食用菌中漆酶基因的克隆及乳酸菌電激轉(zhuǎn)化體系的建立.pdf

1、青貯飼料是發(fā)展畜牧業(yè)的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，乳酸菌決定了青貯飼料的質(zhì)量，隨著我國畜牧產(chǎn)業(yè)的迅速發(fā)展，對(duì)青貯飼料的需求量也逐漸增大，提高飼料的利用率是解決飼料不足的關(guān)鍵。漆酶對(duì)包裹在纖維素外的木質(zhì)素具有很強(qiáng)的降解能力，有利于纖維素充分的降解。近年，對(duì)于漆酶的降解功能受到越來越多的關(guān)注，因此本文以布氏乳桿菌為試驗(yàn)材料，采用生物物理技術(shù)引入漆酶基因擬構(gòu)建新型乳酸菌。以期該菌的代謝產(chǎn)物中既有乳酸又有漆酶，故而既提升了飼料的品質(zhì)也提高了飼料的利用率。

2、r>　　本課題主要結(jié)論如下:
　　1、選取多種食用菌為試驗(yàn)材料，依據(jù)RB亮藍(lán)變色強(qiáng)度從中挑選三種食用菌，采用ABTS法定量測(cè)定三種食用菌的漆酶活性，杏鮑菇的酶活性為324.07U/L，平菇的酶活性為43.98U/L，白靈菇的酶活性為17.36U/L，即漆酶活性由高到底分別為杏鮑菇、平菇、白靈菇。
　　2、根據(jù)側(cè)耳科漆酶基因共同保守序列設(shè)計(jì)引物，采用PCR方法獲得了三種典型木腐食用菌（白靈菇、杏鮑菇、平菇）漆酶的基因序列，擴(kuò)增

3、得到的片段長(zhǎng)度均為2606 bp(GeneBank注冊(cè)號(hào)分別為KC789845、KC789846、KC789847)通過對(duì)基因序列的內(nèi)含子/外顯子分析，得出漆酶編碼區(qū)的cDNA序列，該基因的開放閱讀框由1596個(gè)核苷酸組成，編碼一個(gè)由531個(gè)氨基酸組成的多肽，預(yù)測(cè)杏鮑菇、平菇、白靈菇漆酶蛋白分子量分別為56682.0、56692.0、56727.1，等電點(diǎn)偏酸性，pI均為4.56，均含有9個(gè)可能的N-糖基化位點(diǎn)(Asn-Xaa-Thr/