HPLC-MS-MS檢測血中BPDE-dG加合物方法的建立及人群生物監(jiān)測.pdf

1、BPDE-DNA加合物是多環(huán)芳烴(PAHs)在體內活化代謝的產物，在化學致癌過程中處于核心地位。若體內形成的BPDE-DNA加合物不能被機體及時修復，將引起基因突變，導致遺傳的不穩(wěn)定，最終誘發(fā)癌癥。因此，BPDE-DNA加合物作為一種重要的暴露生物標志物，對研究環(huán)境和職業(yè) PAHs暴露的致癌機制以及健康風險評價都具有十分重要的意義。
　　常用的DNA加合物檢測方法包括：32P-后標記法、免疫分析法、色譜-質譜聯(lián)用法。其中，HPLC

2、-MS/MS方法具有高通量、高靈敏度、高特異性的特點，可以同時定性定量檢測微量的BPDE-DNA加合物，適用于評價環(huán)境和職業(yè)暴露 PAHs的健康風險。因此，建立和優(yōu)化高特異性、高靈敏度、高通量的HPLC-MS/MS檢測 BPDE-DNA加合物的方法，能夠為開展PAHs環(huán)境和職業(yè)暴露的生物監(jiān)測以及健康風險評估提供方法學支持。
　　本文采用水飽和正丁醇的萃取方法，通過優(yōu)化 HPLC-MS/MS建立了檢測臍帶血中BPDE-DNA加合物的

3、方法。該方法利用[15N5]BPDE-dG作為內標，采用化學合成的BPDE-dG作為外標，定性和定量分析臍帶血中BPDE-dG加合物。該方法靈敏度高、特異性強，適用于大量人群樣本的生物監(jiān)測和分子流行病學研究。本實驗的研究內容主要包括以下4個方面：
　　1、標準品的合成、純化和定量：分別合成 BPDE-dG加合物和[15N5]BPDE-dG加合物作為外標和內標。采用HPLC純化合成的標準品，用紫外分光光度計對純化后的標準品進行定量。

4、
　　2、臍帶血前處理方法和HPLC-MS/MS條件的建立和優(yōu)化：采用脫氧核糖核酸酶、磷酸二酯酶和堿性磷酸酶酶解DN A，結合液液萃取方法，富集臍帶血中 BPDE-dG加合物。采用多反應監(jiān)測(SRM)方法，建立檢測臍帶血中BPDE-DNA加合物的方法。該方法與現(xiàn)有方法比較，DNA用量少，通常需要10μg DNA，最低可以檢測5μg DNA，靈敏度較高，該方法檢測限為：每109個dG中可檢測出2.7個BPDE-dG加合物。該方法具有

5、簡便易行、回收率高的特點，回收率為97％~112%。
　　3、該方法用于孕婦臍帶血中BPDE-dG加合物的檢測：42個出生缺陷新生兒母親臍帶血和42個隨機選擇的正常新生兒母親臍帶血來自淮河流域重點地區(qū)出生缺陷研究隊列。
　　研究結果顯示：
　?。?）LC-MS/MS檢測方法應用于檢測臍帶血中BP DE-dG加合物，該方法檢測精度、重現(xiàn)性均滿足檢測要求，與現(xiàn)有方法比較，該方法僅需要較少量生物樣品，一般需要10μg DNA

6、，最低可以檢測5μg DNA，適用于大量人群的生物監(jiān)測和分子流行病學研究。（2）將出生缺陷新生兒和正常新生兒母親臍帶血進行分層，按照孕婦居住鄉(xiāng)鎮(zhèn)在污染高聚集區(qū)（一般距離河較近）和污染低聚集區(qū)（一般距離河較遠）進行分層。臍帶血中∑PAHs和BaP暴露水平病例組高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義。6種∑PAHs和BaP暴露水平和及BPDE-dG加合物含量均高于對照組，在污染高聚集區(qū)∑PAHs和BaP暴露水平病例組和對照組比較有統(tǒng)計學差異。（3）臍