初主要在臨床上用于治療支氣管哮喘、痙攣，阻塞性肺炎等癥狀，后來發(fā)現(xiàn)當(dāng)把較大劑量的此類藥物添加到飼料中時(shí)，會(huì)大大提高動(dòng)物的瘦肉轉(zhuǎn)化率，具有營養(yǎng)再分配的作用。若長期食用含有β2-受體激動(dòng)劑殘留的食品就會(huì)發(fā)生頭痛，胸悶，惡心等不良反應(yīng)，因此歐盟和我國先后都頒布法令禁止在畜禽生產(chǎn)中使用該類藥物。本研究旨在建立豬肉中β2-受體激動(dòng)劑殘留的超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)確證方法和表面等離子生物傳

2、感器(SPR-biosensor)的篩選方法。
　　 UPLC-MS/MS方法：稱取2.0g勻質(zhì)的樣品經(jīng)酶解后，用高氯酸：甲醇(9:1，v/v)混合溶液除蛋白后，經(jīng)混合型的PCX柱凈化，氮?dú)獯蹈珊螅褂贸跏嫉牧鲃?dòng)相定容到2.0mL。最后經(jīng)過超高效液相色譜電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)。結(jié)果表明，本方法有效的減少了離子抑制現(xiàn)象，沙丁胺醇，萊克多巴胺，鹽酸克倫特羅三種β2-受體激動(dòng)劑的平均回收率都在85％以上，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=3)在2.3-1

3、1％范圍內(nèi)，方法檢出限在0.07-0.12μg/kg，定量限在0.22-0.38μg/kg。
　　 SPR生物傳感器方法：樣品經(jīng)高氯酸提取，乙酸乙酯凈化后，通過分別固定抗原和抗體優(yōu)化了SPR檢測(cè)方法，并對(duì)緩沖液，再生溶液進(jìn)行了優(yōu)化，建立了豬肉中萊克多巴胺的SPR生物傳感器抑制免疫殘留檢測(cè)方法，該方法對(duì)萊克多巴胺的檢出限為0.6μg/kg，在1、2和4μg/kg三個(gè)濃度添加水平下，平均回收率為81％-102％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均在10

4、％以內(nèi)。本方法簡單快速，檢測(cè)時(shí)間為5.0min，與ELISA方法比較，抗體無需標(biāo)記。在相同的前處理?xiàng)l件下，與UPLC-MS/MS相比，雖然檢測(cè)限較高，但回收率和精密度都較好，并且受樣品基質(zhì)的影響小。特別適合大量樣品的快速篩選。與國外方法相比，本研究采用中國科學(xué)院自行研制的SPR-2004生物傳感器及芯片成本低，抗基質(zhì)干擾能力強(qiáng)，具有廣泛的應(yīng)用前景。
　　 本研究所建立的兩種檢測(cè)豬肉中β2-受體激動(dòng)劑殘留檢測(cè)方法，樣品處理簡單，去