氨基酸柱前衍生化HPLC方法發(fā)展及應(yīng)用.pdf

1、氨基酸是蛋白質(zhì)的基本單元，是人體完成生理功能的必須物質(zhì)。發(fā)展普適性廣、靈敏度高、分離效能好、重復性優(yōu)良的HPLC分析方法，一直是分析化學領(lǐng)域探索的重要課題。 分別以鄰苯二甲醛（OPA）及2,4-二硝基氟苯（DNFB）為衍生化試劑，發(fā)展氨基酸的柱前衍生HPLC分析方法?？疾炝酥鶞亍⒀苌噭┯昧?、反應(yīng)時間及流動相pH值等因素對分析結(jié)果的影響。結(jié)果表明，柱溫對分離選擇性的影響很大，改變柱溫甚至可能影響到氨基酸DNFB衍生產(chǎn)物（DNP-

2、AA）的出峰順序；衍生反應(yīng)時間對OPA衍生氨基酸的定量分析影響顯著。 為彌補單一色譜填料分離選擇性的不足，通過對DNP-AA在6種不同C18填料上分離行為的考察，發(fā)展了“串聯(lián)”和“混裝”的色譜柱模式。采用C18-B與C18-SA串聯(lián)的操作模式，可以使DNP-AA的分離選擇性得到較大改善。而以C18-B和C18-SA填料混合裝填色譜柱進行DNP-AA的分離，所得峰形、柱效等更佳。 基于發(fā)展的新方法，測定了啤酒、冬蟲夏草等實