簡介：蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文從“雙基”到“科學(xué)素養(yǎng)”初中生物學(xué)大綱與標(biāo)準(zhǔn)以及教材的比較研究姓名李敏申請學(xué)位級別碩士專業(yè)教育管理指導(dǎo)教師唐斌20071101從“雙基”到“科學(xué)素養(yǎng)”初中生物學(xué)‘大綱與標(biāo)準(zhǔn)以及教材的比較研究英文摘要FROM“TWOBASICS’’T0“SCIENTINCLITERACY”THECOMPARISONSTUDYON“GENERALOUTLINE，，AND“STANDARD“OFJUNIORBIOLOGYANDTEACHINGMATERIALSABSTRACTIN2001，THEMILLI唧OFEDUCATIONPROMULGATED讎”如LLTIMCCOMPULSO巧EDUCATIONBIOLOGYC面CLLLUMST鋤DARDS”，WHICHW嬲IILLPLEMENTEDHLALM肋NOFTHESAINEYEARUNDERT11EGUIDAILCEOFTLLECU玎ICULUINST弛DARDS，JIANGSUSCIENCE鋤DTECHOLOGYPUBLISMNGH0USECOMPILEDMETEX‰OKOF”COMPULSO巧EDUCATIONCU仃ICUL唧STANDARDSBI010百CALEXPERILNENTTEXTB00K”PRIORT0TILIS，INSUZILOUCI饑JIAILGSUPROVHLCE，TLLE、7L，IDESPREAD惦EOFBIOLO西CALMATERIALSWERE鋤ENDEDACCORDILLGT0TLLEPROM_ULGATIONOF”FMLTIMEJULLIOR111IDDLESCHOOLSOFTHEILINEYEARCONLPULSO巧EDUCATIONC嘶CULA’’PROBATIONTHATISTLLE”血EYEARCOMPULSO巧EDUCATIONMREEYEARJUNIORMJDDLESCHOOLSBI0109ICALTEXTBOOK”IILTLLISPAPER，T11EC0MPARISONBET、，EEN鉚OSETSOFTEACMNGMATERIALSIST0EⅨLBLEABETTERUNDERST弛DIILGOFMEPE叩ETRATORSJUNIOR11I曲SCHOOL鋤DJULLIORLLI曲SCHOOLBIOLOGRCURRICULUMST鋤DARDSILLTHETEACMNGP陸10SOPHY0FMECU玎ICUL哪，TEACLLINGOBJE以VES，TEACHINGCONTENT，鋤DOMERDI仃ERERLCESN、訪LL掣碰’PTLLESPIRITOFMENEWCURRICULUMSTAND礬SBETTER，USETLEWMATERIALSF0RTCACKNGBE釷ER，AVOIDWE耐NGNEWSHOESTOWANMEOLDROAD，鋤DMAL【EAPRACTIC2LLIⅡLPLEMENTATIONOFTHENEWC眥ICULUMREFOMON也EB2USISOF也C跚MMARIZEDLITEFATURE，MISPAPERUSESCOMPARALIVESTUDYBET、ⅣEEN”MLLTIMEJULLIOR血DDLESCH00LSOFTHENIILEYEARCOMPULSO巧EDUCATIONCUMCULA”AILD”MLLTIMECOMPULSO巧EDUCATIONBIOLOGYC嘶CULUMSTANDARDS”；BET、ⅣEEN11INCYE盯COMPULSOD，EDUCATIONTEXTBOOL【STLLREEYEARJURLIORMIDDLESCHOOLSBIOLO西CAI”AJLDTHE”COMPULSO巧EDUCATIONCURRICULUMSTAILDARDSTEXTBOOKSBIOLOGICALEXPERIMENT”ITISCOMPARED丘OMⅡLEKNOWLEDGE蛐MCTURE，CHARACTERISTICS，T11EEVALUATION，M猢GEMENT鋤DOTLLERARE弱OFTEACHINGMATERIALSTHE”STAILDARD”VERSIONOFTEACHINGH乏略MEFOLLOWINGSEVERALALSPECTSOFT11EFEATURESNESTABLISHESANEW11

簡介：目的觀察不同程度酸性條件對成人髓核間充質(zhì)干細(xì)胞（NPMSCS）生物學(xué)活性的作用，發(fā)掘椎間盤的可能退變機(jī)制。方法篩選6例脊柱側(cè)凸需矯形手術(shù)患者，留取手術(shù)過程中摘除的6個PFIRRMANNⅠ級或Ⅱ級腰椎椎間盤，用膠原酶消化髓核組織，分離細(xì)胞，體外培養(yǎng)，觀察細(xì)胞形態(tài)。選擇培養(yǎng)的P2代細(xì)胞，運用流式細(xì)胞儀檢測間充質(zhì)干細(xì)胞等表面抗原標(biāo)志物；使用分化誘導(dǎo)培養(yǎng)液誘導(dǎo)成骨、成軟骨、成脂細(xì)胞，2周后分別染色液對誘導(dǎo)的細(xì)胞染色，觀察細(xì)胞三系分化能力。參照國際干細(xì)胞治療協(xié)會（ISCT）給出的間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCS）的判定準(zhǔn)則，綜合鑒定分離的細(xì)胞。使用不同PH值的培養(yǎng)基培養(yǎng)P2代細(xì)胞后，用CCK8法檢測不同培養(yǎng)時間的細(xì)胞增殖能力，用流式細(xì)胞儀檢測不同PH培養(yǎng)基作用的細(xì)胞凋亡率，使用實時熒光定量（RTPCR）檢測P2代細(xì)胞“干性”基因及酸離子通道家族蛋白基因表達(dá)情況。結(jié)果分離的P0代細(xì)胞均貼培養(yǎng)瓶底壁生長。分離培養(yǎng)P2代細(xì)胞表面抗原檢測示高表達(dá)CD90、CD105、CD73，三者表達(dá)比例分別達(dá)96％、95％、94以上，卻低表達(dá)CD45、CD34、HLADR（均低于4）。通過使用特殊染色劑染色結(jié)果表明實驗中分離得到的細(xì)胞均可向骨、脂肪及軟骨細(xì)胞方向分化。參照ISCT制定MSCS的判定準(zhǔn)則，認(rèn)為這種細(xì)胞是NPMSCS。CCK8檢測結(jié)果示分離得到的細(xì)胞在不同PH培養(yǎng)液培養(yǎng)后1、3天不同組細(xì)胞吸光度差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞005）；5天后各組細(xì)胞吸光度差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P結(jié)論不同層次的PH酸環(huán)境條件下培養(yǎng)成人NPMSCS3天增殖能力未見顯著變化，作用5天后可以看出低PH環(huán)境明顯抑制NPMSCS的增殖能力以及基因表達(dá)，加快細(xì)胞凋亡，而且這種作用隨著PH降低越明顯。

簡介：分類號分類號R6573密級密級公開公開研究生學(xué)位論文論文題目（中文）論文題目（中文）HACE1HACE1在肝癌中的生物學(xué)特性與其臨床病理在肝癌中的生物學(xué)特性與其臨床病理學(xué)特征及預(yù)后的關(guān)系學(xué)特征及預(yù)后的關(guān)系論文題目（外文）論文題目（外文）THEBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFHACE1INHCCANDITSRELATIONSHIPSWITHPATHOLOGICALCHARACTERISTICSANDPROGNOSIS研究生姓名研究生姓名高增法高增法學(xué)科、專業(yè)學(xué)科、專業(yè)醫(yī)學(xué)醫(yī)學(xué)外科學(xué)外科學(xué)研究方向研究方向普通外科普通外科學(xué)位級別學(xué)位級別碩士碩士導(dǎo)師姓名、職稱導(dǎo)師姓名、職稱李汛李汛教授教授論文工作論文工作起止年月起止年月20142014年5月至20162016年3月論文提交日期論文提交日期20162016年3月論文答辯日期論文答辯日期20162016年5月學(xué)位授予日期學(xué)位授予日期20162016年6月校址甘肅省蘭州市校址甘肅省蘭州市IHACE1HACE1在肝癌中的生物學(xué)特性與其臨床病理學(xué)特征及預(yù)后的在肝癌中的生物學(xué)特性與其臨床病理學(xué)特征及預(yù)后的關(guān)系關(guān)系中文摘要中文摘要肝細(xì)胞肝癌（HEPATOCELLULARCARCINOMA，HCC）（以下簡稱肝癌）是目前世界上最常見的惡性腫瘤之一，在全球，肝癌的發(fā)病率不斷攀升。流行病學(xué)和實驗研究均表明病毒性肝炎與原發(fā)性肝癌的發(fā)生有著特定的關(guān)系，其中以乙型肝炎與肝癌關(guān)系最為密切。中國肝癌患者中約90都存在乙型肝炎病毒HBV感染背景，加上其惡性程度高和預(yù)后差等特點，我國面臨的肝癌形勢日益嚴(yán)峻。截至目前，傳統(tǒng)外科手術(shù)和肝移植依然是肝癌治療的最佳方案，但由于肝癌起病隱匿，特異性臨床表現(xiàn)缺乏，大多數(shù)病人就診時已錯過最佳的手術(shù)時機(jī)，預(yù)后極差。因此，為探索肝癌發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制，改善患者長期預(yù)后，針對肝癌相關(guān)分子的研究已成為當(dāng)前的研究熱點。HACE1基因是屬于HECT家族的E3泛素連接酶HECTE3，位于染色體6Q21，是多種惡性腫瘤中頻繁發(fā)生突變的一個位點。HACE1基因最早發(fā)現(xiàn)與腎母細(xì)胞瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)該基因的低表達(dá)或突變與人類多種惡性腫瘤相關(guān)，如乳腺癌，結(jié)直腸癌和淋巴瘤等。目前，HACE1基因?qū)Ω伟┑淖饔梦从忻鞔_報道。因此，本實驗主要探討HACE1基因在肝癌細(xì)胞中的生物學(xué)特性，研究其對肝癌發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移的作用及其與肝癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。第一部分第一部分HACE1基因在肝癌細(xì)胞系和肝癌組織中的表達(dá)研究基因在肝癌細(xì)胞系和肝癌組織中的表達(dá)研究目的目的研究HACE1基因在肝癌細(xì)胞株HUH7,MHCC97H,HCCLM3,MHCC97L,HEPG2,SMCC7721以及肝正常細(xì)胞株L02和肝癌組織及相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)，初步探討其與肝癌發(fā)生的關(guān)系。方法方法采用RT?PCR和WESTERNBLOT方法檢測HACE1基因在肝癌細(xì)胞系、肝正常細(xì)胞株L02和40組肝癌及其相應(yīng)癌旁組織中MRNA和蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果結(jié)果在不同的肝癌細(xì)胞株HUH7,MHCC97H,HCCLM3,MHCC97L,HEPG2,SMCC7721中，HACE1基因表達(dá)水平明顯低于肝正常細(xì)胞株L02，其中HUH7細(xì)胞中的HACE1基因相對表達(dá)水平最高，SMCC7721細(xì)胞中HACE1基因相對表達(dá)水平最低，因此選擇這兩株細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)功能實驗；在肝癌及相應(yīng)癌旁組織中，HACE1在肝癌中的表達(dá)明顯低于癌旁組織。

簡介：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞BMSCS對于促進(jìn)前交叉韌帶重建術(shù)后的腱骨愈合具有積極的作用，最近的研究發(fā)現(xiàn)，前交叉韌帶中可以分離得到間充質(zhì)干細(xì)胞ACLMSCS，并且該細(xì)胞可以體外增殖及向骨、脂肪、軟骨等多向誘導(dǎo)分化。由于不同來源干細(xì)胞的增殖及分化潛能差異對臨床的選擇應(yīng)用具有指導(dǎo)意義，而骨髓來源與前交叉韌帶來源的間充質(zhì)干細(xì)胞的體外生物學(xué)特性比較目前尚無明確報道。目的比較大鼠骨髓與前交叉韌帶來源的間充質(zhì)干細(xì)胞體外增殖及成骨、成軟骨及成脂分化潛能的差異。方法取SPF級6周齡雄性BN大鼠10只，體質(zhì)量200220G，在無菌的條件下分別取BN大鼠前交叉韌帶及骨髓，貼壁法培養(yǎng)獲取BMSCS與ACLMSCS并進(jìn)行傳代，注意觀察細(xì)胞形態(tài)變化，取生長良好的P3代細(xì)胞用于以下實驗體外克隆形成實驗及CCK8法檢測增殖能力流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞免疫表型體外誘導(dǎo)多向分化實時定量PCR技術(shù)檢測成骨ALP、BGLAP、RUNX2、BMP2、SPP1、成軟骨COL2Α1、ACAN、SOX9及成脂（PPARΓ2及CEBP?。┫嚓P(guān)基因MRNA表達(dá)水平。結(jié)果P3代ACLMSCS和BMSCS形態(tài)學(xué)相似，均表現(xiàn)為貼壁生長的長梭形細(xì)胞。流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表型顯示，兩種細(xì)胞均表達(dá)CD29、CD90，基本不表達(dá)CD45及CD34細(xì)胞增殖能力試驗和細(xì)胞克隆形成分析顯示ACLMSCS比BMSCS具有更強(qiáng)的體外增殖能力P0023＜005兩種干細(xì)胞均可體外誘導(dǎo)成骨、成脂、成軟骨分化分化相關(guān)基因檢測顯示ACLMSCS成軟骨分化相關(guān)基因COL2Α1、ACAN和SOX9P00003，P00020，P00064表達(dá)水平高于BMSCS。結(jié)論本研究表明ACLMSCS比BMSCS具有更強(qiáng)的體外增殖能力，在相同體外條件下更易向軟骨分化，是一種有潛力的促進(jìn)腱骨愈合的種子細(xì)胞。

簡介：南方醫(yī)科大學(xué)2012級碩士學(xué)位論文氯通道CIC7對牙囊細(xì)胞生物學(xué)特性影響的體外研究／NVITROSTUDYOFCIC7’SEFFECTONTHEBIOLOGICALFUNCTIONOFDENTALFOLLICLECELLS課題來源國家自然科學(xué)基金81271116學(xué)位申請人導(dǎo)師姓名專業(yè)培養(yǎng)培養(yǎng)所在名稱類型岳祆學(xué)院答辯委員會主席答辯委員會委員王賀吳補領(lǐng)教授段小紅教授口腔臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)型碩士研究生第一臨床醫(yī)學(xué)院凌均綮教授黃世光教授林正梅教授韋曦教授趙望泓教授2015年05月20日廣州摘要是牙萌出的必需條件之一，其在組織、細(xì)胞和分子多個水平上調(diào)控牙齒的萌出。基于牙囊細(xì)胞在牙發(fā)育和萌出中的重要地位，為了驗證CIC一7在牙萌出中發(fā)揮重要功能的假說，本實驗采用小鼠牙囊細(xì)胞DENTALFOLLICLECELLS，DFCS為體外實驗?zāi)Ｐ?；首先探索小鼠牙囊?xì)胞體外分離培養(yǎng)的合適方法，其次檢測C1C7在DFCS的表達(dá)情況，并通過構(gòu)建慢病毒SHRNA載體干擾DFCS中C1C7的表達(dá)，建立C1C一7缺陷的小鼠牙囊細(xì)胞模型，觀察C1C7表達(dá)降低后相關(guān)基因的變化在體外模擬成骨細(xì)胞和破骨前體細(xì)胞的相互作用，建立DFCS／MNCS骨髓單核細(xì)胞直接共培養(yǎng)體系，檢測DFCS中C1C一7表達(dá)降低后對形成破骨細(xì)胞分化和功能的影響通過采用人工成熟配方的礦化誘導(dǎo)液和模擬天然環(huán)境的牙本質(zhì)浸提液，分別對DFCS進(jìn)行誘導(dǎo)，檢測兩種誘導(dǎo)液對DFCS成骨／成牙本質(zhì)／成牙骨質(zhì)分化中相關(guān)基因表達(dá)的影響，檢測DFCS中CIC7表達(dá)降低后對成骨／成牙本質(zhì)／成牙骨質(zhì)分化中相關(guān)基因表達(dá)和對礦化結(jié)節(jié)形成能力的影響。方法實驗一采用出生后3～5天的仔鼠，二次酶消化法分離牙囊細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)，觀察各代牙囊細(xì)胞生長狀態(tài)和特點，通過免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測波形蛋白和角蛋白在所分離細(xì)胞的表達(dá)情況，鑒定細(xì)胞來源。實驗二構(gòu)建慢病毒CLCN7SHRNA載體并體外轉(zhuǎn)染DFCS，QRTPCR檢測其對C1C7表達(dá)水平的干擾效果，并且檢測C1C7沉默后對DFCS破骨和成骨等相關(guān)功能分子表達(dá)水平變化的影響，免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測CLC7在DFCS的表達(dá)情況。實驗建立DFCS／MNCS共培養(yǎng)體系，通過TRAP染色和牙片吸收實驗，即分別計數(shù)形成多核破骨樣細(xì)胞的數(shù)目、牙片上形成吸收陷窩的數(shù)目和面積，檢測降低DFCS的CIC7表達(dá)水平后對共培養(yǎng)體系中破骨細(xì)胞分化和功能的影響。實驗四采用礦化誘導(dǎo)液和牙本質(zhì)浸提液對DFCS進(jìn)行誘導(dǎo)，QRTPCR檢測兩種誘導(dǎo)液對DFCS成骨／成牙本質(zhì)／成牙骨質(zhì)分化相關(guān)基因表達(dá)的影響，檢測II

簡介：學(xué)校代碼10459學(xué)號或申請?zhí)?01111440171密級公開博士學(xué)位論文人胚眼來源CKITSSEA4視網(wǎng)膜祖細(xì)胞生物學(xué)特性的實驗研究本課題受國家重點基礎(chǔ)研究發(fā)展計劃（項目批準(zhǔn)號2013CB967001），國家自然科學(xué)基金（項目批準(zhǔn)號31271400）資助作者姓名周朋義導(dǎo)師姓名彭廣華教授學(xué)科門類醫(yī)學(xué)專業(yè)名稱眼科學(xué)培養(yǎng)院系第一臨床學(xué)院完成時間2015年5月原創(chuàng)性聲明原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者日期年月日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者日期年月日

簡介：溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文論文題目魚叢QE么I鰱E垡雙重縫籃L鰱壘坌￡細(xì)胞膛麥面的前至4腿瘟治痖性疫苴的制備獨生物堂效應(yīng)的班究答期委員會主席鮭型壬差國掛立太堂匡堂蟲墜答辯委員會成員拯瞳蝰差國印箍塞納州童太堂工查明塹加縫監(jiān)廢醫(yī)堂班究壓昌越漁劃匡型太堂金型壅迢劃匡型態(tài)堂論文答辯EL期2Q至墨生墨且至墨目溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文25SAHGM_CSF／SAHTNF0【蛋白錨定LNCAP腫瘤細(xì)胞的疫苗對HPBMCNOD／SCID小鼠腫瘤模型治療效果3126免疫組織化學(xué)染色分析小鼠腫瘤中CD4、CD8T淋巴細(xì)胞的浸27免疫組織化學(xué)染色分析小鼠淋巴結(jié)組織中的人類白細(xì)胞抗原HLA3428免疫組織化學(xué)染色分析小鼠淋巴結(jié)組織中的CD4、CD8Z淋巴細(xì)胞的浸潤3629免疫組織化學(xué)染色分析HPBMCNOD／SCID小鼠肝臟組織中人CD4、CD8Z淋巴細(xì)胞的浸潤程度38210免疫組織化學(xué)染色分析HPBMCNOD／SCID小鼠脾臟組織中人CD4、CD8Z淋巴細(xì)胞的浸潤程度40211腫瘤小鼠模型與空白對照小鼠其生理狀況的差異42212HPBMCNOD／SCID小鼠肝臟中谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT的濃度432I3LNCAP腫瘤特異性細(xì)胞毒性分析CTL44214人源IFNY的檢測45215靜脈注射NK細(xì)胞拮抗劑后小鼠外周血中NK細(xì)胞的檢測46第三部分分析和討論47附錄52參考文獻(xiàn)53

簡介：脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞ADIPOSEDERIVEDSTEMCELLS，ADSCS是從脂肪組織中提取的一種具有高度自我更新和多向分化潛能的多能干細(xì)胞，可以參與多種組織器官的再生修復(fù)，因其來源充足，取材方便等優(yōu)勢，具有良好的臨床應(yīng)用前景。目前，自體ADSCS已在臨床用于軟組織缺損修復(fù)，其在治療心肌缺血和神經(jīng)退行性病變的應(yīng)用也進(jìn)入了臨床試驗階段。ADSCS的生物學(xué)特性是影響干細(xì)胞治療成敗的關(guān)鍵因素之一。隨年齡增加，細(xì)胞發(fā)生自然老化，而且已有研究證實年齡因素會影響機(jī)體多種干細(xì)胞的生物學(xué)功能。那么，ADSCS是否隨供者年齡增加而發(fā)生老化，從而導(dǎo)致其增殖、分化、遷移等生物學(xué)特性改變而最終影響修復(fù)功能還缺乏深入研究。研究目的明確不同年齡段人脂肪組織中間充質(zhì)干細(xì)胞含量和老化程度的差異，及其表現(xiàn)在增殖、分化、遷移等生物學(xué)特性上的改變，為深入了解年齡因素對干細(xì)胞特性的影響及機(jī)制提供更豐富的信息，為不同年齡人群自體ADSCS的臨床應(yīng)用提供有效參考。研究內(nèi)容及方法從臨床獲取24例人右肋緣皮下切取脂肪組織，按供者年齡分布情況，分為三組A兒童組，年齡跨度612歲B青年組，年齡跨度2227歲C老年組，年齡跨度6073歲。通過酶消化法獲得HADSCS，擴(kuò)增至第三代P3用于實驗檢測。采用ONEWAYANOVA及TUKEY檢驗對實驗結(jié)果進(jìn)行多組定量資料的兩兩比較分析。具體研究內(nèi)容包括1單位體積脂肪SVF含量及HADSCS純度檢測膠原酶消化法獲得脂肪組織中有核細(xì)胞作為基質(zhì)血管成分STROMALVULARFRACTION，SVF，比較三組單位體積脂肪中的SVF含量差別SVF貼壁培養(yǎng)獲得HADSCS，流式分析P3代HADSCS干細(xì)胞表面標(biāo)志物表達(dá)情況，比較三組符合干細(xì)胞表面標(biāo)志表達(dá)要求的HADSCS比例。2細(xì)胞老化程度及相關(guān)機(jī)制檢測通過SAΒGAL染色對各年齡組P5代HADSCS老化程度進(jìn)行評價利用MITOSOXTM熒光染色檢測活細(xì)胞線粒體超氧化物含量采用流式分析法檢測HADSCS過氧亞硝酸含量利用REALTIMEPCR檢測HADSCS端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶HTERT、組蛋白去乙?；窼IRT1表達(dá)水平，探索不同年齡組HADSCS出現(xiàn)老化程度差異的機(jī)制。3細(xì)胞增殖及凋亡檢測MTS法檢測各年齡組HADSCS增殖能力，并通過細(xì)胞周期分析及周期調(diào)控基因檢測探索其機(jī)制利用MUSE細(xì)胞狀態(tài)分析儀對細(xì)胞凋亡狀態(tài)進(jìn)行檢測。4細(xì)胞成脂成骨分化能力檢測P3代HADSCS分別成脂成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)，在不同時間點通過組化染色及REALTIMEPCR檢測成脂成骨分化關(guān)鍵表型標(biāo)志基因表達(dá)，明確不同年齡組HADSCS的多向分化能力的差異。5細(xì)胞遷移能力及其機(jī)制檢測利用劃線法檢測無外源因子作用時HADSCS遷移能力利用TRANSWELL法檢測趨化因子作用下HADSCS的遷移能力。比較各年齡組HADSCS遷移能力的差異，并通過檢測各年齡組HADSCS趨化因子受體CXCR4和CXCR7的表達(dá)水平探討其機(jī)制。研究結(jié)果1各年齡組單位體積脂肪SVF含量分別為A組728105±552104個ML、B組632105±451104個ML、C組553105±988104個ML，細(xì)胞存活率均在80％左右，三組間無顯著差異。P3代HADSCS均高表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞陽性表面標(biāo)志物CD44、CD73、CD90、CD105，混合陰性標(biāo)志物CD34、CD11B、CD19、CD45及HLADR的表達(dá)均低于5％，各年齡組符合間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物表達(dá)要求的HADSCS比例沒有顯著性差異。提示單純年齡因素不影響單位體積脂肪組織中SVF含量和擴(kuò)增中HADSCS的純度。2SAΒGAL染色計數(shù)結(jié)果顯示老年組P5代HADSCS染色陽性細(xì)胞比例大于兒童組。進(jìn)一步用MITOSOXTM熒光染色檢測活細(xì)胞線粒體超氧化物表達(dá)，結(jié)果顯示兒童組和青年組樣本染色陰性，而老年組樣本均呈陽性。流式細(xì)胞儀檢測HADSCS過氧亞硝酸含量，結(jié)果顯示隨年齡增長過氧亞硝酸含量有升高趨勢，老年組與兒童組有統(tǒng)計學(xué)差異。而且，老年組HADSCS的HTERT，SIRT1的表達(dá)水平較兒童組和青年組有下降趨勢。以上結(jié)果提示老年組HADSCS老化程度更高。3細(xì)胞增殖實驗結(jié)果顯示隨供者年齡增長，HADSCS增殖速率有減慢趨勢，但各組間無顯著差異。從細(xì)胞周期角度分析發(fā)現(xiàn)，老年組HADSCS處于S期的細(xì)胞比例較其他兩組顯著降低，原癌基因CJUN、CFOS表達(dá)也有降低趨勢，且周期素依賴激酶抑制基因P21表達(dá)顯著增高，提示老年組HADSCS可能發(fā)生了細(xì)胞周期阻滯，由G1期進(jìn)入S期速率減慢。各年齡組HADSCS細(xì)胞凋亡分布狀態(tài)及凋亡調(diào)控基因BCL2、NFΚB、CASPASE8的表達(dá)水平無顯著差異。上述結(jié)果提示隨年齡增長，HADSCS的細(xì)胞周期發(fā)生改變，從而影響其增殖潛能。4HADSCS成脂誘導(dǎo)早期D4，兒童組成脂相關(guān)基因CEBPΑ、PPARΓ、ADIPONECTIN、LPL、FABP4的表達(dá)顯著高于青年組和老年組，但誘導(dǎo)中晚期D8，D12差異消失。油紅O染色及半定量分析顯示三組在誘導(dǎo)不同時間點甘油三酯生成量無顯著差異。而且成脂酶相關(guān)基因及能量代謝基因的表達(dá)在各組間無顯著性差異。提示年齡因素對HADSCS的成脂分化潛能無顯著影響。HADSCS成骨誘導(dǎo)早期D7，老年組成骨相關(guān)基因RUNX2、OCN、OPN、BMP2的表達(dá)水平既顯著低于兒童組。至誘導(dǎo)晚期D21，茜素紅染色半定量檢測顯示老年組成骨誘導(dǎo)礦化水平顯著低于兒童組，且礦化基因OPN的表達(dá)顯著低于兒童組。提示老年供者HADSCS的成骨分化能力較兒童組顯著降低。5細(xì)胞遷移實驗結(jié)果顯示老年組HADSCS細(xì)胞遷移能力顯著低于兒童組，進(jìn)一步研究顯示老年組HADSCS趨化因子受體CXCR4和CXCR7的表達(dá)水平較兒童組有降低趨勢，提示趨化因子受體表達(dá)降低可能是其遷移能力下降的原因之一。研究結(jié)論1年齡因素對胸部皮下單位體積脂肪SVF含量及擴(kuò)增的HADSCS純度無顯著影響。2年齡因素影響HADSCS的老化程度老年個體HADSCS老化程度更高，細(xì)胞內(nèi)ROS含量升高導(dǎo)致氧化應(yīng)激加強(qiáng)可能是其發(fā)生機(jī)制之一。3年齡因素影響HADSCS的增殖能力老年個體HADSCS出現(xiàn)增殖減緩的趨勢，可能與老年組HADSCS發(fā)生周期阻滯有關(guān)。4年齡因素影響HADSCS的分化潛能老年個體HADSCS的體外成脂分化潛能無顯著變化，但成骨分化潛能降低，提示老年患者自體HADSCS用于成骨相關(guān)治療的可行性降低。5年齡因素影響HADSCS的遷移能力老年組HADSCS遷移能力降低，其表面趨化因子受體CXCR4和CXCR7表達(dá)水平下降可能是其原因之一。綜上，年齡因素對胸部切取單位體積脂肪SVF含量沒有顯著影響但隨年齡增長，HADSCS老化程度更高，表現(xiàn)出增殖、分化及遷移能力的相應(yīng)降低。本研究不僅檢測了干細(xì)胞生物學(xué)表現(xiàn)的變化，而且對相應(yīng)機(jī)制進(jìn)行了初步探討，為深入了解年齡因素對干細(xì)胞特性的影響及機(jī)制提供更豐富的信息，為不同年齡人群HADSCS的臨床應(yīng)用提供有效參考。

簡介：華東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文互動卡片教學(xué)法在高中生物學(xué)課堂教學(xué)的實踐研究姓名孔散君申請學(xué)位級別碩士專業(yè)課程與教學(xué)論指導(dǎo)教師俞佩芳201105ABSTRACTNEWCURRICULUMREFORMOFBASICEDUCATIONREQUIRESCHANGESINTHEORIGINALFORMOFTHECLASSROOM，ANDTHETURNOFTRADITIONALTEACHINGMETHODSADVOCATINGINTERACTIVETEACHINGHOWEVER，BEINGINFLUENCEDBYTHETRADITIONALEVALUATIONCRITERIAOFTEACHINGTHEEFFECTIVENESSOFTEACHERSTUDENTINTERACTIONINCLASSROOMISSTILLNOTCOMPLETELYSATISFACTORYWHICHRESTRICTSTHEBIOLOGYTEACHINGREFORMANDDEVELOPMENTTHEREFORE，UNDERTHEGUIDANCEOFMODERNTEACHINGTHEORYTOFINDANEFFECTIVEMODEOFCLASSROOMINTERACTIONANDMAKETEACHINGINTERACTIONFROMFORMALTOTHEREALINTERACTIONISTHESTARTINGPOINTOFTHISTOPICAFTERLEARNINGTHESIGNIFICANCEOFIMPLEMENTINGTHEINTERACTIVETEACHINGUNDERTHEPROPOSEDNEWCURRICULUMANDDEFININGRELATEDCONCEPTOFTHEINTERACTIVECARDTEACHING，THISTHESISDISCUSSESTHERELEVANTTHEORETICALBASIS，ANDDESCRIBESTHERESEARCHPROCESSANDTHESITUATIONATHOMEANDABROADINTHEMAINPARTOFTHEPAPER，WITHTHEQUESTIONNAIRESURVEYOFSECONDARYSCHOOLBIOLOGYCLASSROOMINTERACTIONWEPERTINENTLYPUTFORWARDANDIMPLEMENTTHEINTERACTIVECARDTEACHINGMETHODINORDERTOGRADUALLYREALIZETHECHANGEOFTHEWAYOFTEACHERTEACHINGANDTHEWAYOFSTUDENTLEARNINGINBASEDONSUMMARYINGTHERESULTSOFTHESURVEYDURINGTHEPROCESS，THEAUTHORSELECTEDTHECOURSEBOOKZHEJIANGVERSIONANDTWOPARALLELARTSCLASSESINLONGGANGHIGHSCHOOL，ZHEJIANGFORTHESTUDYANDCARRIEDOUTASEMESTEROFEXPERIMENTALSTUDYBEFOREANDAFTERTHEEXPERIMENTWECONDUCTEDASERIESOFINTERVIEWSANDQUESTIONNAIRE，PRETESTINGANDPOSTTESTINGTHEEXPERIMENTALGROUPANDCONTROILEDGROUPMEASUREMENTINDICATORSINCLUDESTUDENTINTERESTINLEAMING1EARNINGPSYCHOLOGYLEARNINGABILITYCOOPERATIONANDEXCHANGE，ACADEMICACHIEVEMENTANDSOONTHEDATAACQUIREDWEREANALYZEDSTATISTICALLYWITHTHEAIDOFSPSS115ANDWEEVALUATETHEAPPLICATIONEFFECTOFTHEINTERACTIVECARDTEACHINGFROMTHEQUALITATIVEANDQUANTITATIVEASPECTSAFTERIMPLEMENTINGTHEINTERACTIVECARDTEACHINGMETHODINBIOLOGYCLASSROOMOFLLIGLLSCHOOL，WEDRAWTHEFOLLOWINGCONCLUSIONSBYINVESTIGATIONANDANALYSISOFEXPERIMENTALRESULTSL、THESTUDENTS’INTERESTINLEARNINGHASBEENIMPROVEDANDTHESELFCONFIDENCEINSTUDYANDLEARNINGMOTIVATIONHASBEENSTRENGTHENEDAFTERTHEPRACTICEOFTHEINTERACTIVECARDTEACHING；2、THECOOPERATIONANDCOMMUNICATIONBETWEENSTUDENTSHASBEENPROMOTED；3、THESTUDENTS’ACADEMICPERFORMANCEHASBEENIMPROVEDAFTERTHEPRACTICEOFTHEINTERACTIVECARDTEACHING；4、TOSOMEEXTENTTHEWAYOFSTUDENTLEARNINGHASBEENCHANGED；5、THEINTERACTIVECARDTEACHINGMETHODHASPROMOTEDTHEWAYOFTEACHERTEACHINGCHANGEANDTHEGROWTHOFTEACHERS；6、BUTTHESTUDENTS’LEARNINGABILITYISN’TIMPROVEDSIGNIFICANTLYPENDINGFURTHERSTUDYINADDITION，THESTUDYALSODISCUSSESHOWTOCOLLATEANDOPTIMIZETHECARDSACCUMULATEDDURINGTEACHINGPRACTICEANDHOWTOUSETHECARDSTODEVELOPDISTINCTIVECURRICULUMRESOURCESFINALLYTHEDRAWBACKSOFTHISSTUDYANDSOMERECOMMENDATIONSFORFUTURERESEARCHAREPROVIDEDAFTERTHESUMMARYOFTHERESULTSKEYWORDSINTERACTIVECARDTEACHING，BIOLOGYOFHIGHSCHOOL，CLASSROOMTEACHINGII

簡介：分類號R7351UDC密級重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文論文題目干擾干擾YAP1對食管癌對食管癌ECA109細(xì)胞生物學(xué)功能的影響細(xì)胞生物學(xué)功能的影響作者姓名宋杰申請學(xué)位級別碩士學(xué)科、專業(yè)名稱外科學(xué)（胸心外科學(xué)）外科學(xué)（胸心外科學(xué)）論文答辯年月2015年5月2015年5月指導(dǎo)教師姓名（職稱、單位名稱）吳慶琛吳慶琛教授教授重慶醫(yī)科大學(xué)臨床學(xué)院重慶醫(yī)科大學(xué)臨床學(xué)院重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文英漢縮略語名詞對照英漢縮略語名詞對照英文縮寫英文縮寫英文全稱英文全稱中文全稱中文全稱YAP1YESASSOCIATEDPROTEIN1YES相關(guān)蛋白1QRCPREALTIMEQUANTITATIVEPCR實時熒光定量PCRMRNAMESSENGERRNA信使RNACCK8CELLCOUNTINGKIT8細(xì)胞計數(shù)試劑盒8RNAIRNAINTERFERENCERNA干擾SDSPAGESODIUMDODECYLSULFATEPOLYACRYLAEGELELECTROPHESIS十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺電泳ECLELECTROCHEMILUMINESCENCE電化學(xué)發(fā)光SHRNASHTHAIRPINRNA短發(fā)夾RNADDAY天HHOUR小時SSECOND秒MINMINUTE分BPBASEPAIR堿基對MOIMULTIPLEOFINFECTION感染復(fù)數(shù)CDNACOMPLEMENTARYDNA環(huán)腺苷酸BCABICINCHONINICACID二喹啉酸PVDFPOLYVINYLIDENEFLUIDE聚偏二氟乙烯PBSPHOSPHATEBUFFERSALINE磷酸緩沖液DOPTICALDENSITY光密度值EAEARLYAPOPTOTISIS早期凋亡TEADTEADOMAINTEA結(jié)構(gòu)域FCMFLOWCYTOMETRY流式細(xì)胞術(shù)

簡介：浙江師范大學(xué)碩士學(xué)位論文高中生物學(xué)課堂教學(xué)中學(xué)生問題意識的培養(yǎng)姓名呂美靜申請學(xué)位級別碩士專業(yè)學(xué)科教學(xué)（生物）指導(dǎo)教師陳秉初20071201高中生物學(xué)課堂教學(xué)中學(xué)生問題意識的培養(yǎng)英文摘要CULTIVATIONOFQUESTIONINGMINDOFSTUDENTSINSENIORHIGHSCHOOLBIOLOGYCLASSROOMTEACHINGABSTRACTTHEIMPLEMENTATIONOFTHENEWCURRICULUMREFORMREQUIRESTHATTHELEARNINGSTYLEOFTHESTUDENTSSHOULDTRANSFORINFROMTHETRADITIONALACCEPTINGWAYTODISCOVERINGWAYITISTOPROMOTETHESTUDENTCENTEREDINDEPENDENTLEARNINGIDEAANDHIGHLIGHTTHEIMPORTANCEOFCULTIVATINGQUESTIONINGMINDWHICHISTHECORNERSTONEOFTHESPIRITOFINNOVATIONHOWTOTRAINTHEQUESTIONINGMINDOFTHESTUDENTSINTHECLASSROOMTEACHING，ANDRAISETHESKILLSOFDISCOVERINGQUESTIONS，PUTTINGQUESTIONS，ANDSOLVINGQUESTIONSISANIMPORTANTPARTOFINNOVATIONEDUCATIONASTOCHINA’SCURRENTTEACHINGPROCESS，CULTIVATIONOFQUESTIONINGMINDOFTHESTUDENTSDOESNOTGETTHERECOGNITION，ANDQUESTIONINGMINDISSERIOUSLYLACKEDBASEDONTHEBIOLOGYTEACHINGPRACTICEINSENIORHIGHSCHOOL，THEPAVERSUMMARIZESTHERESEARCHESONCULTIVATIONOFQUESTIONINGMINDOFDOMESTICANDFOREIGNSTUDENTS；FROMTHEPERSPECTIVESOFTRADITIONALCULTURE，EVALUATIONSYSTERN，TEACHINGCONCEPT，ANDTEACHINGMETHOD，ANALYZESMEREASONSFORTHELACKOFQUESTION姆GMINDANDPOSITIVESIGNIFICANCEOFTHECULTIVATION；ANALYZESTHERELEVANTTHEORETICALBASISANDTHEFEASIBILITYOFTHECULTIVATIONOFQUESTIONINGMINDINSENIORHIGHSCHOOLBIOLOGYTEACHING；PUTSFORWARDTHEIMPLEMENTATIONSTRATEGYOFTHECULTIVATIONOFQUESTIONINGMINDOFTHESTUDENTSINTHESENIORHIGHSCHOOLBIOLOGYCLASSROOMTEACHING；ONTHEBASISOFTHEORETICALRESEARCH，CONDUCTSPRACTICARESEARCHANDPUTSFORWARDTHERELATEDCASESTHROUGHOBSERVATION，QUESTIONNAIRESURVEYEXPERIMENTALEDUCATION，ANDSOON，THEEXPERIMENTALSTUDYSHOWSTHATINTHECLASSROOMTEACHING，SUBSEQUENTTOTHEIMPLEMENTATIONOFCULTIVATINGQUESTIONINGMIND，THESTUDENTSDARETOASKQUESTIONS，LOVEASKINGQUESTIONS，ANDTHECAPABILITYOFQUESTIONINGHASBEENIMPROVED；THEEMPHASISONTHECULTIVATIONOFQUESTIONINGMINDINCLASSROOMTEACHINGCANMOREORLESSENHANCETHESUBJECTACHIEVEMENTOFTHESTUDENTSTHEREFORE，THECULTIVATINGSTRATEGYINTHEPAPERISFEASIBLEITISREQUIREDTHATPAYINGMOREATTENTIONTOTHECULTIVATIONOFQUESTIONINGMINDOFTHESTUDENTSINSENIORHIGHSCHOOLBIOLOGYCLASSROOMTEACHINGKEYWORDSQUESTIONINGMIND，BIOLOGYCLASSROOMTEACHING，REASON，SIGNIFICANCE，STRATEGYIL

簡介：本文旨在探討現(xiàn)代遠(yuǎn)程生物學(xué)專業(yè)高師本科教育成效及影響其教育成效的因素，目的在于為建立更有效的生物學(xué)現(xiàn)代遠(yuǎn)程教學(xué)模式和創(chuàng)建現(xiàn)代高效的教師培訓(xùn)體系提供借鑒。本研究是在遠(yuǎn)程教育理論、成人學(xué)習(xí)理論及混合學(xué)習(xí)理論的指導(dǎo)下，采用問卷法、訪談法及檔案法等研究方法，以華東師范大學(xué)現(xiàn)代遠(yuǎn)程生物學(xué)專業(yè)高師本科第一屆學(xué)員為主要研究對象，對現(xiàn)代遠(yuǎn)程生物學(xué)專業(yè)高師本科教育成效進(jìn)行了縱向全程研究和橫向比較分析，同時采用統(tǒng)計分析的方法，找出影響其教育成效的主要因素，在此基礎(chǔ)上，指出了現(xiàn)代遠(yuǎn)程生物學(xué)專業(yè)高師本科教育中存在的問題和不足，并提出了相應(yīng)的建議，以期為現(xiàn)代遠(yuǎn)程生物學(xué)專業(yè)高師本科教育的發(fā)展提供參考。本文從主客觀兩個方面考查了學(xué)員的學(xué)習(xí)成效，并得出如下結(jié)論1現(xiàn)代遠(yuǎn)程教學(xué)能夠提高學(xué)員的信息情感、信息知識和信息能力；2生物學(xué)現(xiàn)代遠(yuǎn)程教學(xué)對于學(xué)員拓展教學(xué)內(nèi)容、開設(shè)校本課程、開展生物課外活動、參加各項評比、提高自身教學(xué)能力和理解新課程理念都有幫助；3對于在職教師進(jìn)行生物學(xué)專業(yè)現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育可取得和傳統(tǒng)教學(xué)相近的學(xué)業(yè)成績，能夠達(dá)到本科教學(xué)目標(biāo)。本文還進(jìn)一步研究了影響現(xiàn)代遠(yuǎn)程生物學(xué)專業(yè)教育成效的可能因素，相關(guān)分析表明影響現(xiàn)代遠(yuǎn)程生物學(xué)專業(yè)主要因素是教學(xué)站點，其次是學(xué)習(xí)者對待作業(yè)的態(tài)度，再次是學(xué)習(xí)者的職稱和教齡。其中教學(xué)站點對現(xiàn)代遠(yuǎn)程生物學(xué)專業(yè)高師本科教育成效的影響在于教學(xué)站點定期組織面授輔導(dǎo)，因此，本文認(rèn)為生物學(xué)現(xiàn)代遠(yuǎn)程教學(xué)效果是傳統(tǒng)教學(xué)方法與網(wǎng)絡(luò)教學(xué)方法相互混合而取得的教學(xué)效果，不能簡單地把現(xiàn)代遠(yuǎn)程教學(xué)效果等同于狹義的網(wǎng)絡(luò)教學(xué)效果。通過研究，本文認(rèn)為現(xiàn)代遠(yuǎn)程生物學(xué)專業(yè)高師本科教育中存在如下問題和不足1硬件環(huán)境不能滿足學(xué)員的要求，具體表現(xiàn)為網(wǎng)絡(luò)速度過慢和學(xué)員上網(wǎng)不方便；2軟件建設(shè)還存在不足，具體表現(xiàn)為網(wǎng)絡(luò)課程資源不夠豐富，教學(xué)方法比較單一，部分網(wǎng)絡(luò)課程只是文字和圖片的簡單搬家，缺少聲音和動畫；3實驗教學(xué)缺少實踐環(huán)節(jié)；4遠(yuǎn)程教師與學(xué)員以及學(xué)員與學(xué)員之間交流不足；5部分學(xué)員自主學(xué)習(xí)意識不強(qiáng)烈。根據(jù)上述問題和不足，本文提出以下建議1激發(fā)遠(yuǎn)程教師的參與意識；2開展對遠(yuǎn)程教師的培訓(xùn)；3鼓勵在讀研究生參與現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育工作；4對在校本科生開放網(wǎng)絡(luò)課程；5充分利用現(xiàn)有資源開展實驗教學(xué)；6加強(qiáng)校際間的合作。

簡介：食品安全是一重要的社會民生問題，豬肉是人類主要的動物食品，但豬及其制品易受沙門菌感染，威脅著食品安全及人類健康。豬霍亂沙門菌為宿主適應(yīng)性沙門菌，易引起24月齡仔豬副傷寒病，發(fā)病死亡率較高，對養(yǎng)豬業(yè)中有著嚴(yán)重的危害。同時，鼠傷寒沙門菌作為沙門菌最常見血清型，其動物宿主廣泛，包括豬，是重要的食源性病原菌之一，也是人類食物中毒主要原因。實踐證明，疫苗是防控豬沙門菌病的有效措施之一。豬霍亂沙門菌C500株已經(jīng)作為減毒疫苗使用40余年，該疫苗可從動物飼養(yǎng)源頭控制沙門菌對動物的感染和侵害，能有效預(yù)防仔豬副傷寒，并減少沙門菌對肉產(chǎn)品的污染，從而減少沙門菌通過食物鏈感染人類，阻斷沙門菌人畜之間傳播，防止沙門菌病的發(fā)生。該疫苗在疾病防控中發(fā)揮重大作用，但遺憾的是動物接種該疫苗后不能通過基于玻板凝集的試驗方法，簡單快速鑒別動物是被免疫還是被感染DIFFERENTIATINGINFECTEDFROMVACCINATEDANIMALS，DIVA。為此，本研究構(gòu)建豬霍亂沙門菌的LPS相關(guān)基因RFAJ缺失株，致力于區(qū)分免疫動物和自然感染動物。另外，還構(gòu)建了鼠傷寒沙門菌D6的FAJ缺失株，并對它們生物學(xué)特性和免疫保護(hù)進(jìn)行了評價，初步探索了RFAJ基因在DIVA疫苗設(shè)計及其鑒別診斷中的應(yīng)用潛能。1豬霍亂沙門菌RFAJ基因缺失株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性研究本研究利用ΛRED同源重組方法構(gòu)建了豬霍亂沙門菌C500ΔRFAJ缺失株，測序和PCR鑒定結(jié)果表明，RFAJ基因從基因組中缺失，同時構(gòu)建了回復(fù)株C500ΔRFA∷RFAJ。缺失株C500ΔRFAJ的生長速度與野生株C500相比無明顯變化，液體培養(yǎng)缺失株C500ΔRFAJ易發(fā)生自凝集沉淀現(xiàn)象。與親本株C500相比，缺失株LPS結(jié)構(gòu)因O抗原缺失而不再完整，細(xì)菌由光滑型變?yōu)榇植谛?。C500ΔRFAJ免疫后的小鼠血清不與親本株C500發(fā)生凝集，能夠區(qū)分感染動物和免疫動物的血清。缺失株C500ΔRFAJ感染豬空腸上皮細(xì)胞IPECJ2后，缺失株C500ΔRFAJ對細(xì)胞的黏附和侵染能力有明顯下降P＜001），其在細(xì)胞內(nèi)增殖能力無顯著變化。熒光定量PCR方法檢測C500ΔRFAJ刺激細(xì)胞后細(xì)胞炎性因子MRNA表達(dá)水平，結(jié)果顯示，與親本株C500感染細(xì)胞組相比，TNFΑ、IL4與IL6表達(dá)水平明顯下降。2鼠傷寒沙門菌RFJ基因缺失株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性研究以鼠傷寒沙門菌D6為研究對象，構(gòu)建了D6ΔRFAJ基因缺失株及其回復(fù)株D6ΔRFAJ∷RFAJ。鼠傷寒沙門菌D6ΔRFAJ基因缺失株生物特性與豬霍亂沙門菌缺失株C500ΔRFAJ的生物特性基本一致。缺失株D6ΔRFAJ生長速度與野生株相比無明顯變化，液體培養(yǎng)過程中缺失株發(fā)生自凝集沉淀與其親本株D6相比較，D6ΔRFAJ的LPS結(jié)構(gòu)因O抗原缺失不再完整，細(xì)菌由光滑型變?yōu)榇植谛?，D6ΔRFAJ免疫后的小鼠血清不與其親本株D6發(fā)生凝集。然而，有些生物學(xué)特性發(fā)生了改變，多項生化指標(biāo)發(fā)生改變，缺失株運動能力下降。以缺失株D6ΔRFAJ和親本株D6分別感染豬空腸上皮細(xì)胞IPECJ2后發(fā)現(xiàn)，缺失株D6ΔRFAJ對細(xì)胞的黏附和侵染能力有明顯下降，但增殖能力無特別明顯變化，并在感染8H后缺失株的增殖能力超過親本株D6以BALBC為動物模型，口服途徑免疫6周齡小鼠，間隔2周，再次免疫，2周后以口服途徑攻毒，對D6ΔRFAJ進(jìn)行了免疫保護(hù)效力評價，結(jié)果顯示，血清中抗體水平在14D時達(dá)到較高水平，并且小鼠經(jīng)2次免疫后兩周，能夠?qū)Ω叨玖闟L1344提供80％的免疫保護(hù)缺失株D6ΔRFAJ在體內(nèi)臟器和糞便中的帶菌時間低于親本株D6在體內(nèi)存在時間口服細(xì)菌后，相比較親本株D6，缺失株感染組小鼠臟器的病理切片無明顯病灶。綜上所述，D6ΔRFAJ不僅具有良好的安全性，同時能提供良好的免疫保護(hù)力，為鼠傷寒沙門菌DIVA疫苗設(shè)計奠定重要的基礎(chǔ)。

簡介：骨關(guān)節(jié)炎OSTEOARTHRITIS，OA是一種嚴(yán)重危害中老年人身心健康的退行性關(guān)節(jié)疾病，主要病理變化為關(guān)節(jié)軟骨的磨損及退變，臨床上常出現(xiàn)關(guān)節(jié)疼痛反復(fù)發(fā)作、關(guān)節(jié)活動障礙而且不斷加重等癥狀。關(guān)節(jié)軟骨主要包括軟骨細(xì)胞CHONDROCYTE和細(xì)胞外基質(zhì)EXTRACELLULARMATRIX，ECM兩種組分。目前，OA的發(fā)病機(jī)理仍不清楚，針對軟骨細(xì)胞的損傷進(jìn)行研究對于闡明OA的發(fā)病機(jī)制有重要意義，為OA的預(yù)防及干預(yù)治療提供理論依據(jù)。MICRNASMIRNAS是一種普遍存在于真核生物中的單鏈RNA分子，一般長度約為17～25NT。MIRNA可能存在于基因組的各個區(qū)域，例如基因的間隔區(qū)、編碼基因的內(nèi)含子區(qū)。MIRNA參與調(diào)控許多生命活動，例如細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡和器官發(fā)育等。目前研究表明，MIRNA在OA的發(fā)生與發(fā)展進(jìn)程中有非常重要的意義。目的本研究旨在探討MIR5025P在正常和OA軟骨組織中的表達(dá)水平差異，進(jìn)而研究MIR5025P對IL1Β誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞損傷的生物學(xué)作用及其作用機(jī)制，為OA疾病探尋新的治療靶點并提供新的理論依據(jù)。方法MIR5025P在OA軟骨組織中的表達(dá)及其生物學(xué)作用的研究。首先，用RTPCR方法檢測了四個預(yù)測的MIRNASMIR5025P、MIR138、MIR205、MIR146A在20組正常和OA軟骨組織中的表達(dá)水平差異。用胰蛋白酶及Ⅱ型膠原酶聯(lián)合消化法分離培養(yǎng)正常的軟骨細(xì)胞，然后作不同處理，分為四組對照組，正常培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞IL1Β組，用IL1Β處理的軟骨細(xì)胞MIR5025PMIMIC組，轉(zhuǎn)染MIR5025PMIMIC后再用IL1Β誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞陰性對照組，轉(zhuǎn)染MIR5025PNEGATIVECONTROL后再用IL1Β誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞。RTPCR方法檢測不同處理組MIR5025P的表達(dá)水平差異。MTT方法檢測不同處理組的細(xì)胞增殖水平。流式細(xì)胞儀檢測不同處理組的細(xì)胞凋亡水平。WESTERNBLOT方法檢測不同處理組凋亡相關(guān)蛋白BCL2、BAX和CASPASE3的蛋白表達(dá)水平。RTPCR和WESTERNBLOT方法檢測不同處理組促炎因子IL6、TNFΑ和IL8的表達(dá)水平。RTPCR和WESTERNBLOT方法檢測不同處理組ECM結(jié)構(gòu)蛋白蛋白聚糖和Ⅱ型膠原、金屬蛋白酶MMP3、MMP9和MMP13的表達(dá)水平。關(guān)于WNTΒCATENIN信號通路與MIR5025PP53調(diào)控回路關(guān)系的研究。RTPCR和WESTERNBLOT方法檢測了P53在20組正常和OA軟骨組織中的表達(dá)水平差異。分離培養(yǎng)正常的軟骨細(xì)胞，首先探究P53對MIR5025P的調(diào)控作用，對軟骨細(xì)胞作不同處理后分為四組對照組，正常培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞IL1Β組，用IL1Β處理軟骨細(xì)胞SIP53IL1Β組，轉(zhuǎn)染P53SIRNA，再用IL1Β誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞陰性對照組，轉(zhuǎn)染P53NEGATIVECONTROL，再用IL1Β誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞。關(guān)于MIR5025P的靶標(biāo)基因及相關(guān)通路的研究。RTPCR和WESTERNBLOT方法檢測了TRAF2在20組正常和OA軟骨組織中的表達(dá)水平差異。胰蛋白酶及Ⅱ型膠原酶聯(lián)合消化法分離培養(yǎng)正常的軟骨細(xì)胞。構(gòu)建TRAF23UTR的熒光素酶報告載體，熒光素酶報告實驗研究MIR5025P對TRAF2的調(diào)控作用。結(jié)果MIR5025P在OA軟骨組織中的表達(dá)下調(diào)，且發(fā)揮重要的生物學(xué)作用。與正常對照組相比，OA軟骨組織中MIR5025P的表達(dá)顯著下調(diào)。IL1Β處理軟骨細(xì)胞使MIR5025P的表達(dá)顯著下調(diào)。MIR5025PMIMIC的轉(zhuǎn)染使MIR5025P表達(dá)明顯提升。與對照組相比，IL1Β組的細(xì)胞增殖率下降細(xì)胞凋亡率顯著增加抗凋亡蛋白BCL2表達(dá)顯著下調(diào)，凋亡蛋白BAX和CASPASE3的表達(dá)顯著上調(diào)IL6、IL8和TFΑ的MRNA和蛋白表達(dá)水平顯著上升Ⅱ型膠原和蛋白聚糖的MRNA和蛋白表達(dá)顯著下調(diào)，而MMP3、MMP9和MMP13等金屬蛋白酶的MRNA和蛋白表達(dá)顯著上調(diào)。與IL1Β組相比，MIR5025PMIMIC組的細(xì)胞增殖率有顯著上調(diào)凋亡率顯著降低抗凋亡蛋白BCL2表達(dá)顯著上調(diào)，而凋亡蛋白BAX和CASPASE3的表達(dá)顯著下調(diào)IL6、IL8和TNFΑ的MRNA和蛋白表達(dá)水平顯著下降Ⅱ型膠原和蛋白聚糖的MRNA和蛋白表達(dá)都有顯著升高，而MMP3、MMP9和MMP13的MRNA和蛋白表達(dá)顯著下降。表明WNTΒCATENIN信號通路通過調(diào)控P53，進(jìn)而調(diào)控MIR5025P的表達(dá)。與正常對照組相比，OA軟骨組織中P53的MRNA和蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào)，而且P53與MIRNA5025P的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。與對照組相比，IL1Β組P53的蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào)MIR5025P的表達(dá)水平顯著下降MIR5025P啟動子活性顯著降低。與IL1Β組相比，SIP53組P53的蛋白表達(dá)顯著降低MIR5025P的表達(dá)水平顯著升高M(jìn)IR5025P的啟動子活性顯著上升。與對照組相比，IL1Β組P53的MRNA和蛋白水平顯著升高PGL3P533UTR的熒光素酶活性無顯著變化與IL1Β組相比，MIR5025PMIMIC組P53的蛋白水平顯著降低，而MRNA水平無顯著差異PGL3P533UTR的熒光素酶活性無顯著變化。與正常對照組相比，OA軟骨組織中WNT蛋白WNT1和WNT3A的表達(dá)顯著上調(diào)，ΒCATENIN的表達(dá)水平也顯著上調(diào)。與對照組相比，IL1Β組WNT3A、ΒCATENIN和P53的表達(dá)水平上調(diào)MIR5025P的表達(dá)水平顯著下降。與IL1Β組相比，WNT3A抑制劑組WNT3A、ΒCATENIN和P53的表達(dá)水平均顯著下調(diào)MIR5025P的表達(dá)水平顯著升高。MIR5025P的靶基因TRAF2及TRAF2介導(dǎo)的NFΚB信號通路研究。與正常對照組相比，OA軟骨組織中TRAF2的MRNA和蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào)，而且TRAF2與MIRNA5025P的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。通過軟件預(yù)測出MIR5025P與TRAF23UTR存在靶標(biāo)關(guān)系。與MIR5025P陰性對照轉(zhuǎn)染組相比，MIR5025PMIMIC轉(zhuǎn)染組的PGL3TRAF23UTR載體熒光素酶活性顯著降低，同時PGL3TRAF23UTRMUT載體的熒光素酶活性無顯著變化。與對照組相比，IL1Β組TRAF2的MRNA和蛋白表達(dá)水平都顯著升高與IL1Β組相比，MIR5025PMIMIC組TRAF2的MRNA和蛋白表達(dá)水平顯著下調(diào)。與對照組相比，IL1Β組誘導(dǎo)NFΚB通路的激活，使NFΚB蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào)，而IΚBΑ蛋白表達(dá)水平顯著下調(diào)細(xì)胞增殖率下降細(xì)胞凋亡率顯著增加IL6、IL8和TNFΑ的蛋白表達(dá)水平顯著增加Ⅱ型膠原和蛋白聚糖的蛋白表達(dá)水平顯著減少，而MMP3、MMP9和MMP13等金屬蛋白酶的表達(dá)顯著上升。與IL1Β組相比，PDTC組、MIR5025PMIMIC組和SITRAF2組抑制NFΚB信號通路的激活，使NFΚB表達(dá)水平顯著下降，而IΚBΑ表達(dá)顯著升高細(xì)胞增殖率顯著升高細(xì)胞凋亡率顯著下降IL6、IL8和TNFΑ的蛋白表達(dá)水平顯著降低Ⅱ型膠原和蛋白聚糖的蛋白水平顯著升高，而MMP3、MMP9和MMP13等蛋白酶的表達(dá)顯著降低。結(jié)論綜上所述，本研究結(jié)果表明MIR5025P在OA軟骨組織和IL1Β誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞中表達(dá)顯著下調(diào)，對IL1Β誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞損傷有保護(hù)作用，包括促進(jìn)軟骨增殖，減少細(xì)胞凋亡，降低炎癥因子的生成以及促進(jìn)ECM代謝平衡。P53可以調(diào)控MIR5025P的轉(zhuǎn)錄進(jìn)而影響其表達(dá)，而MIR5025P能夠反向抑制P53的表達(dá)，表明MIR5025P與P53形成一個負(fù)反饋調(diào)控回路。WNTΒCATENIN通過正向調(diào)控P53的表達(dá)影響MIR5025PP53負(fù)反饋調(diào)節(jié)回路。進(jìn)一步機(jī)制分析表明，MIR5025P靶向調(diào)節(jié)TRAF23UTR，降低其表達(dá)，進(jìn)而抑制TRAF2介導(dǎo)的NFΚB信號通路，以此降低IL1Β誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞損傷，發(fā)揮抗凋亡、抗炎和抗基質(zhì)降解等生物學(xué)功能。我們的研究表明MIR5025P有望成為OA防治的新靶點，為OA的預(yù)防和治療提供新的研究方向。

簡介：目的本究通過檢測PCDH20（PROTOCADHERIN20）在人乳腺癌細(xì)胞株、乳腺癌組織及其癌旁組織中的表達(dá)情況，并結(jié)合乳腺癌臨床和病理學(xué)特征的分析探討其臨床意義；通過在人乳腺癌細(xì)胞中過表達(dá)PCDH20，觀察其對細(xì)胞增殖、遷移、侵襲等生物學(xué)行為的影響，并深入探討其發(fā)揮生物學(xué)功能的作用機(jī)制。方法1利用逆轉(zhuǎn)錄PCR及實時熒光定量PCR分別檢測基因PCDH20在人乳腺癌細(xì)胞株（BT549、MDAMB231、MDAMB468、MCF7、SKBR3、T47D、YYCB1、YYCB3、ZR751）和人乳腺癌、癌旁組織及正常乳腺組織中的MRNA表達(dá)水平，并分析其與臨床資料及病理特征的相關(guān)性；2分別通過通過免疫熒光觀察PCDH20蛋白在細(xì)胞中的定位，通過免疫組化觀察其在乳腺組織中的定位；3通過體外細(xì)胞實驗（CCK8和TRANSWELL實驗）觀察PCDH20基因?qū)θ巳橄侔┘?xì)胞增殖、遷移、侵襲能力的影響，研究PCDH20在人乳腺癌細(xì)胞株中的生物學(xué)功能；4通過WESTERNBLOT在過表達(dá)PCDH20和非過表達(dá)的穩(wěn)定細(xì)胞株中對SMAD2、PHOSPHOSMAD2、SMAD3、PHOSPHOSMAD3、ECADHERIN、MMP9進(jìn)行檢測。結(jié)果1PCDH20在MCF7、YCCB1乳腺癌細(xì)胞株中表達(dá)缺失，而在MDAMB468和ZR751中表達(dá)降低；PCDH20在乳腺癌組織中較癌旁組織及正常乳腺癌組織表達(dá)下調(diào)，其在正常乳腺組織與癌旁組織中的表達(dá)水平無統(tǒng)計學(xué)差異，通過進(jìn)一步統(tǒng)計學(xué)分析后發(fā)現(xiàn)PCDH20的表達(dá)水平與各臨床及病理特征無明顯相關(guān)；2免疫熒光和免疫組化實驗表明PCDH20蛋白分別定位于細(xì)胞膜和乳腺組織中乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞；3在MCF7和MDAMB468乳腺癌細(xì)胞株中過表達(dá)PCDH20的實驗組細(xì)胞，其增殖能力未受到抑制；4在MCF7和MDAMB468中，分別過表達(dá)PCDH20后的實驗組細(xì)胞較對照組細(xì)胞穿過TRANSWELL小室的數(shù)目分別降低538％（P5MDAMB468乳腺癌細(xì)胞株過表達(dá)PCDH20后，其侵襲能力減弱，穿過鋪有基質(zhì)膠的小室的細(xì)胞數(shù)目減少437（P6WESTERNBLOT實驗顯示，在過表達(dá)PCDH20的MCF7和MDAMB468中，PHOSPHOSMAD2、PHOSPHOSMAD3、MMP9的表達(dá)水平下降，而ECADHERIN的表達(dá)水平升高；結(jié)論1PCDH20在乳腺癌細(xì)胞MCF7、MDAMB468、ZR751和YCCB1中表達(dá)缺失或降低2PCDH20在乳腺癌組織中較癌旁組織和正常乳腺組織中表達(dá)水平降低（P4PCDH20在乳腺癌中為抑癌基因，抑制MCF7、MDAMB468細(xì)胞遷移能力，降低了MDAMB468的侵襲能力；5PCDH20可能通過降低SMAD2、SMAD3的磷酸化水平影響下游ECADHERIN和MMP9的表達(dá)水平，從而減弱細(xì)胞的遷移及侵襲能力。