膠束毛細管電動色譜用于柱前衍生氨基酸的分離研究.pdf

1、氨基酸是生命有機體的重要組成部分，其分離分析已成為研究的熱點之一。衍生法與色譜法結(jié)合具有高靈敏度、低檢測限和簡便可靠等特點，在氨基酸生物學研究中將倍受重視。
　　 在毛細管電泳(CE)的模式中，膠束毛細管電泳(MEKC)具有分離中性物質(zhì)的能力，其分離能力的改善主要依靠緩沖溶液組成和性質(zhì)。多種表面活性劑和添加劑的運用與修飾，使得MEKC在生物、化學、醫(yī)藥、食品等領(lǐng)域中獲得了廣泛的應(yīng)用。
　　 本論文圍繞膠束毛細管電泳，采用

2、三種新型柱前衍生試劑，開展了氨基酸衍生產(chǎn)物的膠束毛細管電泳方法研究，主要取得了以下幾方面創(chuàng)新性成果：
　　 1、采用一種新型標記試劑N-乙酰苯磺酰氟作為氨基酸柱前衍生試劑，進行了衍生條件的優(yōu)化，研究以硼砂-Tris二元緩沖體系為背景電解液，考察了緩沖液的pH值和離子強度、表面活性劑十二烷基硫酸鈉(SDS)濃度、有機改性劑種類及分離電壓等幾個關(guān)鍵條件的影響，實驗結(jié)果：采用40 mmol·L-1硼砂-Tris(1:1)緩沖液(pH9

3、.3)、添加140 mmol·L-1的SDS、5％甲醇及10 mmol·L-1三乙胺作為最適分離體系，建立了以硼砂-Tris為背景電解液分離16種N-乙酰氨基苯磺酰氟氨基酸衍生物的毛細管電泳新方法；
　　 2、采用一種新型標記試劑鄰硝基苯磺酰氯作為柱前衍生試劑，在毛細管膠束電動色譜中引入SDS和手性表面活性劑脫氧膽酸鈉SDC混合型膠束的作用模式，建立了分離20種氨基酸衍生物的新方法。研究以硼砂緩沖體系為背景電解液，考察了緩沖液的

4、pH值和離子強度、SDS和SDC的濃度及有機改性劑甲醇的含量等幾個關(guān)鍵因素的影響，實驗結(jié)果表明：采用50 mmol·L-1硼砂緩沖液(pH9.0)、140 mmol·L-1的SDS、20 mmol·L-1的SDC、10 mmol·L-1NaCl及7％甲醇作為最適分離體系，20種鄰硝基苯磺酰氯氨基酸衍生物達到基線分離；
　　 3、采用對甲基苯磺酰氯作為柱前衍生試劑，利用SDC在膠束電動毛細管中與SDS的協(xié)同作用，建立了毛細管膠束電

5、動色譜用于氨基酸衍生產(chǎn)物的分離新方法。實驗結(jié)果表明：采用40 mmol·L-1硼砂緩沖液(pH9.0)、140 mmol·L-1的SDS、20 mmol·L-1的SDC及7％甲醇的分離條件可使20種對甲基苯磺酰氯氨基酸衍生物基線分離；
　　 4、建立了D-γ-谷氨酰-色氨酸合成體系，綠豆蛋白酶解液的水解產(chǎn)物體系，以及玉米漿發(fā)酵液體系中氨基酸分析物的定性定量HPCE檢測的新方法，證明了該種毛細管膠束電動色譜新模式下分離檢測氨基酸類