新型噻唑烷酮化合物抗腦膠質(zhì)瘤的活性及其作用機制研究.pdf

1、惡性腫瘤嚴重危害人類的健康，腦膠質(zhì)瘤是常見的惡性腫瘤之一，神經(jīng)膠質(zhì)瘤發(fā)生率占神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性腫瘤的78％，發(fā)病人群集中在青少年，復(fù)發(fā)率較高，治愈率低。藥物治療是目前臨床治療腦癌的主要手段之一。尋找和研發(fā)高效低毒的化療藥物，是當代醫(yī)學和藥學的重要研究課題。噻唑烷酮化合物因其具有廣譜的抗癌活性和獨特的生理活性低毒性而日益受到人們重視。
　　 目的：從先期合成的噻唑烷酮類化合物庫中篩選出對人膠質(zhì)瘤細胞具有細胞毒性的化合物，其中ZHY-2

2、06(HBPT，2-(2-苯醚基亞胺基)-5-（2-羥基-苯亞甲基）-1，3-噻唑-4-酮）活性較好，本課題通過對其體外抗腦癌活性以及體內(nèi)對荷瘤小鼠的抗腫瘤活性的研究，從細胞水平探討其抗腫瘤作用機制，并考察HBPT的急性毒性，為研發(fā)噻唑烷酮化合物HBPT作為新型抗腦膠質(zhì)瘤化療藥物提供實驗依據(jù)。
　　 方法：體外采用SRB法評價HBPT抑制人腦膠質(zhì)瘤U87MG細胞增殖；觀察HBPT對小鼠的急性毒性，建立小鼠皮下移植瘤模型，觀察HB

3、PT對人腦膠質(zhì)瘤的實驗治療作用；應(yīng)用流式細胞術(shù)的方法檢測HBPT對膠質(zhì)瘤細胞的凋亡率和分析細胞周期的改變；應(yīng)用免疫熒光和微管聚合實驗檢測化合物對微管的作用；應(yīng)用體外激酶篩選實驗研究化合物的激酶作用靶點。
　　 結(jié)果：
　　 1．SRB法實驗結(jié)果表明：噻唑烷酮化合物HBPT對體外培養(yǎng)的U87MG細胞增殖有較好的抑制作用，48h后U87MG細胞的IC50值約為20μM。對荷瘤小鼠的抗腫瘤實驗結(jié)果顯示，HBPT對腦膠質(zhì)瘤有良好

4、的實驗治療作用，經(jīng)腹腔注射連續(xù)給藥兩周后，40mg/kg/day、60mg/kg/day治療組的抑瘤率分別為：63.61％和73.16％，瘤重與陰性對照組比較均有明顯的顯著性差異(P＜0.01)。
　　 2．與溶劑對照組比較，噻唑烷酮化合物HBPT對荷瘤小鼠的造血系統(tǒng)、組織器官均無明顯差異(P＞0.05)，體重無明顯下降。相對于化療藥物TMZ（替莫唑胺）10mg/kg/day，HBPT抑瘤率較高，體現(xiàn)出一定的優(yōu)勢。
　　

5、 3．流式細胞儀檢測分析表明，HBPT能誘導(dǎo)U87MG腫瘤細胞發(fā)生凋亡，24h、48h早期凋亡占10％左右，細胞周期被阻滯在G2/M期，作用48h后處于G2/M期細胞占總細胞數(shù)的50％左右。電鏡下觀察，HBPT作用于U87MG細胞引起細胞自噬現(xiàn)象的發(fā)生，體外實驗結(jié)果表明自噬在HBPT對U87MG細胞作用過程中保護癌細胞，蛋白質(zhì)印跡試驗表明細胞內(nèi)自噬相關(guān)蛋白的表達水平上升。
　　 4．免疫熒光和體外微管聚合實驗證明HBPT可以抑制

6、微管的聚集，呈劑量時間依賴性；激酶篩選實驗表明化合物HBPT抗腫瘤作用不以激酶為靶標。
　　 5．急性毒性試驗表明HBPT無明顯的急性毒性，對BALB/c小鼠的口服最大劑量(MTD)≧400mg/kg，靜脈注射MTD≧60mg/kg。
　　 結(jié)論：噻唑烷酮化合物HBPT在體內(nèi)外均能有效抑制人腦膠質(zhì)瘤的生長，且無造血器官毒性作用，無明顯急性毒性。HBPT可抑制細胞內(nèi)微管聚集，將細胞阻滯在G2/M期，進而誘導(dǎo)細胞凋亡。HBP