基于MUC1糖肽抗腫瘤疫苗的設(shè)計、合成與免疫評價.pdf

1、腫瘤是嚴重威脅人類健康的一種疾病，近年來隨著人們工作壓力的增大和生存環(huán)境的惡化，腫瘤患者逐年增加。腫瘤的免疫療法與傳統(tǒng)的腫瘤治療方案手術(shù)治療、化學治療和放射治療相比，是一種新興的腫瘤治療方法。它是指機體運用自身的免疫系統(tǒng)來抑制或殺滅腫瘤細胞，被認為是腫瘤治療領(lǐng)域最有希望治愈腫瘤的一種方法。治療性腫瘤疫苗是腫瘤免疫療法的一個重要方向，近年來成為人們研究的熱點。在腫瘤疫苗中，MUC1糖蛋白由于其在正常細胞和腫瘤細胞中表達的差異性，成為重要的

2、抗原靶標。但是MUC1糖肽抗原的免疫原性較弱，為了增強其免疫原性，需要將其與免疫刺激因子相連。本論文中為增強MUC1糖肽的免疫活性，做了探索性的研究工作。
　　脂多肽FSL-1是Toll樣受體TLR2/6的配體，在體內(nèi)能活化巨噬細胞，進而產(chǎn)生炎癥細胞因子。研究表明FSL-1和腫瘤相關(guān)抗原一起使用將表現(xiàn)出抗腫瘤活性，而FSL-1單獨使用有促腫瘤活性。為了增強MUC1糖肽抗原的免疫原性，將FSL-1與MUC1糖肽通過共價鍵結(jié)合，合成得

3、到的疫苗表現(xiàn)出很強的免疫活性，并且避免了外源性佐劑的使用。
　　超分子自組裝由于其結(jié)構(gòu)多樣性，在組織工程與藥物傳輸中有很多應(yīng)用。以超分子自組裝多肽Nap-GDFDFDYDK為前體分子，通過與MUC1糖肽共價相連，合成得到了自組裝、自身佐劑疫苗。該自組裝多肽在疫苗中既是抗原的多價載體，也起到了佐劑的效果。
　　α-GalCer是一類可以與CD1d蛋白強力結(jié)合的半乳糖苷脂，被CD1d分子提呈后，繼而與NKT細胞表面的TCR結(jié)合，

4、誘導細胞毒性并分泌大量Th1型和Th2型免疫效應(yīng)因子，有效刺激NKT和NK細胞的增殖，進而引發(fā)機體的一系列免疫調(diào)節(jié)反應(yīng)。與Toll祥受體激動劑相比，具有更強的免疫輔助能力?；贛UC1糖肽抗原自身的免疫原性比較弱，設(shè)想利用糖脂α-GalCer的免疫刺激作用，來增強MUC1疫苗的免疫原性。為了獲得更好的免疫原性，以金納米顆粒（AuNP）為多價載體，將MUC1和α-GalCer通過S-Au鍵強作用力共同連在AuNP上，得到了AuNP為多價載

5、體的疫苗。免疫結(jié)果顯示，該類疫苗產(chǎn)生了較高的抗體滴度。同時，發(fā)現(xiàn)在該類疫苗中抗原與佐劑的比值越高，抗原滴度越高。
　　MUC1糖肽免疫原性較低的一個重要原因是MUC1來源于機體自身，機體對其有免疫耐受?；诖耍x取了MUC1串聯(lián)重復片段的免疫顯性區(qū)域PDTRPAP，設(shè)計合成其線性三價糖肽片段，并將其與載體蛋白BSA偶聯(lián)。通過這種設(shè)計，會有以下兩個作用:一是由于多價效應(yīng)，線性三價糖肽可能會與APC有更強的結(jié)合作用，進而取得更好的免疫

6、原性;二是，新設(shè)計合成的糖肽片段是非天然的，可能會打破機體的免疫耐受，進而增強其免疫原性。初步免疫結(jié)果顯示，此類疫苗產(chǎn)生了很高的抗體滴度。
　　腫瘤相關(guān)糖抗原（如Tn，TF）的合成是制備腫瘤疫苗的基礎(chǔ)。針對腫瘤相關(guān)糖抗原合成中遇到的難點，做了一些優(yōu)化性的嘗試。首先針對化學合成糖抗原TF及其唾液化的形式，步驟長，產(chǎn)率低的缺點，運用糖的化學酶法合成策略大大簡化了實驗步驟，并提高了產(chǎn)率;其次針對合成Tn抗原糖苷鍵立體選擇性低的問題，發(fā)展