簡(jiǎn)介：南方醫(yī)科大學(xué)2012級(jí)碩士學(xué)位論文MIR375對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞株HCTL16的生物學(xué)功能的影響THEBIOLOGICALFUNCTIONOFMIR一375INCOLONCANCERHCTL16CELLS課題來(lái)源廣州市科技計(jì)劃項(xiàng)目NO20118031800004學(xué)位申請(qǐng)人劉寶龍導(dǎo)師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學(xué)院答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)委員吳斌文教授消化病學(xué)專業(yè)型碩士研究生第二臨床醫(yī)學(xué)院張亞厲教授楊見權(quán)教授趙亞剛教授吳斌教授林漫鵬教授2015年03月10日廣州中文摘要染色體8Q22，此位點(diǎn)是與多種惡性腫瘤的發(fā)生高度相關(guān)的地帶。AEG1在多種惡性腫瘤中高表達(dá)，我們的前期研究發(fā)現(xiàn)AEG1與結(jié)直腸癌的形成和發(fā)展密切相關(guān)，可促進(jìn)大腸癌的增殖、遷移、侵襲能力，誘導(dǎo)腫瘤新生血管的形成和化療耐藥等。MIR375是MICRORNAS家族中的一員，研究發(fā)現(xiàn)MIR375可通過(guò)靶向調(diào)節(jié)AEG1基因的表達(dá)，從而參與肝癌和頭頸部鱗狀細(xì)胞癌123等的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，但MIR一375與AEGI的關(guān)系尚未在結(jié)直腸癌中得到證實(shí)。本研究使用化學(xué)合成的MIR375模擬物轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌HCTLL6細(xì)胞，上調(diào)結(jié)腸癌HCTLL6細(xì)胞中MIR375的表達(dá)，通過(guò)研究MIR375對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞株HCTLL6生物學(xué)行為的影響，旨在為結(jié)腸癌的發(fā)病機(jī)制提供新的理論依據(jù)。目的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將MIR375MIMICS轉(zhuǎn)入HCTL16細(xì)胞上調(diào)MIR375的表達(dá)，用實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)MIR375和AEG1MRNA的表達(dá)情況；MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力的改變情況；流式細(xì)胞技術(shù)檢澳UMIR一375對(duì)細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的影響我們通過(guò)研究MIR375對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞株HCTLL6生物學(xué)行為的影響，旨在為結(jié)腸癌的發(fā)病機(jī)制提供新的理論依據(jù)。材料和方法1材料人結(jié)直腸癌細(xì)胞株CAC02、HCTI16、SW480、SW620均購(gòu)自CTCC中國(guó)模式培養(yǎng)物集存庫(kù)CHINESETYPECULTURECOLLECTION，中國(guó)北京DMEM培養(yǎng)基、RPMI一1640培養(yǎng)基和胎牛血清均購(gòu)白美國(guó)GIBCO公司；025％胰蛋白酶購(gòu)自杭州吉諾生物有限公司；MIR一375MIMICS和NEGATIVECONTROL轉(zhuǎn)染試劑盒購(gòu)自廣州銳博生物科技有限公司；LIPOFECTMANINETM2000及TRLZOL試劑均購(gòu)自美國(guó)INVITROGEN公司；噻唑藍(lán)MTT購(gòu)自廣州威佳公司；二甲基亞砜DMSO購(gòu)自美國(guó)SIGMA公司；細(xì)胞周期及凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)于杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司；REVERTAIDFIRSTSTRANDCDNASYNTHESISKIT購(gòu)自FERMENTAS公司；SYBRPREMIXEXTAQIITLIRNASEHPLUS為TAKARA公司產(chǎn)品。

簡(jiǎn)介：原創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含獲得廣西醫(yī)科大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即在校期間論文的知識(shí)產(chǎn)權(quán)屬?gòu)V西醫(yī)科大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保存論文的電子和紙質(zhì)文檔，可以借閱或上網(wǎng)公布本論文的部分或全部?jī)?nèi)容，可以采用影印、復(fù)印或其他手段保存、匯編本論文，學(xué)校可以向國(guó)家有關(guān)機(jī)關(guān)或機(jī)構(gòu)送交論文的電子和紙質(zhì)文檔，允許論文被查閱和借閱。同意廣西醫(yī)科大學(xué)可以用不同的方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或者部分內(nèi)容。保密論文在解密后遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者簽名逢腳蝴期≯，步。如刁日目錄反轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的過(guò)表達(dá)M濃21對(duì)肝癌細(xì)胞干樣生物學(xué)特性的影響摘要1ABSTRACT4▲』L刖舌8第一部分反轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的過(guò)表達(dá)IILIR21穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建111材料與儀器112實(shí)驗(yàn)方法153結(jié)果364討論425結(jié)論45參考文獻(xiàn)46第二部分過(guò)表達(dá)血R21對(duì)肝癌細(xì)胞干樣生物學(xué)特性的影響501材料與儀器502方法533結(jié)果624討論685結(jié)論72參考文獻(xiàn)73全文小結(jié)771結(jié)論772創(chuàng)新之處77

簡(jiǎn)介：學(xué)校代碼10459學(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)?01212443410密級(jí)公開碩士學(xué)位論文TM4SF1在乳腺癌中的表達(dá)及其可能的生物學(xué)功能探索作者姓名馬會(huì)芳導(dǎo)師姓名陸士新（院士）王留興（教授）學(xué)科門類醫(yī)學(xué)專業(yè)名稱腫瘤學(xué)培養(yǎng)院系鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院完成時(shí)間2015年5月原創(chuàng)性聲明原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的科研成果。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者日期年月日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí)，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者日期年月日

簡(jiǎn)介：痢疾桿菌是細(xì)菌性痢疾的病原菌，它能夠利用自身毒性質(zhì)粒編碼的三型分泌系統(tǒng)向宿主細(xì)胞內(nèi)分泌效應(yīng)蛋白。效應(yīng)蛋白以宿主細(xì)胞內(nèi)的關(guān)鍵信號(hào)分子為靶標(biāo)，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，以利于痢疾桿菌在宿主細(xì)胞內(nèi)增殖轉(zhuǎn)移。蛋白質(zhì)泛素化途徑是細(xì)胞內(nèi)極其重要的一個(gè)翻譯后修飾途徑，因此也常常被效應(yīng)蛋白作為攻擊目標(biāo)。本文以痢疾桿菌效應(yīng)蛋白OSPI和IPAH3為研究對(duì)象，利用結(jié)構(gòu)生物學(xué)的方法，解析效應(yīng)蛋白調(diào)節(jié)宿主泛素化過(guò)程的分子機(jī)制。已有研究發(fā)現(xiàn)痢疾桿菌效應(yīng)蛋白OSPI能夠使UBC13的GLN100脫酰胺化，導(dǎo)致UBC13失活，破壞了宿主細(xì)胞內(nèi)的NFKB信號(hào)通路。IPAH3作為一個(gè)泛素連接酶，能夠特異地結(jié)合共價(jià)連接有泛素的UBCH5C，在下游底物上連接形成K48的泛素鏈。但是，OSPIUBC13與IPAHUBCH5C間相互作用的分子機(jī)制仍是一個(gè)未解之謎。本文通過(guò)原核表達(dá)系統(tǒng)高效表達(dá)了OSPI及其宿主靶分子泛素結(jié)合酶UBC13，并通過(guò)純化獲得二者的高純度重組蛋白，二者經(jīng)孵育后形成穩(wěn)定的效應(yīng)蛋白宿主靶分子復(fù)合物。通過(guò)復(fù)合物結(jié)晶實(shí)驗(yàn)，我們獲得了衍射分辨率為23埃的復(fù)合物晶體。通過(guò)結(jié)構(gòu)分析，我們發(fā)現(xiàn)OSPI通過(guò)兩個(gè)不同的表面電荷區(qū)與UBC13的Α1螺旋、L1LOOP和L2LOOP相互作用，也進(jìn)一步揭示了OSPI的脫酰胺酶催化機(jī)制。另外，我們通過(guò)原核表達(dá)系統(tǒng)，高效表達(dá)和純化獲得了IPAH3的重組蛋白，并且成功地在體外合成了UB共價(jià)連接的泛素結(jié)合酶UBCH5CUBCH5C～UB。然后，我們利用分子篩證明了IPAH3與UBCH5C～UB之間的相互作用。在經(jīng)孵育后篩選，我們獲得了許多的結(jié)晶條件，從眾多條件中成功篩選到IPAH3UBCH5C～UB復(fù)合物晶體。接下來(lái)我們需要進(jìn)一步解析IPAH3UBCH5C～UB復(fù)合物晶體結(jié)構(gòu)，進(jìn)而闡明二者之間的相互作用。

簡(jiǎn)介：西北師范大學(xué)碩士學(xué)位論文高中生物學(xué)教學(xué)中培養(yǎng)學(xué)生自主學(xué)習(xí)的實(shí)驗(yàn)研究姓名劉陽(yáng)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)學(xué)科教學(xué)生物指導(dǎo)教師俞詩(shī)源20061101ABSTRACTSELFREGULATEDLEARNINGISTHEMOSTIMPORTANTSUBJECTINNOWADAYSEDUCATIONRESEARCH，ANDALSOASTUDYMETHODPROMOTEDEXTREMELYAROUNDTHEWORLDCULTNATINGSTUDENTSTOHAVEAHABITOFSELFREGULATEDLEARNINGISNOTTHETASKOFEACHEDUCATORSHOULDCONSIDER，BUTALSOTHEKEYROUTEFORSTUDENTFUTUREDEVELOPMENTONTHEBASISOFSELFREGULATEDLEARNINGACADEMIC，THETRAININGPATTERNOFTARGETSETTINGCOMBININGWITHPERCEIVESTRATEGYISDISCUSSEDINTHISPAPERTHETEACHINGMETHODOFSELFREGULATEDLEARNINGHADBEENUSEDONTHECOURSEOFBIOLOGYSTUDYFORSENIORSTUDENTSINGRADETWOOFLANZHOUNO21MIDDLEFORNEARLYONEYEARSINCEAUGUSTIN2005THERESULTSWEREQUITEDIFFERENTEXPERIMENTCLASSWASADOPTEDTRADITIONALTEACHINGMETHODCOMBININGWITHTHESELFREGULATEDLEAMINGANDCONTROLCLASSONLYADOPTEDTRADITIONALTEACHINGMETHODTHEMAINCONTENTOFTHESELFREGULATEDLEARNINGWERETARGETSETTINGANDPERCEIVESTRATEGYTHROUGHCOMPARE，INVESTIGATIONANDSTATISTICSANALYSIS，THEFINALRESULTSWERESHOWEDASBELOWIYRHROUGHTRAININGOFTARGETSETTINGCOMBININGWITHPERCEIVESTRATEGYTHEEXAMRESULTSOFSTUDENTSWEREIMPROVEDOBVIOUSLY；匡THROUGHTRAININGOFTARGETSETTINGCOMBININGWITHPERCEIVESTRATEGYSTUDENTABILITYOFSELFREGULATEDLEARNINGWASENHANCEDGREATLY；③THETRAININGOFTARGETSETTINGCOMBININGWITHPERCEIVESTRATEGYCANINCREASESTUDENT’SCREATIVECONSCIOUSNESSANDCREATIVECAPABILITYEFFECTIVELYKEYWORDSTHETEACHINGOFBIOLOGY；SELFREGULATEDLEARNING；EXPERIMENTRESEARCHIII

簡(jiǎn)介：墜蘭墜墅基因查墾繩胞濫曼疸發(fā)痘狃劍主鮑生塑堂邊能玨究⑧指導(dǎo)教師簽名論文評(píng)閱人1評(píng)閱人2評(píng)閱人3評(píng)閱人4評(píng)閱人5答辯委員會(huì)主席委員1委員2委員3委員4委員5浙江大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得逝姿盤堂或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名J違胡氏戳簽字日期矽，J年另月B日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解逝望盤鱟有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交本論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)逝鎏盤堂可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索和傳播，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書學(xué)位論文作者簽名誰(shuí)該稂簽字日期彬年弓月易日一毯J／帶汰簽字日鈿溯廠年≥月6日

簡(jiǎn)介：分類號(hào)R73371UDC密級(jí)重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文論文題目RARΑ和NLSRARΑ蛋白的細(xì)胞生物學(xué)功能分析蛋白的細(xì)胞生物學(xué)功能分析及其及其作為作為轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄因子的實(shí)驗(yàn)研究的實(shí)驗(yàn)研究作者姓名蔣開玲蔣開玲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士學(xué)科、專業(yè)名稱臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)論文答辯年月2015年5月2015年5月指導(dǎo)教師姓名（職稱、單位名稱）劉北忠劉北忠教授教授重慶醫(yī)科大學(xué)重慶醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院、重慶市市級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、重慶市市級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室重慶醫(yī)科大學(xué)重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生研究生學(xué)位論文學(xué)位論文英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照英文縮寫英文縮寫英文全稱英文全稱中文全稱中文全稱AABSORBANCE吸光度ADEADENINE腺嘌呤AGAGAROSE瓊脂糖AMPAMPICILLIN氨芐青霉素APLACUTEPROMYELOCYTICLEUKEMIA急性早幼粒細(xì)胞白血病ATRAALLTRANSRETINOICACID全反式維甲酸BPBASEPAIR堿基對(duì)BSAALBUMINFROMBOVINESERUM牛血清白蛋白CDSCODINGSEQUENCE編碼序列區(qū)CO2CARBONDIOXIDE二氧化碳CCK8CELLCOUNTINGKIT8CCK8試劑盒℃CENTIGRADE攝氏度DAPI4,6DIAMIDINO2PHENYLINDOLE4,6二脒基2苯基吲哚DDH2ODOUBLEDISTILLEDWATER雙蒸水DEPCDIETHYPYROCARBONATE焦炭酸二乙酯DMSODIMETHYLSULFOXIDE二甲基亞砜DMEMDULBECCO′SMODIFIEDEAGLE′SMEDIUM改良EAGLE/HAM培養(yǎng)基DNADEOXYRIBONUCLEICACID脫氧核糖核酸EBETHIDIUMBROMIDE溴化乙錠EDTAETHYLENEDIAMINETETRAACETICACID乙二胺四乙酸

簡(jiǎn)介：轉(zhuǎn)鐵蛋白是藥物的一種靶向蛋白，可以攜帶藥物在體內(nèi)運(yùn)輸。而青蒿素類藥物在機(jī)體里可以自發(fā)的與轉(zhuǎn)鐵蛋白連接，通過(guò)轉(zhuǎn)鐵蛋白到達(dá)病發(fā)位置。因此，本實(shí)驗(yàn)以青蒿琥酯為載體，通過(guò)化學(xué)手段將喜樹堿與青蒿琥酯相連，使其具有靶向性，減少毒副作用，提高藥物的藥效和生物利用度。為了提高喜樹堿的靶向能力、生物活性和生物利用度，根據(jù)文獻(xiàn)和前人的實(shí)驗(yàn)，本研究通過(guò)酯化反應(yīng)合成青蒿琥酯與喜樹堿偶聯(lián)物CQ，該方法時(shí)間段并且產(chǎn)率高。通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)考察了新偶聯(lián)物對(duì)MCF7細(xì)胞和SMMC7721的抑制活性。新偶聯(lián)物在體內(nèi)的抗腫瘤活性和藥物毒性都在小鼠體內(nèi)進(jìn)行了考察，并且對(duì)CQ與轉(zhuǎn)鐵蛋白的作用進(jìn)行了分子生物學(xué)的評(píng)價(jià)。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表CQ對(duì)MCF7細(xì)胞和SMMC7721細(xì)胞的抑制效果都是高于喜樹堿和青蒿琥酯的。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中CQ表現(xiàn)出了較低的毒性和良好的抑瘤效果。在熒光淬滅實(shí)驗(yàn)中，熒光光譜顯示偶聯(lián)物和轉(zhuǎn)鐵蛋白的作用方式為靜態(tài)除滅，熱力學(xué)參數(shù)ΔH＞0ΔG＜0表明了偶聯(lián)物與蛋白的作用是自發(fā)的吸熱反應(yīng)，偶聯(lián)物與蛋白之間的作用力以氫鍵為主ΔH＞0ΔS＞0。與此同時(shí)，同步熒光結(jié)果表明新的偶聯(lián)物并沒(méi)有對(duì)轉(zhuǎn)鐵蛋白的構(gòu)象產(chǎn)生影響。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，這個(gè)新的抗腫瘤思路，優(yōu)于目前的喜樹堿和青蒿琥酯抗癌機(jī)制，這個(gè)新的抗癌機(jī)制對(duì)于藥物的協(xié)同作用和減少藥物的副作用都提供了幫助。

簡(jiǎn)介：芥子氣SULFURMUSTARD，SM是一種具有強(qiáng)烷基化能力的起皰劑，可快速透過(guò)皮膚、眼睛和肺支氣管粘膜等途徑進(jìn)入生物體內(nèi)與多種生命物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)。由于其制備簡(jiǎn)單、殺傷力大，在戰(zhàn)爭(zhēng)中被廣泛使用。當(dāng)前，日本二戰(zhàn)后遺棄在華的大量化學(xué)武器，其中以SM為主，仍在威脅中國(guó)人民的生命和財(cái)產(chǎn)安全。隨著近年來(lái)國(guó)際極端民族主義和宗教主義的死灰復(fù)燃，SM被用于恐怖襲擊和不對(duì)稱戰(zhàn)爭(zhēng)的可能性日益增大，因此繼續(xù)對(duì)SM損傷機(jī)理和防治手段的研究仍有重要的現(xiàn)實(shí)意義。自首次合成至今，對(duì)SM的毒理機(jī)制研究已持續(xù)了一個(gè)多世紀(jì)，科學(xué)家對(duì)SM損傷機(jī)制提出了很多假說(shuō)，但其明確機(jī)理仍然未知。由于芥子氣具有親脂性，暴露后會(huì)迅速透過(guò)機(jī)體表面屏障，侵入機(jī)體組織和循環(huán)系統(tǒng)，可與DNA、蛋白質(zhì)等絕大多數(shù)生物分子發(fā)生廣泛烷基化反應(yīng)。這些分子的烷基化會(huì)影響DNA的合成與修復(fù)，干擾酶活和細(xì)胞代謝，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡、機(jī)體炎癥、免疫反應(yīng)和代謝紊亂的發(fā)生。同時(shí)SM損傷存在潛伏期，其癥狀在暴露數(shù)小時(shí)后才會(huì)出現(xiàn)，且癥狀反復(fù)多樣，目前尚無(wú)SM損傷的特效治療方案。因此SM仍是一種難防難治的化學(xué)戰(zhàn)劑。本課題組前期研究建立的SM原型的衍生化液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)方法，針對(duì)SM原型在大鼠組織中的分布進(jìn)行研究，結(jié)果提示脂肪組織中SM原型存在高水平持續(xù)留存，發(fā)現(xiàn)了SM脂肪蓄積的新現(xiàn)象并進(jìn)行了驗(yàn)證。同時(shí)通過(guò)SMDNA加合物同時(shí)定量檢測(cè)方法的建立，本課題組對(duì)SMDNA加合物在大鼠組織中的分布進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)脂肪含量高的組織中，如骨髓和腦，其SMDNA加合物含量也較高，且SMDNA加合物在脂肪組織中可較長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)存在，提示親脂環(huán)境對(duì)加合物形成可能具有顯著影響?；趯?shí)驗(yàn)室前期的研究結(jié)果，本論文通過(guò)體外染毒后脂肪細(xì)胞在DNA加合物形成、存活率和細(xì)胞損傷評(píng)價(jià)，以及大鼠染毒后脂肪組織脂體系數(shù)、病理?yè)p傷評(píng)價(jià)，對(duì)SM脂肪蓄積的毒性效應(yīng)進(jìn)行了研究通過(guò)染毒后大鼠脂源因子MRNA水平和蛋白水平評(píng)價(jià)，初步探討了SM脂肪蓄積的生物學(xué)意義。全文共分為五章。第一章是前言。該部分對(duì)SM在理化性質(zhì)、歷史、損傷機(jī)制方面的研究進(jìn)展進(jìn)行了介紹，并對(duì)近年來(lái)脂肪組織功能和脂源因子研究的成果進(jìn)行了評(píng)述。提出了本論文的研究目的、研究?jī)?nèi)容和創(chuàng)新點(diǎn)。第二章是體外染毒模型的建立。通過(guò)分離大鼠原代前脂肪細(xì)胞，對(duì)脂肪細(xì)胞分化條件進(jìn)行了優(yōu)化通過(guò)培養(yǎng)人皮下前脂肪細(xì)胞（HUMANPREADIPOCYTESSUBCULTANEOUS，HPAS），成功獲得高分化率80％的成熟脂肪細(xì)胞HUMANADIPOCYTESSUBCULTANEOUS，HAS并成功培養(yǎng)傳代三種SM主要損傷組織的人源化細(xì)胞包括人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞HACAT、人肺纖維細(xì)胞HLF、正常人類肝細(xì)胞L02，作為對(duì)照細(xì)胞，為SM脂肪蓄積研究體外染毒實(shí)驗(yàn)提供細(xì)胞模型。同時(shí)通過(guò)CCK8方法檢測(cè)包括成熟脂肪細(xì)胞在內(nèi)五種細(xì)胞的SM染毒IC50，結(jié)果顯示HAS細(xì)胞的SM染毒IC504843±227ΜM遠(yuǎn)高于其它四種細(xì)胞HACAT775±55ΜM、HLF699±43ΜM、L02738±37ΜM、HPAS625±04ΜM，初步說(shuō)明脂肪細(xì)胞對(duì)SM染毒具有抵抗能力。第三章是體外染毒SMDNA加合物檢測(cè)?；谝呀⒌腢PLCMSMS方法，進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證。結(jié)果表明該方法對(duì)從體外染毒細(xì)胞中提取SMDNA加合物的檢測(cè)，具有較好的選擇性、檢測(cè)線性、準(zhǔn)確度、精密度和穩(wěn)定性，其定量限低N7HETEG為002NGML、BISG為005NGML、N3HETEA為01NGML，基質(zhì)效應(yīng)小，回收率高，樣品穩(wěn)定性也較好。各項(xiàng)參數(shù)均符合驗(yàn)證要求。確定其可被用于體外染毒細(xì)胞SMDNA加合物的同時(shí)定量檢測(cè)。通過(guò)對(duì)包括成熟脂肪細(xì)胞在內(nèi)的五種細(xì)胞進(jìn)行體外染毒SMDNA加合物的量時(shí)關(guān)系進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)包括成熟脂肪細(xì)胞在內(nèi)的不同染毒細(xì)胞SMDNA加合物形成差異進(jìn)行了研究。結(jié)果表明SMDNA單取代加合物形成速度高于雙取代加合物，而三種加合物的相對(duì)含量依次為N7HETEG＞BISG＞N3HETEA不同細(xì)胞SMDNA加合物形成的峰值差異較小，但成熟脂肪細(xì)胞雙取代加合物占比更高＞33％，在SMDNA加合物達(dá)峰時(shí)間和清除速度上也低于其它組織來(lái)源細(xì)胞。從而在體外水平證實(shí)了SM脂肪蓄積現(xiàn)象和脂肪細(xì)胞對(duì)SM染毒的抵抗能力。第四章是SM體外染毒對(duì)細(xì)胞功能的影響。通過(guò)高內(nèi)涵分析，從細(xì)胞核和細(xì)胞形態(tài)、溶酶體、線粒體、氧化應(yīng)激和DNA損傷方面對(duì)HPAS和HAS在SM染毒后細(xì)胞損傷與染毒劑量和染毒時(shí)間的變化趨勢(shì)進(jìn)行研究。結(jié)果顯示SM染毒造成了細(xì)胞損傷，其程度與染毒劑量和染毒時(shí)間成依賴關(guān)系染毒HAS在溶酶體、線粒體、氧化應(yīng)激和DNA損傷方面細(xì)胞毒性指標(biāo)隨染毒劑量和時(shí)間變化的速度和水平均低于HPAS。從細(xì)胞毒性參數(shù)角度揭示了成熟脂肪細(xì)胞對(duì)SM染毒損傷抵抗能力。同時(shí)選擇HAS和HLF染毒上清與HACAT、HLF和L02染毒細(xì)胞共培養(yǎng)，通過(guò)CCK8方法對(duì)染毒上清共培養(yǎng)細(xì)胞的活性進(jìn)行檢測(cè)，研究HAS和HLF染毒上清對(duì)其它細(xì)胞活性的影響。結(jié)果表明HLF細(xì)胞染毒上清會(huì)提高其它細(xì)胞體外染毒IC50值而HAS細(xì)胞染毒上清則會(huì)降低其它細(xì)胞體外染毒IC50值，同時(shí)降低程度與HAS的染毒劑量成依賴關(guān)系。提示了脂源因子對(duì)其它細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用及脂肪蓄積SM的繼發(fā)毒性，以及清除脂肪細(xì)胞中的SM對(duì)降低機(jī)體繼發(fā)損傷的重要性。第五章是SM染毒對(duì)大鼠脂肪組織功能的影響。通過(guò)大鼠染毒模型，獲得染毒大鼠體重和脂體系數(shù)變化趨勢(shì)數(shù)據(jù)。結(jié)果顯示脂肪組織在機(jī)體染毒應(yīng)激反應(yīng)過(guò)程中被劇烈消耗，提示了脂肪中蓄積的SM隨組織劇烈消耗而再次釋放的可能。通過(guò)病理切片，評(píng)價(jià)了皮下、腎周、附睪和褐色脂肪組織的病理?yè)p傷情況。結(jié)果顯示脂肪組織暴露損傷主要體現(xiàn)為血管擴(kuò)張，和血管周圍炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，對(duì)成熟脂肪細(xì)胞的損傷則并不明顯。從體內(nèi)水平驗(yàn)證了成熟脂肪細(xì)胞對(duì)SM染毒的抵抗能力。通過(guò)RTQPCR和定量ELISA，對(duì)大鼠皮下脂肪組織中各脂源因子水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示SM染毒會(huì)導(dǎo)致促炎因子上調(diào)、抑炎因子下調(diào)，脂肪細(xì)胞分化因子和能量代謝因子的分泌也受到影響。而脂源因子在皮下脂肪和血清中的含量變化趨勢(shì)相同。一方面證明暴露后脂肪組織局部炎癥和機(jī)體系統(tǒng)炎癥的同步發(fā)生和發(fā)展另一方面說(shuō)明脂肪組織在SM暴露后不但具有重要的能量供應(yīng)作用，更可發(fā)揮重要炎癥和代謝調(diào)節(jié)作用，揭示了SM脂肪蓄積的重要生物學(xué)意義。

簡(jiǎn)介：上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文人原發(fā)性胃、腸彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤臨床生物學(xué)特性的比較研究碩士研究生王華學(xué)號(hào)1131502065導(dǎo)師朱建國(guó)教授副導(dǎo)師齊俠副主任醫(yī)師申請(qǐng)學(xué)位獸醫(yī)碩士學(xué)科獸醫(yī)所在單位農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院答辯日期2015年7月18日授予學(xué)位單位上海交通大學(xué)

簡(jiǎn)介：上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文牙周牙周GTR的生物學(xué)基礎(chǔ)與影響因素的生物學(xué)基礎(chǔ)與影響因素BIOLOGICALBASISINFLUENCEFACTSOFPERIODONTALGUIDEDTISSUEREGENERATION作者姓名作者姓名靳思瑩導(dǎo)師尹元正副教授學(xué)科口腔臨床醫(yī)學(xué)學(xué)號(hào)1127009104答辯日期答辯日期2015年04月28日ADISSERTATIONSUBMITTEDTOSHANGHAIJIAOTONGUNIVERSITYFTHEDEGREEOFMASTEROFDENTALSCIENCEBIOLOGICALBASISINFLUENCEFACTSOFPERIODONTALGUIDEDTISSUEREGENERATIONPRESENTEDBYJINSIYINGBDSACCEPTEDONTHERECOMMENDATIONOFPROFYINYUANZHENGCOLLEGEOFMEDICINESHANGHAIJIAOTONGUNIVERSITYSHANGHAICHINAKEYWDSGUIDEDTISSUEREGENERATIONCRITICALSIZEDEFECTPERIODONTOLOGYAPRIL282015

簡(jiǎn)介：分類號(hào)R39212單位代碼10427密級(jí)公開學(xué)號(hào)2012210425碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文MIR27A在WM239細(xì)胞中的表達(dá)及對(duì)其生物學(xué)特性的影響研究生姓名馬亞南導(dǎo)師姓名王郡甫研究員學(xué)科（領(lǐng)域）免疫學(xué)所在學(xué)院濟(jì)南大學(xué)山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別醫(yī)學(xué)碩士答辯時(shí)間2015年5月EXPRESSIONOFMIR27AITSINFLUENCEONTHEBIOLOGICALACTERISTICSOFWM239CELLLINEBYMAYANANUNDERTHESUPERVISIONOFPROFWANGJUNFUATHESISSUBMITTEDTOTHEUNIVERSITYOFJINANINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFTHEMASTERDEGREEOFMEDICINEUNIVERSITYOFJINANJINANSHONGPRCHINAMAY52015

簡(jiǎn)介：本文從以下幾章進(jìn)行探討第一章國(guó)產(chǎn)多孔鉭對(duì)兔成骨細(xì)胞生物學(xué)行為及功能影響的研究目的通過(guò)對(duì)國(guó)產(chǎn)多孔鉭支架材料的物理特性、與成骨細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng)后成骨細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、成骨性細(xì)胞因子分泌功能影響的研究，探討國(guó)產(chǎn)多孔鉭支架材料的生物相容性及在修復(fù)骨缺損、骨再生中的作用。方法掃描電鏡觀察國(guó)產(chǎn)多孔鉭支架材料表面和內(nèi)部的形貌特征。取新生乳兔顱蓋骨成骨細(xì)胞進(jìn)行分離、培養(yǎng)及鑒定，以DMEM為浸提介質(zhì)根據(jù)國(guó)標(biāo)制備鉭浸提液，將多孔鉭支架材料高溫高壓滅菌。隨機(jī)取第3代成骨細(xì)胞分為三組，A組為單純成骨細(xì)胞培養(yǎng)組，B組為多孔鉭浸提液與成骨細(xì)胞培養(yǎng)組，C組為多孔鉭支架材料與成骨細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng)組。CCK8法檢測(cè)三組成骨細(xì)胞生長(zhǎng)增殖情況，檢測(cè)多孔鉭支架材料對(duì)細(xì)胞毒性及增殖的影響。倒置相差顯微鏡、掃描電鏡、透射電鏡觀察成骨細(xì)胞在多孔鉭支架材料上的形態(tài)結(jié)構(gòu)，生長(zhǎng)、粘附、增殖情況。流式細(xì)胞儀檢測(cè)多孔鉭支架材料上生長(zhǎng)的成骨細(xì)胞的細(xì)胞周期。采用ELISA試劑盒，檢測(cè)三組成骨細(xì)胞培養(yǎng)后3、5、7天骨鈣素與一型膠原的分泌。結(jié)果國(guó)產(chǎn)多孔鉭支架材料表面及斷面可見針尖大小，分布均勻的蜂窩狀孔隙。掃描電鏡下觀察可見支架材料表面與斷面上分布直徑2050ΜM的微粒，微粒間存在直徑400600ΜM的孔隙，孔隙間相互連通呈網(wǎng)狀，類似于骨松質(zhì)構(gòu)架。CCK8法檢測(cè)結(jié)果隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，三組成骨細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，無(wú)明顯差異，成骨細(xì)胞形態(tài)正常，貼壁增殖良好，發(fā)現(xiàn)各組各時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞增殖差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。倒置相差顯微鏡觀察成骨細(xì)胞與多孔鉭支架材料復(fù)合培養(yǎng)可見多孔鉭支架材料邊緣粘附大量成骨細(xì)胞掃描電鏡觀察可見成骨細(xì)胞在多孔鉭支架材料表面及內(nèi)部孔隙內(nèi)生長(zhǎng)、粘附、增殖，形態(tài)多樣，細(xì)胞相互連接，并分泌大量細(xì)胞外基質(zhì)，基質(zhì)連接呈片狀，逐步覆蓋材料透射電鏡觀察可見成骨細(xì)胞內(nèi)超微結(jié)構(gòu)大小形態(tài)正常，無(wú)明顯變化。細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果提示三組細(xì)胞均為正常二倍體細(xì)胞，三組細(xì)胞周期分布相似，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。隨機(jī)抽取各時(shí)間點(diǎn)各組細(xì)胞進(jìn)行分泌功能的檢測(cè)，結(jié)果顯示三組細(xì)胞均有骨鈣素與Ⅰ型膠原的分泌。結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞骨鈣素分泌逐漸增多。多孔鉭支架組骨鈣素分泌較其他兩組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義鉭浸提液組與正常培養(yǎng)液組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各組Ⅰ型膠原分泌結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)初期隨時(shí)間增加Ⅰ型膠原分泌量增多，5D出現(xiàn)高峰，之后開始下降，同一時(shí)間點(diǎn)三組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義各組組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)比較，結(jié)果顯示三組不同時(shí)間點(diǎn)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義多重比較顯示除多孔鉭支架組組內(nèi)3D和7D無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其余組間比較均有統(tǒng)計(jì)差異。結(jié)論國(guó)產(chǎn)多孔鉭支架材料具備良好的生物相容性成骨細(xì)胞與多孔鉭支架復(fù)合培養(yǎng)后骨鈣素分泌增多，提示多孔鉭支架材料可能促進(jìn)成骨細(xì)胞的礦化及成骨作用。第二章國(guó)產(chǎn)多孔鉭對(duì)成骨因子及成骨轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)影響的研究目的通過(guò)檢測(cè)成骨細(xì)胞與國(guó)產(chǎn)多孔鉭支架材料復(fù)合培養(yǎng)后的成骨因子骨鈣素、Ⅰ型膠原、骨橋蛋白、纖維粘連蛋白以及成骨轉(zhuǎn)錄因子RUNX2、OSX、P38MAPK的表達(dá)變化情況，探討國(guó)產(chǎn)多孔鉭支架材料對(duì)成骨細(xì)胞的成骨效應(yīng)影響的作用機(jī)制。方法隨機(jī)取第3代成骨細(xì)胞分為三組，A組為單純成骨細(xì)胞培養(yǎng)組（正常培養(yǎng)液組），B組為多孔鉭浸提液與成骨細(xì)胞培養(yǎng)組，C組為多孔鉭支架材料與成骨細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng)組。分別取培養(yǎng)5D的三組細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞爬片，采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色法測(cè)定成骨因子COL1、OC、FN、OPN及成骨轉(zhuǎn)錄因子RUNX2、OSX、P38MAPK的表達(dá)情況并對(duì)多孔鉭支架組細(xì)胞進(jìn)行免疫細(xì)胞熒光化學(xué)染色法檢測(cè)成骨因子OPN與成骨轉(zhuǎn)錄因子RUNX2、OSX，P38MAPK與RUNX2、OSX的共表達(dá)情況。分別提取培養(yǎng)5D的三組細(xì)胞的蛋白及RNA分別采用免疫細(xì)胞蛋白印跡法及實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)COL1、OC、FN、OPN及RUNX2、OSX、P38MAPK蛋白及MRNA表達(dá)情況。結(jié)果免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)培養(yǎng)5D的各組細(xì)胞成骨因子表達(dá)情況發(fā)現(xiàn)，在正常培養(yǎng)液組、鉭浸提液組及多孔鉭支架組均存在OC、COL1、FN、OPN、RUNX2、OSX、PP38（磷酸化的P38）的陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)，細(xì)胞胞漿內(nèi)可見棕黃色顆粒，多孔鉭支架組各因子的表達(dá)均較其他兩組有升高趨勢(shì)，尤其是OC、OPN、RUNX2、OSX的表達(dá)較其他兩組顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)多孔鉭支架組存在RUNX2、OSX分別與OPN共表達(dá)情況，通過(guò)熒光染劑標(biāo)記RUNX2、OSX在細(xì)胞胞漿內(nèi)呈綠色，OPN呈紅色，多孔鉭支架組的成骨細(xì)胞中存在RUNX2、OSX分別與OPN共表達(dá)的情況，胞漿呈黃綠色同時(shí)還可見PP38熒光染色為紅色，同時(shí)分別標(biāo)記RUNX2、OSX綠色后可與PP38熒光雙標(biāo)，發(fā)現(xiàn)還存在PP38分別與RUNX2、OSX的共表達(dá)，胞漿呈黃綠色的情況。免疫細(xì)胞蛋白印跡結(jié)果發(fā)現(xiàn)三組細(xì)胞各因子蛋白表達(dá)情況與免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果基本一致。結(jié)論國(guó)產(chǎn)多孔鉭支架材料可通過(guò)影響成骨轉(zhuǎn)錄因子RUNX2、OSX的表達(dá)，影響成骨因子COL1、OPN、OC、FN表達(dá)最終促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)與礦化，促進(jìn)成骨，是較理想的骨移植替代材料。第三章國(guó)產(chǎn)多孔鉭與成骨細(xì)胞相互作用機(jī)制的蛋白質(zhì)組學(xué)研究目的采用以同位素相對(duì)標(biāo)記與絕對(duì)定量技術(shù)ITRAQ的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)分析MG63細(xì)胞在正常培養(yǎng)液、鉭浸提液以及多孔鉭支架材料，三種不同的培養(yǎng)環(huán)境下蛋白表達(dá)的改變，查找并探討分析多孔鉭支架材料的三維立體結(jié)構(gòu)對(duì)成骨細(xì)胞影響的相關(guān)因子及其作用機(jī)制，同時(shí)對(duì)前期工作進(jìn)行印證。方法取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的第3代MG63細(xì)胞，隨機(jī)分為三組，A組為正常培養(yǎng)液組，B組為鉭浸提液組，C組為多孔鉭支架材料組。每組接種相同數(shù)量的MG63細(xì)胞。A組MG63細(xì)胞采用MEM培養(yǎng)液培養(yǎng)B組MG63細(xì)胞采用鉭浸提液培養(yǎng)C組取高溫高壓滅菌的多孔鉭支架材料，MEM培養(yǎng)液浸潤(rùn)后將MG63細(xì)胞懸液滴到多孔鉭支架材料表面，在37℃、5％CO2及飽和濕度的培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2H，將材料翻轉(zhuǎn)，滴加MG63細(xì)胞懸液25ΜL于材料的另一面，在37℃、5％CO2及飽和濕度的培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2H，將支架材料移入一新孔內(nèi)，加入MEM培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。三組培養(yǎng)板于37℃、5％CO2及飽和濕度的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每2D更換1次培養(yǎng)液，連續(xù)培養(yǎng)7天。CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增值情況。掃描電鏡觀察多孔鉭支架上細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。提取各組細(xì)胞蛋白，采用BRADFD法蛋白定量，提取部分蛋白進(jìn)行雙向熒光凝膠差異電泳，檢查蛋白提取及定量情況以及三樣本間差異狀況，初步分析蛋白樣本情況。結(jié)果MG63細(xì)胞在正常培養(yǎng)液、鉭浸提液以及多孔鉭支架材料三種環(huán)境下培養(yǎng)，細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，細(xì)胞形態(tài)單一化，呈多角形或長(zhǎng)梭形ALP染色結(jié)果陽(yáng)性。經(jīng)析因方差分析不同時(shí)間下正常培養(yǎng)液組、鉭浸提液組和多孔鉭支架組CCK8法檢測(cè)細(xì)胞活性O(shè)D值的結(jié)果。組間OD值差異無(wú)顯著性意義。不同時(shí)間間差異有顯著性意義。分組和時(shí)間之間存在交互作用。單獨(dú)效應(yīng)固定時(shí)間進(jìn)行組間比較，結(jié)果顯示除7D外其余時(shí)間三組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。掃描電鏡觀察，多孔鉭支架材料組細(xì)胞在材料表面以及材料孔隙間粘附生長(zhǎng)，初期細(xì)胞排列較稀疏隨時(shí)間增加相鄰細(xì)胞互相連接，逐步覆蓋大部分材料表面，并延伸入孔隙當(dāng)中后期細(xì)胞分泌大量基質(zhì)，逐步覆蓋材料表面。提取三組細(xì)胞蛋白進(jìn)行定量分析，凝膠電泳結(jié)果提示三組樣本條帶清晰、多根、分布均勻、無(wú)明顯高豐度，符合進(jìn)行試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)。雙向熒光差異電泳發(fā)現(xiàn)三樣本間存在明顯的差異點(diǎn)，達(dá)到ITRAQ試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)。ITRAQ實(shí)驗(yàn)結(jié)果根據(jù)原始數(shù)據(jù)的PVALUE，選取P≤005進(jìn)行過(guò)濾后，差異倍數(shù)≥15或差異倍數(shù)≤0666，所得結(jié)果進(jìn)入分析，鑒定到鉭浸提液組與正常培養(yǎng)液組比較差異蛋白有56個(gè)多孔鉭支架材料組與正常培養(yǎng)液組比較差異蛋白有150個(gè)。將差異蛋白數(shù)據(jù)MAP到DAVID的數(shù)據(jù)庫(kù)中，鉭浸提液組與正常培養(yǎng)液組比較差異，有6個(gè)不能識(shí)別，數(shù)據(jù)庫(kù)識(shí)別有記錄信息的有50個(gè)，其中上調(diào)蛋白35個(gè)，下調(diào)蛋白15個(gè)，開展GO功能注釋，通過(guò)對(duì)差異蛋白參與的生物學(xué)過(guò)程、具備的分子功能以及蛋白質(zhì)所屬細(xì)胞成分的分析，篩選出與本實(shí)驗(yàn)相關(guān)的差異蛋白上調(diào)蛋白6個(gè)，下調(diào)蛋白2個(gè)多孔鉭支架材料組與正常培養(yǎng)液組差異比較蛋白，有26個(gè)不能識(shí)別，數(shù)據(jù)庫(kù)識(shí)別有記錄信息的有124個(gè)，其中上調(diào)蛋白104個(gè)，下調(diào)蛋白20個(gè)，開展GO功能注釋，通過(guò)對(duì)差異蛋白參與的生物學(xué)過(guò)程、具備的分子功能以及蛋白質(zhì)所屬細(xì)胞成分的分析，篩選出與本實(shí)驗(yàn)相關(guān)的差異蛋白上調(diào)蛋白12個(gè)，下調(diào)蛋白1個(gè)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)驅(qū)動(dòng)蛋白1，肌動(dòng)蛋白，角蛋白10具有一致性差異表達(dá)多孔鉭支架材料組出現(xiàn)細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白，凝溶膠，過(guò)氧化氫酶，磷脂酶A2，整合素Β1，鈣結(jié)合蛋白A4，細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1的差異上調(diào)。結(jié)論經(jīng)過(guò)同位素相對(duì)標(biāo)記與絕對(duì)定量技術(shù)，篩選出多孔鉭支架組與鉭浸提液組以及正常培養(yǎng)液組的差異蛋白，驗(yàn)證前期工作的同時(shí)，揭示多孔鉭材料與細(xì)胞相互作用機(jī)制，前期工作提示細(xì)胞在多孔鉭的三維立體結(jié)構(gòu)上細(xì)胞增殖，粘附能力增強(qiáng)，細(xì)胞基質(zhì)分泌增多，通過(guò)蛋白組學(xué)技術(shù)分析多孔鉭支架材料組出現(xiàn)的大部分差異蛋白主要參與細(xì)胞粘附、運(yùn)動(dòng)、分泌過(guò)程，說(shuō)明多孔鉭的三維立體空間結(jié)構(gòu)、高孔隙率和內(nèi)部微孔結(jié)構(gòu)可增強(qiáng)細(xì)胞粘附、分泌的能力，進(jìn)一步為國(guó)產(chǎn)多孔鉭支架材料的研究提供理論基礎(chǔ)和新的研究方向。

簡(jiǎn)介：為比較大熊貓和成年女性陰道乳酸桿菌的生物學(xué)特性，本試驗(yàn)采取發(fā)情期雌性育齡大熊貓和成年女性陰道分泌物，通過(guò)分離培養(yǎng)、形態(tài)學(xué)、生理生化和分子生物學(xué)鑒定，得到6株乳酸桿菌并對(duì)6株乳酸桿菌的產(chǎn)過(guò)氧化氫能力、耐酸性、耐熱性、抗菌活性、藥物敏感性及黏附性進(jìn)行了研究。其結(jié)果如下1從大熊貓陰道分泌物中分離得到唾液乳酸桿菌GPV01、植物乳酸桿菌GPV02和LSAERIMNERIGPV03從人陰道分泌物中分離到嗜酸乳酸桿菌WAV01、卷曲乳酸桿菌WAV02和植物乳酸桿菌WAV03，大熊貓和人陰道中均存在植物乳酸桿菌（分別為GPV02和WAV03）。2在相同的培養(yǎng)條件下，唾液乳酸桿菌GPV01、植物乳酸桿菌GPV02和LSAERIMNERIGPV03的產(chǎn)H2O2能力和耐熱能力不及嗜酸乳酸桿菌WAV01、卷曲乳酸桿菌WAV02和植物乳酸桿菌WAV03。3強(qiáng)酸性環(huán)境對(duì)唾液乳酸桿菌GPV01、植物乳酸桿菌GPV02、LSAERIMNERIGPV03、嗜酸乳酸桿菌WAV01、卷曲乳酸桿菌WAV02和植物乳酸桿菌WAV03的生長(zhǎng)有抑制作用。該6株乳酸桿菌在PH為2～6的培養(yǎng)條件下，其生長(zhǎng)會(huì)隨著培養(yǎng)基PH的下降而受到抑制。同時(shí)，6株乳酸桿菌的培養(yǎng)上清液對(duì)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和溶血性鏈球菌均有不同程度的抑制作用。4唾液乳酸桿菌GPV01、植物乳酸桿菌GPV02、LSAERIMNERIGPV03、嗜酸乳酸桿菌WAV01、卷曲乳酸桿菌WAV02和植物乳酸桿菌WAV03均對(duì)強(qiáng)力霉素、氨芐西林、頭孢曲松、頭孢噻肟、阿莫西林敏感，對(duì)鏈霉素、左氧沙星、慶大霉素、復(fù)方新諾明、環(huán)丙沙星、磺胺甲基異惡唑表現(xiàn)出一致性的耐藥。而這6株乳酸桿菌對(duì)四環(huán)素和利福平表現(xiàn)出了不同程度的敏感性。5唾液乳酸桿菌GPV01、植物乳酸桿菌GPV02、LSAERIMNERIGPV03、嗜酸乳酸桿菌WAV01、卷曲乳酸桿菌WAV02和植物乳酸桿菌WAV03均能黏附到HELA細(xì)胞上。唾液乳酸桿菌GPV01、LSAERIMNERIGPV03、嗜酸乳酸桿菌WAV01和植物乳酸桿菌WAV03對(duì)HELA細(xì)胞的平均黏附數(shù)為188～328個(gè)細(xì)胞，而植物乳酸桿菌GPV02對(duì)HELA細(xì)胞的平均黏附數(shù)為68個(gè)細(xì)胞，卷曲乳酸桿菌WAV02對(duì)HELA細(xì)胞的平均黏附數(shù)為547個(gè)細(xì)胞。綜上可知，大熊貓陰道乳酸桿菌與人陰道乳酸桿菌的生物學(xué)特性存在較大的差異。不同種乳酸桿菌在相同的培養(yǎng)條件下，表現(xiàn)出的生物學(xué)特性不同即使是同種不同株的乳酸桿菌在相同的培養(yǎng)條件下，表現(xiàn)出的生物學(xué)特性也不同。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)密級(jí)R73714公開單位代碼10422學(xué)號(hào)201220513J◆東夕◆≮SHANDONGUNIVERSITY博士學(xué)位論文DISSERTATIONFORDOCTORALDEGREE論文題目MICRORNA214在膀胱癌中表達(dá)的生物學(xué)功能、調(diào)控機(jī)制及臨床應(yīng)用研究THEBIOLOGICALFUNCTION，REGULATORYMECHANISMANDCLINICALSIGNIFICANCEOFMICRORNA一214INBLADDERCANCER作者姓名王金鳳培養(yǎng)單位專業(yè)名稱指導(dǎo)教師合作導(dǎo)師2015年5月6日目錄中文摘要1英文摘要9符號(hào)說(shuō)明18前言19第一部分膀胱癌組織中MIR214分子表達(dá)及其與臨床病理參數(shù)和預(yù)后的關(guān)系材料與方法31結(jié)果37討論40結(jié)侖43附圖表一44第二部分MIR214在膀胱癌致病中生物學(xué)功能及調(diào)控機(jī)制研究材料與方法一52占果73討侖77結(jié)I侖81附圖表一82第三部分尿液游離MIR214的檢測(cè)及其對(duì)膀胱癌診斷和預(yù)后價(jià)值的評(píng)估材料與方法102結(jié)果107討侖111結(jié)侖113附圖表114參考文獻(xiàn)123致謝141攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄142學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表143英文論文144