HPLC-MS-MS法同時(shí)分析血漿中卡培他濱及其代謝物.pdf

1、目的:建立靈敏、專屬、快速的HPLC-MS/MS法，同時(shí)分析血漿中卡培他濱及其代謝物，并用于臨床前藥物動(dòng)力學(xué)研究。
　　方法:測(cè)定5-氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶核苷、5-氟去氧尿苷、5-氟尿嘧啶脫氧核苷酸、卡培他濱、5'-脫氧-5-氟胞苷、5'-脫氧-5-氟尿苷的血藥濃度時(shí)，50μL血漿樣品經(jīng)蛋白沉淀處理后，上清液在40℃條件下經(jīng)過(guò)氮?dú)獯蹈?，用?0.1％甲酸復(fù)溶，以水-0.1％甲酸為水相，甲醇-0.1％甲酸為有機(jī)相，流速為0.8 m

2、L/min，菲羅門Luna PFP(50×4.6 mm，3μm)色譜柱進(jìn)行梯度洗脫分離。采用API-4000型三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀，電噴霧電離源(ESI)，選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)(SRM)，負(fù)離子方式檢測(cè)，用于定量分析的離子反應(yīng)分別為m/z129.1→m/z42.1（5-氟尿嘧啶），m/z261.1→m/z171.1（5-氟尿嘧啶核苷），m/z245.3→m/z155.1（5-氟去氧尿苷），m/z325.1→m/z129.1（5-氟尿嘧啶脫氧核苷

3、酸），m/z358.2→m/z153.9（卡培他濱），m/z244.1→m/z128.1（5'-脫氧-5-氟胞苷），m/z245.1→m/z129.0（5'-脫氧-5-氟尿苷）和m/z145.1→m/z42.1（內(nèi)標(biāo)，5-氯尿嘧啶）。
　　結(jié)果:本方法測(cè)定5-氟尿嘧啶的定量范圍為10.0-1000 ng/mL;5-氟尿嘧啶核苷、5-氟去氧尿苷、5-氟尿嘧啶脫氧核苷酸、卡培他濱、5'-脫氧-5-氟尿苷的定量范圍為5.00-1000

4、ng/mL;5'-脫氧-5-氟胞苷的定量范圍為20.0-1000 ng/mL。測(cè)定5-氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶核苷、5-氟去氧尿苷、5-氟尿嘧啶脫氧核苷酸、卡培他濱、5'-脫氧-5-氟胞苷、5'-脫氧-5-氟尿苷在人血漿中的日內(nèi)、日間精密度(RSD)分別小于9.3％，5.7％，7.4％，6.9％，8.2％，11.3％，10.8％。測(cè)定準(zhǔn)確度(RE)分別在-4.2％～4.8％,-0.6％～5.9％,0.5％～5.5％,-1.3％～8.0％,

5、-3.8％～6.7％,0.8％～5.4％,-3.2％～4.1％范圍內(nèi)。測(cè)定上述化合物在大鼠血漿中的日內(nèi)、日間精密度(RSD)分別小于11.6％，10.7％，10.2％，10.6％，7.9％，8.8％，9.8％。測(cè)定準(zhǔn)確度(RE)分別在-3.2％～-2.1％，1.6％～4.3％，-3.1％～2.8％，-2.1％～5.2％，-2.7％～5.7％，1.8％～1.9％，4.9％～7.5％范圍內(nèi)。
　　結(jié)論:所建立的HPLC-MS/MS法靈