簡介：四川師范大學(xué)碩士學(xué)位論文高中生生物學(xué)自我監(jiān)控學(xué)習(xí)能力現(xiàn)狀研究姓名李明軍申請學(xué)位級別碩士專業(yè)學(xué)科教學(xué)論（生物）指導(dǎo)教師徐作英20060601四川師范大學(xué)碩士學(xué)位論文3高中生性別與生物學(xué)自我監(jiān)控學(xué)習(xí)能力沒有顯著性差異。4高中生生物學(xué)學(xué)業(yè)成績與生物學(xué)自我監(jiān)控學(xué)習(xí)能力有顯著性差異。①高二、高三學(xué)生生物學(xué)成績與生物學(xué)自我監(jiān)控學(xué)習(xí)能力有差異；但差異并不完全相同。②高二、高三成績優(yōu)、中、差生與自我監(jiān)控學(xué)習(xí)能力的關(guān)系差異不同。關(guān)鍵詞自我監(jiān)控學(xué)習(xí)能力高中生生物學(xué)

簡介：分類號L一坩【密級Ⅲ刪_|I_|_】||I|I|I|川Ⅷ㈣Y3245025單位代碼學(xué)號1031220141849南京醫(yī)針犬掌碩士學(xué)位論文題目塹型噬Z控劍劑璉題厘擅緝胞壘塹堂盈艟數(shù)受蛔研究生指導(dǎo)教師學(xué)科專業(yè)學(xué)院名稱完成時間籃至態(tài)__工蕉述2處盟芏L益絲鹽整2直塞匡筮盤堂瞪屜絲塞筮二?？锿齉二生亙復(fù)南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人夭|5重聲明所呈躉的論文是本人征導(dǎo)帥的指導(dǎo)卜，獨立進行研冗工作所取得的成果。除了文中特別加以標注引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫的成果作品。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均己在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律后果由本人承擔(dān)。作者簽名繕上起日期加F7年6月歹日導(dǎo)師簽名7。2／釗擴日期沙，7年石月歹日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南京醫(yī)科大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于請在以下相應(yīng)方框內(nèi)打“√”1、保密口，在一年解密后適用本授權(quán)書。2、不保密作者簽名銘冬衛(wèi)匙日期Z口／7年／月歹日翮躲7馴眺秒年多月廠日

簡介：南京師范大學(xué)碩士學(xué)位論文高中生物學(xué)教材內(nèi)容結(jié)構(gòu)的比較及調(diào)查研究姓名宋華申請學(xué)位級別碩士專業(yè)學(xué)科教學(xué)生物指導(dǎo)教師汪忠20070423南京帥范大學(xué)碩士學(xué)位論文ABSTRACTWHENTALDNGACOMPREHENSIVEVIEWOFTHEREFORMATIONINCHINESEANDFOREIGNCOURSES，PEOPLEALWAYSPUTTHEREFORMATIONOFTEACHINGMATERIALINALLOUTSTANDINGPOSITION．BUTTHECONSTRUCTIONOFTEACHINGMATERIALISITSLIFEVEIN．ONLYTHROUGHUNDERSTANDINGTHECONSTRUCTIONOFTEACHINGMATERIALINADEEPGOINGWAYCAILPEOPLEHAVEADEEPUNDERSTANDINGOFTEACHINGMATERIAL．THISSNBIECTEMPLOYSTHEMETHODOFANALYSISOFLITERATURE。THEMETHODOFANALYSISOFSTATISTICSANDTHEMETHODOFINVESTIGATIONANDSTUDY,THEMETHODOFANALYSISOFCASESETC．THERESEARCHTARGETSARETHESTANDARDTEACHINGMATERIALPUBLISHEDBYTHEPEOPLE’SPUBLISHINGHOUSEGUIDEDANDCOMPILEDBYTHECOURSESTANDARDANDTHEOUTLINETEACHINGMATERIALGUIDEDANDCOMPILEDBYTHEOUTLINEOFTHETEACHINGMATERIAL．FIRSTLY，TWOTEXTBOOKSARECOMPAREDWITHTHESURFACELAYEROFTHECONTENTSANDSTRUCTUREOFTEACHINGMATERIALSANDTHEDEEPLAYEROFTHEM．THENCONCRETEITEMSANDCOMPREHENSIVEITERNSOFHOWTEACHERSUSEDTWOSETSOFTEXTBOOKSAREINVESTIGATEDFROMTHEPRACTICALLEVEL．THERESEARCHRESULTSAREASFOLLOWS1．AFTERTWOSETSOFTEXTBOOKSWERECOMPARED，PEOPLECOULDKNOWTHETWOSETSOFTEXTBOOKSWEREBASICALLYCOMPILEDACCORDINGTOTHEDEMANDSOFTHECOURSESTANDARD．BELOWARETHEIRSPECIALFEATURESTHEYHELPEDTOSETUPTHENEW，MOREVIVIDKNOWLEDGESYSTEM．NESELECTIONOFCONTENTS，ALSOREFLECTEDTHEBASIC,ADVANCED，DIVERSIFIEDANDINDIVIDUALCHARACTELS．NEVLAIDSTRESSONPENETRATINGTHEEDUCATIONTHOUGHTOFS“IS．ANDITATTACHEDIMPORTANCETOBLENDINGTHEEDUCATIONOFTHEEMOTION,ATTITUDEANDVALUEWITHTHECONTENTSOFTHETEACHINGMATERIAL．THEMOTIVATIONOFSTUDYWASDRIVENBYASKINGQUESTIONSANDTHEABILITYWASEXPLOREDANDCULTIVATEDALLTHETIME．ABUNDANTTOPICS，DIAGRAMSCOMBINEDWITHTEXTS．CONCISEANDVIVIDLANGUAGEHELPEDINCREASETHEREADABILITYOFTHEARTICLE．2．ACCORDINGTOTHETEACHERS’QUESTIONNAIRE，THEMOSTTEACHERSCOULDACCEPTTHEVARIETYOFTHETEACHINGMATERIALS，WHICHEXPLAINEDTHESETEACHERSCOULDACCEPTANDAPPROVEOFTHEPRINCIPLESOFTHECOARSE．BUTSOMEITEMSINTHERESEARCHALSOSHOWEDTHATTHEREWERETOOMANYRESTRICTEDFACTORSWHENTHETEACHINGMATERIALWASPUTINTOPRACTICE．3．IT’SSUGGESTEDTHATIT’SNECESSARYTOENHANCETHECONTINUOUSTRAININGOFTHEPOSTANDTOCHANGETHETEACHERS’IDEAWHENTHETEACHINGMATERIALOFTHECURRICULUMSTANDARDSISCARRIEDOUT．MEANWHILE．IMPROVINGTEACHERS’PROFESSIONALABILITYISNEEDED．BUTDONOTBEFORMALISTIC．CHANGINGTHESIN百ETEACHINGMODEANDREALIZINGTHREELATITUDINALTEACHINGTARGETSAREALSOREQUIRED．THECURRENTTEACHINGFACILITIESAREFULLYUSED．EFFORTSAREMADETODEVELOP．MAKEANDTAKEADVANTAGEOFTHERESOURCESOFTHECOURSETOTRYTOREALIZEREALVALUEOFTHENEWCURRICULUMS．THEREAREALOTOFSHORTAGES，ASWELLASADVANTAGESINEACHCAITIONOFTEACHINGMATERIALS．FROMTHEASPECTOFIMPLEMENTATION，IT’STHEBESTWAYTOSOLVEITBYTEACHINGWITH“THETEACHINGMATERIAL”．ITISIMPORTANTANDURGENTTOESTABLISHTHERELEVANTSYSTEMOFEVALUATION．WHICHCAL】HELPSOLVETHERESTRICTEDFACTORWHENTHE．TEACHINGMATERIALISPUTINTOPRACTICE．ATTHESAMETIME．THECOURSEPRINCIPLEGUARANTEESTOBEFULFILLED．KEYWORDTEACHINGMATERIALCOMPARISONRESEARCHCURRICULUMSTANDARDINVESTIGATIONANDSTUDYⅡI

簡介：廣西醫(yī)科大學(xué)GUANGXIMEDICALUNIVERSITY【IIIIIIIHIIIIIIIIHLIIIIIIIIIIY3246283學(xué)號2L320831碩士學(xué)位論文人舌癌阿霉素耐藥細胞系的克隆形態(tài)觀察及克隆生物學(xué)特性的研究導(dǎo)師姓名姚金光龐子燕申請學(xué)位類型專業(yè)型學(xué)位答辯委員會主席王代友答辯委員會委員鄺曉聰廖明華龍喜帶陳秉樸專業(yè)名稱口腔醫(yī)學(xué)基本情況姓名龐子燕民族漢族籍貫廣西欽州市學(xué)習(xí)工作經(jīng)歷起止時間20089201362013920166個人簡歷性別女出生年月1989年11月政治面貌中共黨員所在院?；騿挝粚W(xué)歷學(xué)位湖北醫(yī)藥學(xué)院口腔醫(yī)學(xué)院學(xué)士廣西醫(yī)科大學(xué)碩士研究生期間臨床工作經(jīng)歷起止時間單位2014022420140831右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院牙體牙髓科2014090120140930右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院口腔黏膜科2014100120150331右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院牙周科2015。040120150630右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院兒童口腔科201507012015103L右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院口腔頜面外科2015110120160430右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院口腔修復(fù)科2016050120160630右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院口腔頜面外科賺無無無無無無無

簡介：長鏈非編碼MALAT1對胰腺導(dǎo)癌生物學(xué)功能影響及其機制的研究博士學(xué)位論文1長鏈非編碼MALAT1對胰腺導(dǎo)癌生物學(xué)功能影響及其機制的研究博士學(xué)位論文3

簡介：ATHESISDISSERTATIONSUBMITTEDTOZHENGZHOUUNIVERSITYFORTHEDEGREEOFDOCTORPROTEOMICAPPROACHESFORTHEBIOLOGICALCOLLABORATIVENETWORKSOFHEPATOBLASTOMABYMINGYUESUPERVISORJIAXIANGWANGPEDIATRICSURGERYTHEFIRSTAFFILIATEDHOSPITALOFZHENGZHOUUNIVERSITYMAY2016摘要蛋白質(zhì)組學(xué)對肝母細胞瘤生物學(xué)協(xié)同網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建的研究摘要1研究背景與研究目的肝母細胞瘤是一種常見的多能干細胞分化的肝臟腫瘤，研究顯示肝母細胞瘤患者的生存率都隨著其分期的升高而下降。目前常用的診斷、判斷預(yù)后的血清標志物是甲胎蛋白，但在多種疾病及正常新生兒、小嬰兒中均升高，特異性較低。由此可見，利用現(xiàn)有的實驗技術(shù)尋找一種高特異性、高敏感性的肝母細胞瘤早期檢測方法迫在眉睫。蛋白質(zhì)組學(xué)在腫瘤中的研究可以用于疾病早期診斷、療效監(jiān)測和預(yù)后判斷等方面。目前，已有成功檢測出腎母細胞瘤、卵巢癌、乳腺癌等癌癥的生物學(xué)標記物。本研究組前期應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)對腎母細胞瘤血清、瘤體組織進行了深入的研究，研究得出的生物學(xué)標記物目前已進入動物實驗階段，試驗結(jié)果初步表明蛋白質(zhì)組學(xué)可篩選、鑒定出可靠的高特異性、高敏感性標記物；本實驗室前期蛋白質(zhì)組學(xué)已初篩出肝母細胞瘤的血清生物標記物，本研究進一步細化分組，深入研究，驗證前期試驗結(jié)果，并對該標記物在不同分期、不同手術(shù)方式、不同診療階段患者的血清學(xué)生物表達，迸一步研究該標記物與肝母細胞瘤的關(guān)系及對腫瘤的影響。2材料與方法21實驗材料本課題選取肝母細胞瘤患者血清樣本294例份，健康對照組血清80例份。分為術(shù)前組根據(jù)PRETEXT分期I期10例，II期17，III期38例、IV期15例、術(shù)后組、化療組、治愈組、復(fù)發(fā)組。取材條件晨起、空腹、外周靜脈血5ML，4。C下靜置LH，3000R／MIN離心15MIN，取上清液。所有病理結(jié)果均經(jīng)過兩次病理學(xué)檢驗無誤。

簡介：近年來心血管類疾病發(fā)病率逐年升高，成為威脅人類健康的三大疾病之一，心血管疾病領(lǐng)域的研究備受關(guān)注。心肌梗死、心力衰竭等心血管類疾病，其病程發(fā)展到一定階段后，都出現(xiàn)了不同程度的心肌纖維化這樣的共同病理改變，導(dǎo)致心臟剛度增加，進而影響心肌成纖維細胞的增殖，促進心肌纖維化的發(fā)生，最終導(dǎo)致心力衰竭。本研究在體外模擬基底不同力學(xué)環(huán)境，并探討其對心臟成纖維細胞增殖分化的影響，以期為認識心肌纖維化等疾病發(fā)生發(fā)展的病因及可能的治療新策略提供實驗依據(jù)。探討了在基底不同剛度下心肌成纖維細胞的黏附形態(tài)及增殖分化。制作不同配比的聚丙烯酰胺水凝膠（PAHG），通過改變交聯(lián)劑甲叉雙丙烯酰胺濃度，分別制作01％、03、05、06不同剛度的PAHG基底，研究心肌成纖維細胞在不同剛度的PAHG基底和玻璃基底（STIFF）上，細胞形態(tài)、增殖、分化等生物學(xué)響應(yīng)。結(jié)果顯示，大鼠乳鼠心肌成纖維細胞在01，03基底（小于心臟楊氏模量，模量約為310KPA）上培養(yǎng)，并不利于其黏附和增殖，心肌成纖維細胞基本沒有分化；在05，06（接近心臟楊氏模，模量為1220KPA）基底上培養(yǎng)，剛度更大的STIFF基底（遠大于心臟楊氏模量，模量約為GPA級）上培養(yǎng)，細胞能迅速適應(yīng)基底剛度，并快速黏附和增殖，隨著基底模量的增加心肌成纖維細胞向肌成纖維細胞分化明顯，在STIFF基底上，心肌成纖維細胞幾乎全部分化為肌成纖維細胞。實驗數(shù)據(jù)分析顯示01和03基底間增殖率差異顯著，P005；01，03分別與05，06基底間增殖率差異極顯著，P在心肌成纖維細胞對基底剛度響應(yīng)的研究基礎(chǔ)上，探討與細胞增殖分化相關(guān)的信號通路，以期通過阻斷相關(guān)信號分子表達起到干預(yù)心肌成纖維細胞增殖的目的。進一步工作將開展三維力學(xué)環(huán)境對心肌成纖維細胞增殖分化的研究，三維環(huán)境更接近于機體內(nèi)真實環(huán)境，能反映機體內(nèi)由于力學(xué)因素改變對細胞增殖分化的影響，以及參與此過程的相關(guān)信號途徑，對更好的了解心梗類、心肌纖維化等病程發(fā)展，進而發(fā)展對心肌纖維化等疾病治療的新策略。本文主要內(nèi)容分為六章第一章緒論，主要綜述了近年來國內(nèi)外關(guān)于力學(xué)環(huán)境下（如拉伸力，基底剛度）對細胞的形態(tài)，增殖，遷移等的生物學(xué)影響。第二章，心肌成纖維細胞的分離純化，主要介紹大鼠乳鼠心肌成纖維細胞的分離及純化。第三章，心肌成纖維細胞鑒定，主要對本文用到的實驗材料心肌成纖維細胞進行VIMENTIN、DDR2免疫組織化學(xué)染色。第四章，不同PAHG基底制備及細胞培養(yǎng)，以丙烯酰胺為原料，通過改變交聯(lián)劑甲叉雙丙烯酰胺濃度，制作出不同剛度PAHG基底，并進行細胞培養(yǎng)。第五章，不同基底剛度下心肌成纖維細胞的增殖及分化，對不同剛度基底上培養(yǎng)的心肌成纖維細胞進行EDU增殖檢測、ΑSMA免疫組織化學(xué)染色，分析心肌成纖維細胞的增殖情況，以及向肌成纖維細胞分化情況。第六章，總結(jié)與展望，總結(jié)實驗所得主要結(jié)論，對后續(xù)工作進行展望。

簡介：甲狀旁腺激素對去勢大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞甲狀旁腺激素對去勢大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞生物學(xué)特性影響的研究生物學(xué)特性影響的研究軒詩杰培養(yǎng)類別全日制學(xué)位類型學(xué)術(shù)學(xué)位一級學(xué)科專業(yè)類口腔醫(yī)學(xué)二級學(xué)科專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)研究方向牙槽骨改建與修復(fù)再生指導(dǎo)教師丁寅教授（主任醫(yī)師）培養(yǎng)單位口腔醫(yī)院正畸科二O一七年五月分類號R7835UDC61631密級公開第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄縮略語表1中文摘要3英文摘要6前言10文獻回顧12正文26第一部分去勢大鼠骨質(zhì)疏松模型的構(gòu)建及PTH134給藥261材料2611實驗動物2612藥物、試劑及器材262方法2621實驗動物及分組2622絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松大鼠模型的構(gòu)建273結(jié)果2931一般情況2932大鼠骨質(zhì)疏松模型的構(gòu)建以及PTH134對相關(guān)骨形態(tài)參數(shù)的影響2933骨組織學(xué)觀察324討論3341骨質(zhì)疏松模型的構(gòu)建3342骨質(zhì)疏松動物模型的評價方法3443動物實驗層面上PTH對骨代謝的影響34第二部分BMMSCS的分離、培養(yǎng)和鑒定351材料3511實驗儀器35

簡介：科大學(xué)CAIUNIVERSITY學(xué)號201420S48碩士學(xué)位論文CASK過表達慢病毒載體的構(gòu)建及其對H1299細胞生物學(xué)功能特性的影響覃覓導(dǎo)師姓名周華富專業(yè)名稱外科學(xué)申請學(xué)位類型學(xué)術(shù)型學(xué)位答辯委員會主席林輝答辯委員會委員曾建業(yè)鄭寶石郭建極馮旭二O一七年五月基本情況姓名覃覓民族土家族籍貫湖北宜昌學(xué)習(xí)工作經(jīng)歷起止時間20089201362014920176個人簡歷所在院?；騿挝蝗龒{大學(xué)廣西醫(yī)科大學(xué)研究生期間科研經(jīng)歷／臨床工作經(jīng)歷項目起止時間性別男出生年月19901政治面貌共青團員學(xué)歷學(xué)位學(xué)士學(xué)位碩士學(xué)位職稱無無項目名稱項目來源熏皇荔差覃翥萎蒜舅黯肺癌桂科攻標志物及早期診斷方案的研究～“臨床工作時間工作單位廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院職稱實習(xí)醫(yī)師

簡介：腸易激綜合征IRRITABLEBOWELSYNDROME，IBS是一種以腹痛或腹部不適為主，伴有大便性狀改變的功能性胃腸病，全球總患病率為5％30％，國內(nèi)IBS就診率占消化內(nèi)科門診病人總數(shù)的343％，臨床上以腹瀉型腸易激綜合征DIARRHEAPREDOMINANTIRRITABLEBOWELSYNDROME，DIBS較多見。DIBS屬中醫(yī)“腹瀉”、“腹痛”等范疇，脾主運化，肝主疏泄，當脾胃的運化、肝的疏泄功能和升清降濁功能、大腸的傳導(dǎo)功能及腎的溫煦功能失調(diào)，均可能導(dǎo)致DIBS的發(fā)生。本病的發(fā)病常由于飲食不節(jié)、情志失調(diào)誘發(fā)，肝郁脾虛為主要發(fā)病機制。由于DIBS發(fā)病機制的多因素性、復(fù)雜性，導(dǎo)致其難以治愈、癥狀長期存在或反復(fù)發(fā)作，患者頻繁就醫(yī)，嚴重影響患者生活質(zhì)量和心身健康。有研究發(fā)現(xiàn)IBS患者，糖尿病前期發(fā)生率要明顯高于健康人群，究竟在DIBS患者中2型糖尿病的發(fā)病情況如何，DIBS合并2型糖尿病患者中醫(yī)證型、精神心理狀況及生活質(zhì)量等均未見報道。MICRNAMIRNA是一類長約2123NT的內(nèi)源性單鏈非編碼小RNA，可通過與靶基因完全或不完全互補，在轉(zhuǎn)錄后水平對編碼蛋白的基因表達起負調(diào)控作用。部分研究學(xué)者認為MIRNA在IBS的發(fā)生發(fā)展中異常表達，但真正確認功能的MIRNA只有一部分。目前關(guān)于DIBS合并2型糖尿病MIRNA表達譜的研究鮮有報道，差異表達的MIRNAS在DIBS合并2型糖尿病發(fā)生發(fā)展的生物學(xué)過程中究竟發(fā)揮怎樣的作用尚未完全清楚。本研究首先對DIBS患者與同期體檢者的2型糖尿病發(fā)病情況進行臨床調(diào)查，并對DIBS合并2型糖尿病患者和單純DIBS患者進行問卷調(diào)查，問卷內(nèi)容包括一般人口學(xué)特征、中醫(yī)證型、精神心理狀況及生活質(zhì)量量表IBSQUALITYOFLIFEMEASURE，IBSQOL其次，對DIBS合并2型糖尿病患者、單純DIBS患者、2型糖尿病患者及對照組進行血漿MIRNA表達譜進行研究，篩選DIBS合并2型糖尿病差異表達的特異MIRNA，QRTPCR驗證差異表達的MIRNAS，生物信息學(xué)分析可能的發(fā)病機制最后建立DIBS合并2型糖尿病肝郁脾虛證大鼠模型，探討MIR29B在DIBS合并2型糖尿病肝郁脾虛證模型大鼠中的作用機制及生物學(xué)功能，為該病的中西醫(yī)結(jié)合臨床診斷及治療奠定理論基礎(chǔ)。本研究內(nèi)容共分四部分第一部分DIBS合并2型糖尿病患者中醫(yī)病證及生活質(zhì)量研究目的了解我國DIBS患者糖尿病的發(fā)病情況及DIBS合并2型糖尿病患者一般人口學(xué)特征、中醫(yī)證型、精神心理狀況及生活質(zhì)量。方法收集2013年5月至2015年5月?lián)P州大學(xué)臨床附屬醫(yī)院江蘇省蘇北人民醫(yī)院消化門診就診的DIBS患者388例，研究對象均符合羅馬Ⅲ診斷標準，并且排除與癥狀相關(guān)的器質(zhì)性疾病對照組為上述相應(yīng)的醫(yī)療單位健康體檢者220人兩組均進行血糖測定。對入組患者進行臨床問卷調(diào)查，問卷內(nèi)容包括一般人口學(xué)特征、中醫(yī)證型、精神心理狀況及生活質(zhì)量。結(jié)果1、DIBS組2型糖尿病發(fā)病率為464％，與同期體檢者155％相比差異顯著P＜005，且2型糖尿病發(fā)病與DIBS病程長短有關(guān)，DIBS病程越長，合并2型糖尿病風(fēng)險越高2、180例DIBS合并2型糖尿病患者中，肝郁脾虛證134例，占744％，脾腎陽虛證22例，占122％，脾虛濕困證17例，占95％，脾胃濕熱證7例，占39％3、DIBS合并2型糖尿病患者存在更嚴重的消化道癥狀4、DIBS合并2型糖尿病患者存在更嚴重的焦慮及抑郁5、DIBS合并2型糖尿病患者在煩躁不安、健康憂慮、沖突行為及飲食限制四個維度方面的生活質(zhì)量明顯下降。結(jié)論DIBS患者2型糖尿病的發(fā)病率明顯高于健康體檢者，提示DIBS可能是2型糖尿病的高風(fēng)險因素之一DIBS合并2型糖尿病患者以肝郁脾虛證為主型，且這部分患者的胃腸道癥狀、精神心理狀態(tài)及生活質(zhì)量明顯低于DIBS。第二部分DIBS合并2型糖尿病血漿MIRNA表達譜及MIR29B差異表達的研究目的研究DIBS合并2型糖尿病血漿MIRNA表達譜，篩選差異表達的MIRNAS，并對差異表達MIRNA靶基因進行生物信息學(xué)分析。方法隨機選取DIBS合并2型糖尿病、DIBS、2型糖尿病、健康對照組各3例血漿標本，采用MIRNA寡核苷酸芯片進行檢驗分析，篩選出差異表達的MIRNA采用GOGENEONTOLOGY分析及KEGGKYOTOENCYCLOPEDIAOFGENESGENOMES分析對差異表達的MIRNA靶基因進行生物進程、細胞組分、分子功能、信號通路分析根據(jù)芯片結(jié)果及文獻，篩選出代表性的差異表達MIRNA，采用定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)QUANTIFICATIONALREALTIMEPOLYMERASECHAINREACTION，QRTPCR技術(shù)在大樣本血漿中進一步驗證，根據(jù)驗證結(jié)果對MIRNA進行受試者工作特征RECEIVEROPERATINGACTERISTIC，ROC分析。結(jié)果1、DIBS合并2型糖尿病組差異表達的MIRNA有35個，其中上調(diào)表達的MIRNA有6個，下調(diào)表達的MIRNA有29個2、生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示，差異表達MIRNA的靶基因與細胞核內(nèi)DNA依賴的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)水平及蛋白綁定關(guān)系最為密切3、DIBS合并2型糖尿病患者血漿中MIR106B、MIR29B、MIR26A存在不同程度的表達上調(diào)，與MIRNA芯片篩選結(jié)果一致。ROC分析結(jié)果顯示MIR29BROC曲線下面積（AREAUNDERROCCURVE，AUC＞09，說明其作為DIBS合并2型糖尿病診斷標志物有較高的準確性。結(jié)論通過基因芯片篩查DIBS合并2型糖尿病患者血漿中存在35個差異表達的MIRNA，且MIR29B呈特異性高表達，研究結(jié)果有望為DIBS合并2型糖尿病的診斷提供一種新的非侵入性的分子診斷方法。生物信息學(xué)分析提示差異表達的MIRNAS的靶基因與細胞核內(nèi)DNA依賴的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)水平及蛋白綁定關(guān)系最為密切。第三部分DIBS合并2型糖尿病大鼠肝郁脾虛證模型的建立與評價目的探索DIBS合并2型糖尿病肝郁脾虛證大鼠模型的建立方法。方法4周齡SPF級WISTAR大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，隨機分為普通飲食組和高脂飲食組。高脂飲食組喂養(yǎng)4周后，小劑量35MGKG多次腹腔注射新鮮配制的鏈脲佐菌素STREPTOZOCIN，STZ溶液，隨機血糖超過111MMOLL的大鼠視為2型糖尿病模型成功制備。2型糖尿病模型成功建立后，隨機選取10只建立DIBS肝郁脾虛證模型，同時普通飲食組隨機選取10只建立DIBS肝郁脾虛證模型。造模前禁食不禁水12H，予以生大黃溶液1GML灌胃，2ML只，每日兩次。在灌服生大黃溶液1H后用寬透明膠帶束縛大鼠的肩部、前肢及胸部，限制大鼠用前肢搔抓頭面部，但不限制其活動，束縛時間為1H。造模持續(xù)4周。造模結(jié)束后，觀察各組大鼠一般情況、腹瀉情況、口肛傳輸時間、內(nèi)臟敏感性檢測、曠場實驗及近端結(jié)腸病理組織學(xué)變化。結(jié)果1、一般情況DIBS合并2型糖尿病組飲水量、攝食量、尿量明顯增多，體重明顯減輕2、DIBS合并2型糖尿病組大便積分明顯變大，含水量明顯增多，稀便級明顯增加3、DIBS合并2型糖尿病組口肛傳輸時間明顯減少，內(nèi)臟敏感性明顯增加，曠場實驗中總路程、平均速度及進入中央?yún)^(qū)活動的時間明顯降低4、各組大鼠結(jié)腸組織形態(tài)結(jié)構(gòu)未見明顯器質(zhì)性改變，除對照組外，DIBS合并2型糖尿病組、DIBS組、糖尿病組結(jié)腸組織粘膜輕度水腫，偶見上皮細胞排列不整，局部少量炎性細胞浸潤。結(jié)論高脂飲食鏈脲佐菌素慢性束縛大黃煎煮液灌胃是復(fù)制DIBS合并2型糖尿病肝郁脾虛證動物模型較為合理的造模方法基于血糖、大便特征、腸道敏感性和病理組織學(xué)改變是判定DIBS合并2型糖尿病肝郁脾虛證動物模型是否成功的重要依據(jù)。第四部分基于MIR29B調(diào)節(jié)SP1IL10對DIBS合并2型糖尿病肝郁脾虛證的分子生物學(xué)研究目的研究MIR29B是否通過靶定SP1基因降低IL10表達參與DIBS合并2型糖尿病發(fā)病機制。方法采用QRTPCR方法驗證模型組大鼠血漿中MIR29B表達情況構(gòu)建MSCVPIGMIR29B質(zhì)粒、PGL3SP13UTR質(zhì)粒和PGL3SP13UTRMUT質(zhì)粒，通過雙熒光報告基因和過表達MIR29B驗證MIR29B對其靶基因SP1的直接調(diào)控作用QRTPCR方法、WESTERNBLOT及免疫組織化學(xué)的方法檢測不同動物模型結(jié)腸組織中SP1MRNA和SPI蛋白的表達情況，ELASA方法檢測血漿中IL2、IL6、IL10、TNFΑ的表達。結(jié)果1、DIBS合并2型糖尿病模型組大鼠血漿中MIR29B表達量明顯增多，與對照組相比差異顯著P＜0052、雙熒光素酶報告實驗顯示MIR29B能夠通過作用于SP13UTR區(qū)的特定位點對其進行負調(diào)節(jié)3、DIBS合并2型糖尿病模型組結(jié)腸組織中SP1MRNA和SP1蛋白表達量明顯降低4、與其他三組相比，DIBS合并2型糖尿病組IL10表達明顯下降。結(jié)論MIR29B可能是通過靶定SP1基因降低IL10表達參與DIBS合并2型糖尿病肝郁脾虛證發(fā)病機制。綜上所述DIBS組2型糖尿病發(fā)病率明顯高于健康體檢者，且DIBS合并2型糖尿病患者以肝郁脾虛證為主型，患者伴有心理異常，生活質(zhì)量明顯下降MIRNA芯片篩查發(fā)現(xiàn)DIBS合并2型糖尿病患者血漿中存在35個差異表達MIRNA，MIR29B呈特異性高表達，生物信息學(xué)分析提示差異MIRNAS的靶基因與細胞核內(nèi)DNA依賴的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)水平及蛋白綁定關(guān)系最為密切通過高脂飲食鏈脲佐菌素慢性束縛大黃煎煮液灌胃是復(fù)制DIBS合并2型糖尿病肝郁脾虛證動物模型較為合理的造模方法SP1是MIR29B直接靶基因之一，DIBS合并2型糖尿病模型組大鼠血漿中MIR29B明顯增高，腸組織中SP1MRNA及SP1蛋白表達水平明顯下降，IL10表達水平明顯降低。本研究認為MIR29B可能是通過靶定SP1基因降低IL10表達參與DIBS合并2型糖尿病肝郁脾虛證發(fā)病機制，該結(jié)果可為DIBS合并2型糖尿病肝郁脾虛證的中西醫(yī)結(jié)合診斷和治療提供一定的理論依據(jù)。

簡介：第三軍醫(yī)大學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明秉承學(xué)校嚴謹?shù)男ｏL(fēng)和科研作風(fēng)，本人申明所呈交的論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得我?；蚱渌逃龣C構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，與我同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。申請學(xué)位論文與資料若有不實之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽名坐日期一201魚圣壁第三軍醫(yī)大學(xué)研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解第三軍醫(yī)大學(xué)有關(guān)保護知識產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬第三軍醫(yī)大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為第三軍醫(yī)大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容保密內(nèi)容除外，可以采用影印、縮印或其他手段保存論文。論文作者簽名321材料與方法53322結(jié)果62323討論72324小結(jié)743。3MIRNA一663聯(lián)合CXCR4抑制劑AMD3100對膠質(zhì)瘤移植瘤的治療效果平價75331材料與方法75332結(jié)果79333討論80334小結(jié)80第四章MIRNA126調(diào)控膠質(zhì)瘤干細胞“干性”及腫瘤血管生成的機制及治療學(xué)意義8241MIRNA一126對膠質(zhì)瘤干細胞“干性”和腫瘤血管生成的影響83411材料與方法83412結(jié)果944I3討論101414小結(jié)10542MIRNA一126調(diào)控膠質(zhì)瘤干細胞“干性”和腫瘤血管生成的分子機制106421材料與方法106422結(jié)果110423討論121424小結(jié)12243MIRNA126與抗血管生成藥物貝伐單抗的聯(lián)合應(yīng)用的治療學(xué)意義123431材料與方法。123432結(jié)果125433討論127434小結(jié)12844膠質(zhì)瘤中MIRNA一126表達水平與腫瘤微血管面積和患者預(yù)后的關(guān)系129441材料與方法129442結(jié)果132443討論133

簡介：蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文引導(dǎo)牙周組織再生PLGACSNHA復(fù)合膜的生物學(xué)性能研究蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文引導(dǎo)牙周組織再生PLGACSNHA復(fù)合膜的生物學(xué)性能研究縮略詞表縮略詞表縮略詞英文全稱中文全稱PLGAPOLYLACTICCOGLYCOLICACID聚乳酸乙醇酸共聚物CSCHITOSAN殼聚糖NHAHYDROXYLAPATITE納米羥基磷灰石PVPPOLYVINYLPYRROLIDONE聚乙烯吡咯烷酮GPTRGUIDEDPERIODONTALTISSUEREGENERATION引導(dǎo)牙周組織再生FGF2BASICFIBROBLASTGROWTHFACT堿性成纖維細胞生長因子PERIOSTINPERIOSTIN骨膜蛋白TGFΒ1TRANSFMINGGROWTHFACTΒ1轉(zhuǎn)化生長因子Β1型RTPCRREVERSETRANIONPCR逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)PFLSPERIODONTALLIGAMENTFIBROBLASTS牙周膜成纖維細胞BMSCSBONEMARROWMESENCHYMALSTEMCELLS骨髓間充質(zhì)干細胞PDLSCSPERIODONTALLIGAMENTSTEMCELLS牙周膜干細胞AKPALKALINEPHOSPHATASE堿性磷酸酶

簡介：研究背景脂肪間充質(zhì)干細胞ADIPOSETISSUEDERIVEDSTEMCELL，ADSC是從脂肪組織中分離出來的一種中胚層來源的多能干細胞。因其具有來源充足、取材方便、易于培養(yǎng)、多向分化和免疫調(diào)節(jié)等眾多優(yōu)點，已成為間充質(zhì)干細胞研究與應(yīng)用的熱點。ADSC可用于多種組織器官的損傷修復(fù)和再生，例如用于皮膚、骨與軟骨、肌腱與韌帶、周圍神經(jīng)等組織的損傷修復(fù)等。ADSC的增殖、多向分化、向損傷部位遷移等生物學(xué)特性是影響其發(fā)揮損傷修復(fù)功能的關(guān)鍵因素。應(yīng)用間充質(zhì)干細胞MESENCHYMALSTEMCELL，MSC治療組織損傷時，往往是在炎癥環(huán)境中發(fā)揮其損傷修復(fù)的功能，炎癥因子將影響MSC的生物學(xué)特性進而影響其組織修復(fù)與再生功能。因此，炎癥環(huán)境下ADSC生物學(xué)特性的改變和調(diào)節(jié)也受到越來越多的關(guān)注。近年來的研究發(fā)現(xiàn)長鏈非編碼RNALONGNONCODINGRNA，LNCRNA在調(diào)控干細胞基因表達的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)中扮演著重要的角色。LNCRNAANCRDANCRANTIDIFFERETIATIONNONCODINGRNA，ANCR在人體多種組織中廣泛表達，并在不同組織來源的干細胞中發(fā)揮著不同的調(diào)節(jié)作用。例如研究發(fā)現(xiàn)ANCR可以抑制表皮分化，抑制人骨髓間充質(zhì)干細胞BONEMARROWMESENCHYMALSTEMCELL，BMSC的成骨分化以及牙體組織來源干細胞DENTALTISSUEDERIVEDSTEMCELL，DTSC的成脂、成骨和成神經(jīng)分化，卻促進滑膜組織來源的間充質(zhì)干細胞SYNOVIUMDERIVEDMSC，SMSC的增殖和成軟骨分化。ANCR對人ADSCHADSC生物學(xué)特性的影響還尚未見報道。此外，在前期研究中發(fā)現(xiàn)與炎癥密切相關(guān)的地塞米松促進ANCR在HADSC中的表達，猜測ANCR可能也會受到微環(huán)境中炎癥因子的調(diào)控。因此，篩選影響ANCR表達的炎癥因子后，應(yīng)用地塞米松和TNFΑ刺激HADSC，觀察ANCR在HADSC生物學(xué)特性發(fā)生改變過程中的作用，并初步探討了相關(guān)機制。本研究豐富了炎癥環(huán)境下HADSC生物學(xué)特性發(fā)生改變的相關(guān)機制的研究，為HADSC在組織損傷中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。研究目的1探討ANCR對HADSC增殖、周期、凋亡、遷移以及成脂、成骨分化等生物學(xué)特性的調(diào)控作用。2檢測地塞米松對HADSC中ANCR表達水平的影響，探討ANCR在地塞米松誘導(dǎo)的HADSC細胞生物學(xué)特性改變中發(fā)揮的作用。3篩選影響HADSC中ANCR表達的炎癥因子，探討ANCR在TNFΑ誘導(dǎo)的HADSC細胞生物學(xué)特性改變中發(fā)揮的作用。4初步探討TNFΑ、地塞米松調(diào)控HADSC中ANCR表達的機制。研究方法1ANCR對HADSC生物學(xué)特性的影響從抽脂術(shù)后廢棄的脂肪組織中獲取血管基質(zhì)成分SVFSTROMALVULARFRACTION，并用干細胞培養(yǎng)基重懸后貼壁培養(yǎng)獲得HADSC。流式分析儀對P3代HADSC進行表面標志物的檢測。構(gòu)建ANCR的敲減與過表達質(zhì)粒，利用慢病毒感染的方式敲減和過表達HADSC中的ANCR后，CCK8法檢測HADSC增殖、MUSE細胞狀態(tài)分析儀檢測細胞周期、ANNEXINⅤ和7AAD染色之后用MUSE細胞狀態(tài)分析儀檢測細胞凋亡水平的變化、細胞劃痕實驗檢測細胞遷移能力的改變、成脂誘導(dǎo)后7天進行油紅O染色鑒定成脂效果、成骨誘導(dǎo)后14天進行茜素紅染色鑒定成骨效果。2地塞米松對HADSC生物學(xué)特性的影響以及ANCR在其中的作用體外添加1106MOLL、1107MOLL、1108MOLL三種濃度的地塞米松處理HADSC后，檢測HADSC的增殖、周期、凋亡、遷移等生物學(xué)特性的改變，以及REALTIMEPCR檢測各組HADSC中ANCR、成脂相關(guān)基因PPARΓ，CEBPΑ、成骨相關(guān)基因（RUNX2，ALP、增殖、周期、凋亡相關(guān)基因以及趨化因子受體（CXCR4，CXCR7）的表達。3TNFΑ對HADSC生物學(xué)特性的影響以及ANCR在其中的作用體外分別添加TNFΑ、IL1Β、IFNΓ、IL6、IL8、MCP1六種促炎因子以及IL13、IL10兩種抑炎因子，REALTIMEPCR檢測HADSC中ANCR的表達。體外添加10NGML和50NGML的TNFΑ處理HADSC后，檢測HADSC的增殖、周期、凋亡、遷移、成脂、成骨分化等生物學(xué)特性的改變，以及REALTIMEPCR檢測各組HADSC中增殖、周期、凋亡、遷移、成脂以及成骨相關(guān)基因的表達。在HADSC中過表達ANCR后添加10NGMLTNFΑ刺激并檢測HADSC增殖、周期和遷移的改變，REALTIMEPCR檢測增殖、周期和遷移相關(guān)基因的表達。4TNFΑ、地塞米松調(diào)控HADSC中ANCR表達的機制10NGMLTNFΑ刺激HADSC，不同時間點收集細胞，WESTERNBLOT檢測NFΚBNUCLEARFACTΚB和MT（MAMMALIANTARGETOFRAPAMYCIN）信號通路活化情況。分別應(yīng)用NFΚB通路的抑制劑BAY117082、地塞米松以及MT通路抑制劑雷帕霉素RAPAMYCIN和PP242預(yù)處理HADSC，再加入10NGMLTNFΑ刺激后，WESTERNBLOT檢測相應(yīng)信號通路是否被抑制以及REALTIMEPCR檢測ANCR的表達水平。研究結(jié)果1ANCR對HADSC生物學(xué)特性的影響P3代HADSC中，MSC表面標志分子CD44、CD73、CD90、CD105等的表達均在95％以上，CD45等造血干細胞表面標志物的表達為陰性。敲減ANCR促進HADSC的增殖，增加S期的細胞比例、降低G0G1期的細胞比例，促進HADSC的遷移以及成脂、成骨分化。過表達ANCR抑制HADSC的增殖，降低S期的細胞比例、增加G0G1期的細胞比例，抑制HADSC的遷移以及成脂、成骨分化。敲減和過表達ANCR對HADSC的細胞凋亡狀態(tài)都無顯著影響。2地塞米松對HADSC生物學(xué)特性的影響以及ANCR在其中的作用地塞米松促進HADSC中ANCR的表達，并且隨著地塞米松濃度的增加而升高。高濃度地塞米松（1106MOLL，1107MOLL）抑制HADSC的增殖，減少S期的細胞比例、升高G0G1期細胞比例，抑制HADSC的遷移，促進HADSC的凋亡以及成脂相關(guān)基因PPARΓ和CEBPΑ的表達。低濃度地塞米松1108MOLL促進HADSC中成骨相關(guān)基因RUNX2和ALP的表達，對HADSC增殖、周期、凋亡以及遷移沒有顯著的影響。敲減ANCR可以減弱1107MOLL地塞米松對HADSC增殖、周期、遷移的抑制作用。3TNFΑ對HADSC生物學(xué)特性的影響以及ANCR在其中的作用TNFΑ、IL1Β、IFN?？梢越档虷ADSC中ANCR的表達水平。10NGML和50NGMLTNFΑ促進HADSC增殖，增加S期的細胞比例、降低G0G1期的細胞比例，促進HADSC中凋亡抑制因子NFΚB的表達及其凋亡拮抗作用，促進HADSC細胞遷移能力，抑制HADSC成脂、成骨分化。ANCR的過表達可以減弱TNFO對HADSC細胞增殖、周期、遷移的促進作用。4TNFΑ、地塞米松調(diào)控HADSC中ANCR表達的機制TNFΑ可以激活HADSC中NFΚB和MT信號通路，NFΚB和MT通路的活化可以分別被BAY117082、地塞米松以及RAPAMYCIN、PP242抑制。BAY117082和地塞米松可以抑制TNFΑ誘導(dǎo)的HADSC中ANCR的下降，并且單獨作用時可以通過抑制NFΚB信號通路促進HADSC中ANCR的表達，RAPAMYCIN和PP242則無此作用。研究結(jié)論1ANCR可以調(diào)控HADSC的增殖、周期、遷移以及成脂、成骨分化能力。2地塞米松濃度依賴性的促進HADSC中ANCR的表達，并且敲減ANCR可以減弱1107MOLL地塞米松對HADSC增殖、周期以及遷移的抑制作用。提示ANCR可能參與高濃度地塞米松對HADSC增殖、周期以及遷移的調(diào)控。3促炎因子TNFΑ可以降低HADSC中ANCR的表達，并且ANCR的過表達可以減弱TNFΑ對HADSC增殖、周期以及遷移的促進作用。提示ANCR可能會參與TNFΑ對HADSC增殖、周期以及遷移的調(diào)控。推測ANCR的下降與炎癥環(huán)境下HADSC增殖、遷移能力的變化密切相關(guān)。4NFΚB信號通路可以調(diào)節(jié)ANCR的表達，1107MOLL地塞米松可以通過抑制NFΚB通路的激活促進HADSC中ANCR的表達，并且可以抑制TNFΑ所引起的NFΚB信號通路的激活來拮抗TNFΑ誘導(dǎo)的ANCR下降。

簡介：結(jié)核病TUBERCULOSIS，TB是由結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群MYCOBACTERIUMTUBERCULOSISCOMPLEX，MTC引起的一種以呼吸系統(tǒng)感染為主的慢性傳染病，目前全球約有13的人感染結(jié)核分枝桿菌。目前用于結(jié)核病預(yù)防的卡介苗BCG，只能對兒童肺結(jié)核起到有效的保護，對成人的保護效果不盡如人意。PEPPE蛋白家族其編碼基因大約占整個結(jié)核分枝桿菌基因組的10％，這些蛋白被認為是參與宿主免疫的毒力因子，它們只存在于致病的分枝桿菌中，預(yù)示著PEPPE蛋白在該菌致病中可能發(fā)揮重要作用，但大部分PEPPE蛋白的確切功能亟待闡明。本研究利用恥垢分枝桿菌表達結(jié)核分枝桿菌PPE25和PPE27蛋白，以初步探究其生化特性，與巨噬細胞的相互作用及其免疫特性，為結(jié)核病新型疫苗的研究奠定基礎(chǔ)。1表達PE25和PPE27基因重組恥垢分枝桿菌的構(gòu)建及鑒定以結(jié)核分枝桿菌H37RV基因組為模板，采用PCR技術(shù)擴增PPE25和PPE27基因序列并添加FLAG標簽，構(gòu)建重組質(zhì)粒PMV261PPE25FLAG和PMV261PPE27FLAG，經(jīng)測序鑒定正確后，將兩個重組質(zhì)粒分別電轉(zhuǎn)化恥垢分枝桿菌MC2155感受態(tài)，PCR鑒定表明重組菌MSPMV261PPE25FLAG和MSPMV261PPE27FLAG構(gòu)建成功。重組菌經(jīng)45℃30MIN誘導(dǎo)表達后，WESTERNBLOTTING結(jié)果表明，表達的融合蛋白PPE25和PPE27與抗FLAG標簽單克隆抗體發(fā)生特異性的反應(yīng)，與預(yù)期條帶大小3951KD和379KD一致。2表達PPE25和PPE27基因重組恥垢分枝桿菌生化特性的研究利用7H9培養(yǎng)恥垢分枝桿菌及重組恥垢分枝桿菌，繪制生長曲線，結(jié)果表明重組恥垢分枝桿菌與親本菌株相比生長速率無明顯變化。為了研究PPE25和PPE27蛋白是否與結(jié)核分枝桿菌應(yīng)對多種壓力環(huán)境能力有關(guān)，檢測重組菌在SDS表面壓力和饑餓條件等體外壓力環(huán)境下生長情況。實驗證明PPE25和PPE27蛋白定位在細胞表面，增加了對饑餓條件和表面壓力環(huán)境的耐受，但對酸性環(huán)境更加敏感。實驗還同時檢測了重組菌MSPMV261PPE25FLAG和MSPMV261PPE27FLAG在巨噬細胞內(nèi)的生存情況及對巨噬細胞的影響。研究證明PPE25和PPE27蛋白明顯增強恥垢分枝桿菌在巨噬細胞內(nèi)的存活，并且引起巨噬細胞明顯的凋亡和細胞壞死P＜005。3表達PPE25和PPE27基因重組恥垢分枝桿菌的免疫生物學(xué)特性研究將重組恥垢分枝桿菌MSPMV261PPE25FLAG和MSPMV261PPE27FLAG分別尾部皮下免疫6周齡BALBC小鼠，免疫劑量為5107CFU只，免疫2周后進行二免，4周后測定重組恥垢分枝桿菌在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)。ELISA檢測免疫小鼠血清抗體水平，結(jié)果表明重組菌MSPMV261PPE25FLAG和MSPMV261PPE27FLAG免疫組能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生針對PPE25、PPE27蛋白以及PPE2527∶5671多肽的特異性抗體?？贵w亞類測定表明，MSPMV261PPE25FLAG和MSPMV261PPE27FLAG以產(chǎn)生IGG1為主。分離小鼠淋巴細胞，利用BRDU法檢測淋巴細胞抗原特異性增殖指數(shù)SI，結(jié)果顯示，以PPE25、PPE27和PPE2527∶4452多肽刺激均能使免疫小鼠淋巴細胞發(fā)生增殖P＜005。研究中還檢測了免疫小鼠淋巴細胞分泌THL型細胞因子TNF、IL2和IFNΓ，TH2型細胞因子IL4、IL6和IL10。結(jié)果PPE27刺激MSPMV261PPE27FLAG免疫小鼠淋巴細胞分泌IL4和IL6高于對照組P＜005，免疫類型偏向TH2型。上述研究結(jié)果為PPE25和PPE27蛋白在結(jié)核病疫苗研發(fā)等奠定了重要基礎(chǔ)。

簡介：手機已成為人們?nèi)粘Ｉ钪胁豢扇鄙俚碾娮釉O(shè)備。除了手機傳統(tǒng)的通信功能外，智能手機的飛速發(fā)展已經(jīng)使手機變成了一部便捷的個人電腦。人們使用手機的頻率越來越高，對于手機的依賴性也越來越強。目前廣泛使用的手機信號為900MHZ1800MHZ的GSMCDMA射頻輻射信號。手機使用引起的射頻輻射暴露潛在的健康損害受到了人們的廣泛關(guān)注。已有大量研究證實，長時間使用手機可能會引起神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)紊亂，從而導(dǎo)致疲勞、頭痛、注意力不集中等等。盡管對于手機電磁輻射可能導(dǎo)致的健康損害還存在較多爭議，國際腫瘤研究組織IARC，INTERNATIONALAGENCYFRESEARCHONCANCER將手機引起的射頻電磁輻射劃分為了人類可能致癌物2B組。除了手機長期使用可能的潛在致癌效應(yīng)，射頻電磁輻射對男性生殖健康的影響也受到了人們的廣泛關(guān)注。很多男性經(jīng)常將手機放置于褲子口袋內(nèi)，導(dǎo)致睪丸長期暴露于射頻電磁場中。手機使用是否會影響男性精液質(zhì)量目前仍沒有確定的結(jié)論。近年來，多項研究表明，男性精液質(zhì)量總體呈下降趨勢。我們對于重慶三峽庫區(qū)男性精液質(zhì)量的調(diào)查顯示，參與調(diào)查的成年健康男性中約611％有至少一項的精液參數(shù)在WHO標準以下。男性精液質(zhì)量下降受到環(huán)境因素、生活習(xí)慣和遺傳因素等多方面影響。除了空氣和水源污染，電磁輻射污染也越來越受到人們的重視，尤其是手機通訊設(shè)備的廣泛使用。目前，許多實驗室對手機電磁輻射對精液質(zhì)量的影響進行了研究。但是由于實驗暴露方法、精液檢測手段、整體實驗設(shè)計等方面的不統(tǒng)一，使得目前對于這一問題的研究仍然得不出較為確切的結(jié)論。本研究從系統(tǒng)評價與META分析、人群研究、細胞生物學(xué)研究和基因研究四個層面對這一問題進行了深入細致的分析。為闡明手機電磁輻射對精液質(zhì)量影響這一公共健康問題提供了詳實的數(shù)據(jù)，可靠的證據(jù)。為今后更加深入的研究奠定了基礎(chǔ)。本課題的主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下1、手機使用與精液質(zhì)量關(guān)系的系統(tǒng)評價和META分析本部分研究是根據(jù)COCHRANE協(xié)作中心提供的標準系統(tǒng)評價與META分析流程和核對表進行的。2013年5月以前發(fā)表的相關(guān)文獻檢索自5個主要的國際和中文文獻數(shù)據(jù)庫，包括MEDLINEPUBMED、EMBASE、CNKI、VIP數(shù)據(jù)庫和COCHRANE對照研究注冊中心圖書館。18項研究包括3947位男性志愿者以及186只大鼠被納入系統(tǒng)評價中，其中的12項研究（包括4項人群研究、4項體外實驗室研究和4項動物研究）包括1533位男性志愿者和97只大鼠被納入META分析中。系統(tǒng)評價的結(jié)果顯示，大部分的人群研究和體外實驗室研究都表明，手機使用或者射頻電磁輻射暴露對各項精液指標有不利影響。META分析結(jié)果顯示，在人群研究中，手機使用對精液參數(shù)沒有顯著的有害作用。體外實驗室研究顯示體外射頻電磁輻射暴露對精液活動度和活力存在有害作用精液活動度合并MD95％CI411808，013精液活力合并MD95％CI382700，065。對于動物實驗，射頻電磁輻射暴露對精液濃度和活動度有不利影響精液濃度合并MD95％CI8751737，012精液活動度合并MD95％CI17723279，265。根據(jù)目前的研究證據(jù)表明手機使用對部分精液參數(shù)存在潛在的有害作用。多中心標準化的人群研究需要來進一步評估手機使用對生殖系統(tǒng)的危害。2、手機使用對精液參數(shù)影響的人群隊列研究本部分研究分別從重慶市大學(xué)生男性生殖健康隊列研究MARHCS2013年數(shù)據(jù)中篩選了794位年輕男性手機使用信息，2014年數(shù)據(jù)中篩選了666位年輕男性手機使用信息，以及2015年數(shù)據(jù)中篩選了568位年輕男性手機使用信息。在單因素回歸分析中，我們發(fā)現(xiàn)2013年數(shù)據(jù)中，手機的日常通話時間與精液參數(shù)的減少，包括精液濃度（Β系數(shù)632％每單位手機日常通話時間（小時）95％CI1194，034和總精子計數(shù)82395％CI1438，163下降顯著相關(guān)。2015年數(shù)據(jù)中，手機日常通話時間與精液量83795％CI1593，013和總精子計數(shù)165995％CI2991，073下降顯著相關(guān)。手機網(wǎng)絡(luò)使用在2013年數(shù)據(jù)中也與精子濃度和總精子計數(shù)下降顯著相關(guān)，并且在2015年數(shù)據(jù)中與精液量減少相關(guān)。此外，我們運用多因素分析來排除潛在混雜因素對結(jié)果的影響。混雜因素被排除后，手機網(wǎng)絡(luò)使用與精液參數(shù)下降之間仍存在顯著的負相關(guān)。在三年研究中，手機通話與精液參數(shù)之間的負相關(guān)性持續(xù)存在，但并不顯著。在三年數(shù)據(jù)的混合模型中手機通話與精液質(zhì)量之間的負相關(guān)性有統(tǒng)計學(xué)意義。我們的結(jié)果表明，手機使用的某些方面會對精液質(zhì)量如精液量、精液濃度和精子計數(shù)下降存在關(guān)聯(lián)，從而有可能影響男性生殖健康。3、細胞自噬在小鼠精母細胞系手機射頻輻射暴露中的保護作用為了研究手機射頻輻射暴露是否會引起精母細胞系發(fā)生自噬，本部分研究將小鼠精母細胞來源的GC2細胞暴露于1800MHZGSM信號GSMTALK模式下。GC2細胞在比吸收率為1WKG、2WKG和4WKG的劑量下暴露24小時。本研究結(jié)果顯示，LC3Ⅱ的表達呈現(xiàn)隨著電磁輻射暴露劑量和時間增加而增加的趨勢。在4WKG的輻射劑量下，LC3Ⅱ的表達有顯著改變。GFPLC3瞬時轉(zhuǎn)染以及透射電子顯微鏡分析均確實了自噬體的形成以及自噬的發(fā)生。進而，LC3Ⅰ向LC3Ⅱ的轉(zhuǎn)換在氯喹作用下顯著增強，表明射頻輻射可增強自噬流。細胞內(nèi)活性氧水平在射頻輻射暴露后呈現(xiàn)隨劑量和時間增加而顯著增加的趨勢。使用抗氧化劑NAC預(yù)處理細胞可顯著降低LC3Ⅰ向LC3Ⅱ的轉(zhuǎn)化，并可抑制射頻輻射誘導(dǎo)的P62的降解。同時，在2WKG和4WKG的輻射條件下，磷酸化ERK表達顯著增加。我們也觀察到射頻輻射暴露不能增加凋亡細胞的比例，但是自噬的抑制會顯著增加細胞的凋亡率。本部分的研究表明1800MHZGSM射頻輻射在4WKG的條件下可顯著增強自噬流，此過程是由活性氧介導(dǎo)，且ERK信號通路參與。自噬在射頻輻射應(yīng)激條件下起到了保護細胞發(fā)生凋亡的重要作用。4、高通量基因芯片分析手機射頻電磁輻射對DNA損傷修復(fù)通路基因的影響DNA損傷會引起細胞死亡、腫瘤發(fā)生等。長期手機電磁輻射暴露是否會引起DNA損傷目前仍沒有一致的結(jié)論。本部分研究采用高通量實時定量PCR的方法，高通量檢測了1800MHZ射頻輻射暴露4WKG24小時后GC2細胞84個DNA損傷修復(fù)信號通路中的基因MRNA水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)除兩個基因表達降低，一個基因表達升高外，其余基因均未發(fā)生明顯變化。從高通量初步分析的結(jié)果來看，手機射頻輻射暴露不足以引起細胞DNA的損傷，未觸發(fā)DNA損傷修復(fù)信號通路。綜上所述，本課題從系統(tǒng)評價與META分析、人群隊列研究、細胞生物學(xué)和分子生物學(xué)研究等多個角度、多個層次對手機電磁輻射與精液質(zhì)量之間的關(guān)系進行了深入系統(tǒng)的研究。手機電磁輻射長期暴露對精液質(zhì)量存在潛在的危險。在實驗室暴露條件下，射頻輻射暴露不足以引起細胞凋亡與DNA損傷。同時，細胞自噬對手機電磁輻射暴露起到了有效的保護作用。本研究為手機電磁輻射保護、男性生殖健康等方面提供了原創(chuàng)性的研究資料，為今后的相關(guān)研究提供了基礎(chǔ)。