免疫分析法在抗生素和蛋白質檢測中的應用研究.pdf

1、近年來，隨著畜牧業(yè)的快速發(fā)展，獸藥的種類劇增且使用范圍逐漸擴大，隨之而來的動物源性食品中獸藥殘留問題嚴重威脅人類的健康，成為亟待解決的重要課題。蛋白質在生命活動過程中扮演著不可替代的角色，可作為生理功能處于正?；虿±頎顟B(tài)的客觀評價指標物，復雜生物樣品中蛋白質的分離與檢測是蛋白質組學、診斷學及基因學等生命科學研究領域的關鍵技術。實際樣品中獸藥殘留和蛋白質的分離與檢測都面臨著目標化合物含量低、樣品基質復雜等挑戰(zhàn)，因此，探索和發(fā)展快速高效的檢

2、測獸藥殘留和蛋白質的方法十分必要。
　　免疫分析法是一類以抗原-抗體之間特異性親和結合為基礎而建立的分析方法，該類方法具有特異性強、選擇性好、靈敏度高等優(yōu)良特性，已廣泛應用于食品監(jiān)測、藥物檢測、疾病診斷等領域中目標化合物的分離與檢測。本文基于免疫分析法，建立了用于檢測卡那霉素的生物素-親和素放大酶聯(lián)免疫吸附法(BA-ELISA)和用于分離與富集牛血清白蛋白(BSA)的磁免疫親和萃取-熒光光譜法(MIAE-FSA)。具體研究內容如下

3、:
　　(1)制備了卡那霉素多克隆抗體，以生物素-親和素放大系統(tǒng)為基礎建立了BA-ELISA法，用于牛奶和蜂蜜中卡那霉素的檢測。利用單因素分析法對BA-ELISA的實驗條件進行了一系列的考察與優(yōu)化。在最佳實驗條件下，方法的線性范圍為0.3-30 ng mL-1，檢測限和定量限分別為0.07 ng mL-1和0.22 ng mL-1，IC50值為6.48 ng mL-1，對四種卡那霉素類似物的交叉反應率均小于1％。將BA-ELISA

4、法應用于牛奶和蜂蜜實際樣品中卡那霉素的分析檢測，回收率介于91.0％和103.3％之間。將該BA-ELISA法的測定結果與LC-MS/MS法進行對比，兩種方法呈現(xiàn)出較好的相關性(R2＞0.99)。上述結果表明，該方法展現(xiàn)出特異性強、靈敏度高和準確性好等優(yōu)勢，適用于牛奶和蜂蜜實際樣品中卡那霉素的檢測;
　　(2)制備了BSA多克隆抗體，建立了MIAE-FSA法，用于人血清樣品基質中BSA的檢測。實驗通過水熱法、溶膠-凝膠法和戊二醛偶

5、聯(lián)法成功制備了具有核殼結構的免疫磁球（IMMs），將其作為MIAE吸附劑用于BSA的分離與富集，并用FS進行檢測?？疾觳?yōu)化抗體固定化條件，制備的IMMs具有良好的分散性、穩(wěn)定性和磁響應性，抗體在磁球表面的最大固載量為32.2 mg g-1。通過優(yōu)化MIAE條件，該方法對目標蛋白質的最大吸附量為107.7μg g-1，IMMs重復使用10次后，萃取效率保留了80％以上。將該方法應用于人血清樣品基質中BSA的分離與檢測，回收率大于89.3