簡介：目的本實驗通過觀察不同濃度17Β雌二醇對體外培養(yǎng)人牙周膜細(xì)胞（HUMANPERIODONTALLIGAMENTCELLS，HPDLCS）的增殖、堿性磷酸酶活性以及細(xì)胞周期的影響，探討17Β雌二醇影響人牙周膜細(xì)胞生物學(xué)特性的有效濃度，為將17Β雌二醇作為一種新型的誘導(dǎo)劑應(yīng)用于正畸治療提供生物學(xué)依據(jù)。方法選取因正畸治療需要拔除的健康前磨牙，在無菌條件下刮取牙周膜組織，采用組織塊結(jié)合酶消化法進行原代培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞生長至鋪滿瓶底約12時進行首次傳代，從而獲得大量可供實驗用的種子細(xì)胞。取第4代對數(shù)生長期人牙周膜細(xì)胞爬片，進行波形絲蛋白VIM和角蛋白CK免疫組織化學(xué)染色鑒定細(xì)胞來源，倒置顯微鏡下觀察。將處于對數(shù)生長期的第4代人牙周膜細(xì)胞用于實驗，細(xì)胞隨機分為6組5個實驗組和1個對照組。實驗組在相應(yīng)的有細(xì)胞孔內(nèi)分別加入含10％胎牛血清的低糖DMEM培養(yǎng)液配置的終末濃度分別為105、106、107、108、109MOLL的17Β雌二醇。對照組在相應(yīng)的有細(xì)胞孔內(nèi)加入含10％胎牛血清的低糖DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)。每天換液以維持藥物濃度恒定。1、MTS比色法檢測17Β雌二醇對人牙周膜細(xì)胞增殖的影響實驗組和對照組PDLCS分別于培養(yǎng)24H、48H、72H和7D時隨機取出一個96孔培養(yǎng)板，向所測孔內(nèi)加入30ΜLMTS，在37℃，5％CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育4H，酶標(biāo)儀上測定490NM下各孔的吸光度值。2、BCIPNBT法檢測17Β雌二醇對人牙周膜細(xì)胞堿性磷酸酶活性的影響實驗組和對照組PDLCS經(jīng)17Β雌二醇誘導(dǎo)7D后，吸棄原培養(yǎng)液，PBS洗滌23遍，4％多聚甲醛固定1H，PBS洗滌23遍，每孔加入1MLBCIPNBT工作液，室溫避光放置30MIN，吸棄工作液，PBS洗滌23遍，自然光下拍照。3、流式細(xì)胞術(shù)檢測17Β雌二醇對人牙周膜細(xì)胞細(xì)胞周期的影響實驗組和對照組PDLCS在培養(yǎng)96H后進行細(xì)胞周期實驗，按照細(xì)胞周期試劑盒說明書操作，進行流式細(xì)胞儀分析。結(jié)果1、體外分離培養(yǎng)的人牙周膜細(xì)胞抗波形絲蛋白多克隆抗體VIM在細(xì)胞中呈陽性表達，抗細(xì)胞角蛋白CK呈陰性表達，證實細(xì)胞的間葉源性，而非上皮源性，符合實驗要求。2、與對照組相比，在一定濃度范圍內(nèi)17Β雌二醇能促進人牙周膜細(xì)胞的增殖、提高堿性磷酸酶活性及推進細(xì)胞周期進程，其中以濃度為108MOLL的17Β雌二醇作用最為明顯。結(jié)論1、采用組織塊結(jié)合酶消化法可成功培養(yǎng)出人牙周膜細(xì)胞，培養(yǎng)所得細(xì)胞生長狀態(tài)良好，形態(tài)為長梭形，可復(fù)層生長，符合實驗要求。2、一定濃度范圍內(nèi)的17Β雌二醇對人牙周膜細(xì)胞增殖、分化有一定的誘導(dǎo)作用，提示了17Β雌二醇作為一種新型的誘導(dǎo)劑應(yīng)用于牙周組織改建、修復(fù)、再生等組織工程領(lǐng)域的可行性。

簡介：原創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含獲得廣西醫(yī)科大學(xué)或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名謝簽字魄渺年多月M學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即在校期間論文的知識產(chǎn)權(quán)屬廣西醫(yī)科大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保存論文的電子和紙質(zhì)文檔，可以借閱或上網(wǎng)公布本論文的部分或全部內(nèi)容，可以采用影印、復(fù)印或其他手段保存、匯編本論文，學(xué)?？梢韵驀矣嘘P(guān)機關(guān)或機構(gòu)送交論文的電子和紙質(zhì)文檔，允許論文被查閱和借閱。同意廣西醫(yī)科大學(xué)可以用不同的方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或者部分內(nèi)容。保密論文在解密后遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者簽名J≥孕刁簽字日期沙，多年二月F口日鋤張氫強簽字日期砂，Y年莎月，。日＼課題基金來源1國家自然科學(xué)基金項目號81160262課題名稱小肝癌合并膽管癌栓起源于肝干細(xì)胞的實驗研究負(fù)責(zé)人黎樂群2國家自然科學(xué)基金項目號81260331課題名稱COX一2調(diào)控MICRORNA21影響肝癌干細(xì)胞生物學(xué)特性及機制研究負(fù)責(zé)人向邦德

簡介：1分類號R77單位代碼10752密級公開學(xué)號201400472寧夏醫(yī)科大學(xué)寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文碩士專業(yè)學(xué)位論文寧夏地區(qū)回漢年齡相關(guān)性白內(nèi)障患者眼生物學(xué)參數(shù)對比研究NMATIVEDATAOFOCULARBIOMETRYINAGERELATEDCATARACTPATIENTSFROMNINGXIAHUIHANPEOPLE學(xué)位申請人遲昊指導(dǎo)教師莊文娟莊文娟教授教授申請學(xué)位門類級別醫(yī)學(xué)專業(yè)名稱眼科學(xué)研究方向白內(nèi)障所在學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院論文完成日期二〇一二〇一六年四月寧夏醫(yī)寧夏醫(yī)科大科大學(xué)研究生學(xué)研究生院3寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是個人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進行研究工作所取得的成果，無抄襲及編造行為。除文中已經(jīng)特別加以注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明并致謝。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。論文作者簽名＿＿＿＿＿論文導(dǎo)師簽名＿＿＿＿＿寧夏醫(yī)科大學(xué)寧夏醫(yī)科大學(xué)關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明寧夏醫(yī)科大學(xué)有權(quán)保留使用本人學(xué)位論文，同意學(xué)校按規(guī)定向國家有關(guān)部門機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許被查閱和借閱。本人授權(quán)寧夏醫(yī)科大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)印手段保存和匯編本學(xué)位論文?？梢怨迹ò牵┱撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容。（保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定）論文作者簽名＿＿＿＿＿論文導(dǎo)師簽名＿＿＿＿＿

簡介：學(xué)校代碼10459學(xué)號或申請?zhí)?01212443312密級公開碩士學(xué)位論文慢病毒介導(dǎo)CCDC67轉(zhuǎn)染甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞生物學(xué)活性的鑒定本課題受國家自然科學(xué)基金（81372863）資助作者姓名許建輝導(dǎo)師姓名殷德濤學(xué)科門類醫(yī)學(xué)專業(yè)名稱外科學(xué)（普通外科）培養(yǎng)院系第一附屬醫(yī)院完成時間2015年3月原創(chuàng)性聲明原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者日期年月日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者日期年月日

簡介：本文通過研究FOXO1對于心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的作用，從而揭示FOXO1的功能是誘導(dǎo)氧化應(yīng)激損傷還是保護損傷的心肌細(xì)胞，還是兩個兼有。同時進一步研究心肌細(xì)胞特異性缺失FOXO1促進氧化應(yīng)激導(dǎo)致的心肌細(xì)胞凋亡的機制和FOXO1過表達通過促進細(xì)胞自噬降低細(xì)胞凋亡的機制，本研究對于尋找抗心肌缺血再灌注損傷的藥物治療靶點，提高心肌梗死治療療效意義重大目的1通過過氧化氫培養(yǎng)心肌細(xì)胞模擬過氧化自由基對心肌細(xì)胞損傷，檢測過氧化氫對心肌細(xì)胞凋亡的影響，檢測FOXO1在蛋白、MRNA以及磷酸化水平的變化。以探討FOXO1對于心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的作用。2利用轉(zhuǎn)染技術(shù)使FOXO1沉默，用不同濃度FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞，檢測FOXO1MRNA的含量、細(xì)胞凋亡比例。在200UM過氧化氫培養(yǎng)后，用不同濃度FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞，檢測CASPASE3含量、PARP含量、CASPASE3活性、自噬囊泡的形成以及及LC3Ⅱ與LC3Ⅰ的比值，以探討FOXO1與過氧化氫培養(yǎng)下心肌細(xì)胞凋亡和自噬的相關(guān)機制。方法1細(xì)胞系處理方法培養(yǎng)人類心肌細(xì)胞系H9C2，不同濃度過氧化氫培養(yǎng)細(xì)胞來模擬細(xì)胞受到氧化自由基損傷的模型，將培養(yǎng)好的H9C2細(xì)胞放置于0UM、50UM、100UM、200UMH2O2混合氣體中培養(yǎng)24到48小時。2過氧化氫培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞后檢測細(xì)胞凋亡H9C2心肌細(xì)胞用0UM和200UM過氧化氫分別培養(yǎng)24小時和48小時后，用ANNEXINⅤFITC和碘化丙啶對H9C2心肌細(xì)胞進行染色，然后用流式細(xì)胞分析儀進行細(xì)胞凋亡檢測，細(xì)胞凋亡的結(jié)果用凋亡細(xì)胞比全部細(xì)胞進行表示。3過氧化氫培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞后檢測CASPASE3和PARP蛋白以及CASPASE3活性表達。0UM和200UM過氧化氫分別培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞24小時和48小時，通過蛋白免疫印跡電泳法檢測CASPASE3和PARP蛋白表達，通過熒光電泳法檢測H9C2心肌細(xì)胞的CASPASE3活性的表達，4過氧化氫培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞后檢測FOXO1蛋白水平和FOXO1磷酸化表達0UM、50UM、100UM、200UM過氧化氫培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞后，用蛋白免疫印跡試驗檢測FOXOⅠ蛋白水平和FOXO1磷酸化表達。5過氧化氫培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞后檢測FOXO1MRNA水平表達0UM、50UM、100UM、200UM過氧化氫培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞后，用實時反轉(zhuǎn)錄PCR檢測FOXO1MRNA水平表達。6用FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染H9C2心肌細(xì)胞，使FOXO1沉默通過轉(zhuǎn)染方法沉默F(xiàn)OXO1，用濃度為25NM、50NM的FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染H9C2心肌細(xì)胞，未用FOXO1SPECIFICSIRNA只有脂質(zhì)體處理的作為對照組。7FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染H9C2心肌細(xì)胞后，檢測FOXO1MRNA水平表達用25NM、50NMFOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染H9C2心肌細(xì)胞后，用實時反轉(zhuǎn)錄PCR檢測FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞和空白對照組FOXO1MRNA水平。8FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染H9C2心肌細(xì)胞后，檢測細(xì)胞凋亡用25NM、50NMMFOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染H9C2心肌細(xì)胞后，用ANNEXINⅤFITC和碘化丙啶對H9C2心肌細(xì)胞進行染色，然后用流式細(xì)胞分析儀檢測FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞組和空白對照組的細(xì)胞凋亡。9200UM過氧化氫培養(yǎng)FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞和空白對照細(xì)胞后，檢測CASPASE3活性以及CASPASE3和PARP蛋白表達。200UM過氧化氫分別培養(yǎng)25NM、50NMFOXO1SPECIFICSIRNA心肌細(xì)胞和空白對照細(xì)胞后，通過熒光電泳法檢測CASPASE3活性的表達，通過蛋白免疫印跡電泳法檢測CASPASE3和PARP蛋白表達。10過氧化氫培養(yǎng)FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞和空白對照細(xì)胞后，檢測細(xì)胞自噬統(tǒng)計學(xué)處理全部數(shù)據(jù)采用SPSS130軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，多組間不同組別間差異比較采用方差分析，有統(tǒng)計學(xué)意義后進行兩兩比較，采用LSD進行多重兩兩比較，兩組間比較采用雙尾T檢驗，顯著性水平設(shè)定為005，當(dāng)P值小于005，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1過氧化氫培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞后檢測細(xì)胞凋亡隨著過氧化氫培養(yǎng)濃度的增加、培養(yǎng)時間的延長，細(xì)胞凋亡增加。23過氧化氫培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞后檢測CASPASE3和PARP蛋白以及CASPASE3活性表達。隨著過氧化氫培養(yǎng)濃度的增加、培養(yǎng)時間的延長，CASPASE3和PARP蛋白以及CASPASE3活性表達增加。3過氧化氫培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞后檢測FOXO1蛋白水平、FOXO1MRNA水平和FOXO1磷酸化表達用0UM、50UM、100UM、200UM過氧化氫培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞，F(xiàn)OXO1蛋白水平、FOXO1MRNA水平組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。與以上規(guī)律相反，H9C2心肌細(xì)胞在用0UM、50UM、100UM、200UM濃度的過氧化氫培養(yǎng)下，隨著過氧化氫濃度的增高，F(xiàn)OXO1的磷酸化水平逐步升高，且差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，磷酸化程度與過氧化氫濃度呈計量依賴性。4FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞組和空白對照細(xì)胞組FOXO1MRNA的表達FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞組FOXO1MRNA的表達低于空白對照細(xì)胞組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義P＜001，隨著FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染濃度的增大，F(xiàn)OXO1MRNA的含量逐漸減小，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜001。5FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞和空白對照細(xì)胞凋亡檢測FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞組細(xì)胞凋亡高于空白對照組間，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005，隨著FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染濃度的增大，細(xì)胞凋亡升高，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。6200UM過氧化氫培養(yǎng)FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞和空白對照細(xì)胞后，檢測CASPASE3活性以及CASPASE3和PARP蛋白表達。200UM的過氧化氫培養(yǎng)下的FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞的CASPASE3活性以及CASPASE3和PARP蛋白表達均高于空白對照組P＜005。隨著FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染濃度增高而增高，CASPASE3活性以及CASPASE3和PARP蛋白表達增高，組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。7過氧化氫培養(yǎng)FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞和空白對照細(xì)胞后，檢測細(xì)胞自噬200UM過氧化氫可以明顯誘導(dǎo)對照組細(xì)胞自噬囊泡的形成（綠色熒光蛋白陰性點），200UM過氧化氫培養(yǎng)下，50NMFOXO1SPECIFICSIRNA細(xì)胞組自噬囊泡低于對照組（綠色熒光蛋白陰性點），200UM過氧化氫培養(yǎng)下，50NMFOXO1SPECIFICSIRNA細(xì)胞組的GFPLC3、LC3ⅡLC3Ⅰ低于對照組P＜005。即FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染H9C2心肌細(xì)胞組降低過氧化氫誘導(dǎo)自噬P＜001結(jié)論1過氧化氫損傷心肌細(xì)胞造模成功，并將心肌細(xì)胞FOXO1沉默（用FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染H9C2細(xì)胞）。2隨著過氧化氫濃度的升高和培養(yǎng)時間的延長，心肌細(xì)胞凋亡、CASPASE3、PARP蛋白水平及CASPASE3活性升高，呈劑量依賴性。提示過氧化氫誘導(dǎo)凋亡。3過氧化氫培養(yǎng)心肌細(xì)胞，F(xiàn)OXO1在蛋白和MRNA的水平未發(fā)生變化，隨著過氧化氫的濃度增高，F(xiàn)OXO1磷酸化水平升高，提示過氧化氫誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡可能是通過促FOXO1磷酸化，進而抑制FOXO1對心肌細(xì)胞的修復(fù)作用。4在200UM過氧化氫培養(yǎng)后，隨著FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染濃度增高，細(xì)胞凋亡比例、CASPASE3含量、PARP含量以及CASPASE3活性增高。提示FOXO1沉默促進過氧化氫誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡，進而說明FOXO1抑制過氧化氫誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡。5200UM過氧化氫誘導(dǎo)對照組細(xì)胞自噬囊泡的形成，過氧化氫培養(yǎng)FOXO1SPECIFICSIRNAH9C2轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞，自噬囊泡減少、LC3ⅡLC3Ⅰ降低。提示過氧化氫誘導(dǎo)心肌細(xì)胞自噬，F(xiàn)OXO1沉默降低過氧化氫誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞自噬，進而說明FOXO1增強過氧化氫誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞自噬。

簡介：論文題目厶漚性盛佳腸挫經(jīng)王細(xì)胞佳處量差的實驗研究塑生物堂掛選扭拯答辯委員會主席廑達星數(shù)援浙江太堂醫(yī)堂院阻屆‘』L童醫(yī)院答辯委員會成員陳肖鳴教授溫劃醫(yī)科太堂附屬箍二醫(yī)院王夏鉉熬援濕劃醫(yī)型太堂基礎(chǔ)匡堂院溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文英文縮略詞表英文縮寫英文名稱中文名稱ENSCSENTERICNEURALSTEMCELLSBRDU5BROMO2DEOXYURIDINEGFAPGLIALFIBRILLARYACIDICPROTEINVUJ一1NCSCSNEURONALCLASSIII13TUBULINNEURALCRESTSTEMCELLSENSENTERICNERVOUSSYSTEMCCK8CELLCOUNTINGKIT8RETREARRANGEDDURINGTRANSFECTIONGDNFGLIALCELLLINEDERIVEDNEUROTROPHICFACTORSOX10SRYBOXCONTAININGGENE10EDNRBENDOTHELINRECEPTORTYPEBET3ENDOTHELIN一3ACHEACETYLCHOLINESTERASENADPHDNOSNICOTINAMIDEADENINEDINUCLEOTIDEPHOSPHATEDIAPHORASENITRICOXIDESYNTHASEPBSPHOSPHATEBUFFEREDSOLUTIONIODINTEGRALOPTICALDENSITYDMEMDULBECCO’SMODIFIEDEAGLEMEDIUM腸神經(jīng)干細(xì)胞5一溴脫氧尿嘧啶核苷膠質(zhì)細(xì)胞原纖維酸性蛋白神經(jīng)元特異性13III微管蛋白神經(jīng)嵴干細(xì)胞腸神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞增殖檢測盒膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子酪氨酸激酶受體膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子STY盒家族基因10內(nèi)皮素受體B內(nèi)皮素3乙酰膽堿酯酶還原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黃遞酶一氧化氮合酶磷酸鹽緩沖液積分光密度達爾伯克氏改良伊格爾氏培養(yǎng)基

簡介：河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師或指導(dǎo)小組的指導(dǎo)下，由本人獨立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對本學(xué)位論文進行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學(xué)，試驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報的專利等知識產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)法律責(zé)任。一虢訓(xùn)P羲徘驊嚳莖I紫河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對此進行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名憫辛導(dǎo)師簽章繆1YI巳弘導(dǎo)師簽章礦屺廂，少心年廠月27日中文摘要SIRNA沉默XIAP基因?qū)侨饬鯩G63細(xì)胞生物學(xué)特性的影響摘要目的骨肉瘤是一種臨床常見的好發(fā)于青少年的成骨性惡性腫瘤，它惡性程度高，預(yù)后比較差。隨著化學(xué)療法、手術(shù)技術(shù)、骨重建等方法的進展，5年總生存率明顯提高。阿霉素ADRIAMYCIN，ADM、順鉑DIAMMINEDICHLOROPLANTINUM，DDP是抗骨肉瘤的最有效藥物，但腫瘤細(xì)胞對化療藥物產(chǎn)生耐藥性是影響化療療效的主要原因。許多化療藥物通過誘導(dǎo)凋亡抗腫瘤生長。XIAP是凋亡調(diào)節(jié)因子家族中對凋亡調(diào)節(jié)作用最強的分子之一，同時是唯的CASPASES抑制劑。研究顯示它在多種惡性腫瘤中上調(diào)表達，并與腫瘤化療耐藥及預(yù)后差緊密相關(guān)。RNAI是近年來發(fā)展起來的新技術(shù)，SIRNA已經(jīng)成為繼反義核酸、核酶之后基因治療的又一新武器。為此，我們合成特異性干擾XIAP基因的SIRNA，并在脂質(zhì)體介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染骨肉瘤MG63細(xì)胞，觀察其對骨肉瘤細(xì)胞生長抑制以及細(xì)胞侵襲性的影響，以及對骨肉瘤MG63細(xì)胞ADM藥物敏感性及耐藥性的影響，從而為新的骨肉瘤的治療方法提供實驗依據(jù)。方法1根據(jù)XIAP基因已知序列化學(xué)合成1條含2123個堿基的SIRNAXIAPSIRNA及陰性對照SIRNANEG；用化學(xué)合成的XIAPSIRNA轉(zhuǎn)染骨肉瘤MG63細(xì)胞，通過RTPCR方法和流式細(xì)胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染前后MG63細(xì)胞XIAPMRNA和蛋白水平的表達情況，進一步觀察轉(zhuǎn)染前后骨肉瘤MG63細(xì)胞增殖抑制的改變，流式細(xì)胞術(shù)和MTT法進一步檢測轉(zhuǎn)染前后MG63細(xì)胞的凋亡及ADM對轉(zhuǎn)染前后骨肉瘤MG63細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度IC50，觀察化學(xué)合成的特異性XIAPSIRNA對骨肉瘤細(xì)胞增殖抑制的影響以及對骨肉瘤MG63細(xì)胞ADM藥物敏感性的影響。2統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS130進行分析處理，采用T檢驗和單因素方差分析，如多組間兩兩比較采用Q檢驗，以P005認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果

簡介：嚴(yán)重感染嗜肺型軍團菌LEGIONELLAPNEUMOPHILA后，可能會發(fā)展成軍團菌病LEGIONNAIRESDISEASE。在嗜肺型軍團菌通過內(nèi)吞作用進入宿主細(xì)胞后，利用自身ICMDOTⅣ型分泌系統(tǒng)分泌RIDL效應(yīng)蛋白分子。RIDL定位于LCV囊泡膜上，通過與逆向運輸復(fù)合物RETROMERCOMPLEX中的VPS29亞基相互作用，改變逆向運輸復(fù)合物的功能，從而影響宿主的逆向膜泡運輸通路，進而利于細(xì)菌在LCV中繁殖。然而RIDL和VPS29詳細(xì)的相互作用方式以及RIDL的調(diào)節(jié)機理都不清楚。為了回答上述問題，本文利用大腸桿菌表達系統(tǒng)，表達RIDL183734一段截短序列。經(jīng)過多個純化步驟，包括親和純化、離子交換層析、分子篩層析等，得到純度較高、性質(zhì)穩(wěn)定、均一且適合進行晶體學(xué)研究的蛋白樣品，最終濃縮到20MGML。經(jīng)過初步篩選、后續(xù)優(yōu)化等多步探索和嘗試，本文得到了RIDL183734單個蛋白的晶體，經(jīng)過X衍射處理，NATIVE晶體可以得到分辨率達27A的數(shù)據(jù)。用代謝缺陷型菌株B834，我們表達并純化得到了RIDL183734硒代衍生物的蛋白，并優(yōu)化得到其晶體，其X衍射分辨率可達35A。NATIVE和硒代衍生物晶體經(jīng)初步晶體學(xué)分析可確定其空間群為C2。晶胞參數(shù)為A，B，CA25964，78394，7007Α，Β，Γ°9000，9149，9000。本文用分子、生化、結(jié)構(gòu)等方法，首次得到RIDL晶體學(xué)數(shù)據(jù)，探索了一系列對RIDL結(jié)晶的方法。本文的研究有助于進一步解析RIDL的晶體學(xué)研究和闡明其發(fā)揮功能的分子機制。

簡介：目的比較來源于同一人退變椎間盤內(nèi)髓核干細(xì)胞NPSCS、纖維環(huán)干細(xì)胞AFSCS及軟骨終板干細(xì)胞CESCS的生物學(xué)特性。方法收集7例經(jīng)X線、MRI（核磁共振）確診為椎間盤突出癥患者，將取出的椎間盤仔細(xì)分離并進行酶消化、濾網(wǎng)過濾后獲得NPSCS、AFSCS及CESCS。培養(yǎng)至第3代時，采用CCK8（細(xì)胞增殖與活性檢測試劑盒）檢測三種干細(xì)胞的生長活性，并進行成脂、成骨及成軟骨誘導(dǎo)分化。誘導(dǎo)21D后分別應(yīng)用油紅O染色檢測細(xì)胞成脂能力，茜素紅染色檢測細(xì)胞成骨能力，甲苯胺藍染色檢測細(xì)胞成軟骨能力。提取第3代細(xì)胞總RNA，分別行RTPCR（實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)）檢測成脂、成骨及成軟骨相關(guān)基因的表達情況。結(jié)果來自于同一患者的NPSCS、AFSCS與CESCS形態(tài)上相似，無明顯差異。生長曲線顯示CESCS（第1、3、5、7、9、11、13、15天OD值分別為035±001，052±002，064±008，080±019，079±02，106±011，137±009131±041）與AFSCS（第1、3、5、7、9、11、13、15天OD值分別為038±001，050±003，072±006，082±013，087±008，087±009，120±005143±005）增殖能力要比NPSCS（第1、3、5、7、9、11、13、15天OD值分別為032±002，042±004，059±001，064±017，065±019，068±021，067±012059±012）活躍。油紅O染色、茜素紅染色及甲苯胺藍染色分別證實三種干細(xì)胞均可向脂、骨及軟骨三系誘導(dǎo)分化。RTPCR檢測顯示AFSCS在成脂PPARΓ基因相對表達量685±032，LPL基因相對表達量1372±037、及成軟骨COII基因相對表達量1045±110，SOX9基因相對表達量1439±122基因表達方面比NPSCS（PPARΓ基因相對表達量663±050，LPL基因相對表達量841±042；COII基因相對表達量353±062，SOX9基因相對表達量766±068）與CESCS（PPARΓ基因相對表達量721±021，LPL基因相對表達量1062±037；COII基因相對表達量826±049，SOX9基因相對表達量1370±110）略強；而成骨能力方面，CESCS最強（RUNX2基因相對表達量730±11，COI基因相對表達量822±084），AFSCS（RUNX2基因相對表達量620±092COI基因相對表達量494±090）與NPSCS相當(dāng)（RUNX2基因相對表達量261±006，COI基因相對表達量705±082；）；NPSCS的成脂基因尤其脂蛋白脂肪酶LPL基因表達較低。結(jié)論NPSCS、AFSCS及CESCS在體外培養(yǎng)中細(xì)胞形態(tài)相似，但生物學(xué)特性方面存在著差異。體外誘導(dǎo)分化及RTPCR檢測均提示AFSCS比其他兩種干細(xì)胞在椎間盤組織工程領(lǐng)域中更加具有優(yōu)越性。

簡介：點擊查看更多沙門菌粘合素SafD的結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：學(xué)號201210076廣西醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文廣西河池地區(qū)四個民族中小學(xué)生角膜生物廣西河池地區(qū)四個民族中小學(xué)生角膜生物學(xué)相關(guān)指標(biāo)和屈光不正分析學(xué)相關(guān)指標(biāo)和屈光不正分析李沁導(dǎo)師姓名譚少健專業(yè)名稱眼科學(xué)申請學(xué)位類型專業(yè)學(xué)位答辯委員會主席曹學(xué)兵答辯委員會委員秦超鄭金甌吳原何劍峰李沁博士學(xué)位論文廣西廣西河池河池地區(qū)地區(qū)四個四個民族民族中小中小學(xué)生學(xué)生角膜角膜生物生物學(xué)相學(xué)相關(guān)指關(guān)指標(biāo)和標(biāo)和屈光屈光不正不正分析分析定。學(xué)位論文作者簽名導(dǎo)師簽字簽字日期年月日簽字日期年月日個人簡歷基本情況姓名李沁性別女民族漢族出生年月1976年7月11日籍貫廣西桂林政治面貌群眾學(xué)習(xí)工作經(jīng)歷（從本科學(xué)歷起，注意時間連續(xù)性）起止時間所在院?；騿挝粚W(xué)歷學(xué)位職稱1995年9月2000年7月華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)系本科學(xué)士學(xué)位學(xué)生2000年7月2003年9月廣西桂林市第一人民醫(yī)院住院醫(yī)師2003年9月2006年7月華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬同濟醫(yī)院碩士學(xué)位學(xué)生2006年7月2012年9月廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院眼科住院醫(yī)師、主治醫(yī)師

簡介：神經(jīng)因素在骨組織再生及重建過程中作用重要，而神經(jīng)肽正是神經(jīng)因素發(fā)揮調(diào)節(jié)作用的主要物質(zhì)。P物質(zhì)SUBSTANCP，SP是廣泛分布于骨髓和骨膜的感覺神經(jīng)元分泌的一種神經(jīng)肽，其生物化學(xué)結(jié)構(gòu)由11種氨基酸構(gòu)成，參與調(diào)控骨組織細(xì)胞如骨髓基質(zhì)干細(xì)胞、成骨細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)。不少體內(nèi)和體外細(xì)胞學(xué)實驗已經(jīng)表明，SP可以通過促進骨髓基質(zhì)干細(xì)胞BMSCS增殖能力增強、成骨基因表達及礦化來促進骨形成過程，調(diào)控骨折愈合生理過程。神經(jīng)肽SP的調(diào)控作用通常需要通過相關(guān)受體實現(xiàn)，SP受體主要是神經(jīng)激肽1受體NK1受體，此受體可介導(dǎo)SP促進骨形成的生物學(xué)效應(yīng)過程。已有研究證實骨髓基質(zhì)干細(xì)胞和成骨細(xì)胞MC3T3E1細(xì)胞能夠穩(wěn)定表達NK1受體的MRNA，且表達部位位于細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜內(nèi)，提示SP相關(guān)調(diào)控作用的可行性。NK1受體可介導(dǎo)某些抗凋亡反應(yīng)，如NK1受體拮抗劑可誘導(dǎo)人類癌細(xì)胞株HEP2凋亡。因此NK11受體表達及SP調(diào)控凋亡機制的相關(guān)性可能是神經(jīng)肽P物質(zhì)調(diào)控骨折愈合生理過程的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的調(diào)控離不開細(xì)胞信號通路。已有研究證實經(jīng)典WNTΒCATENIN通路和MAPK信號通路等多種細(xì)胞信號通路參與了P物質(zhì)調(diào)控BMSCS增殖和礦化，但WNT信號通路是否參與SP抗骨髓基質(zhì)干細(xì)胞去血清誘導(dǎo)凋亡尚未證實。經(jīng)典WNTΒCATENIN信號通路是骨代謝生理的關(guān)鍵通路因素。經(jīng)典WNT通路可以概括為Β連環(huán)蛋白ΒCATENIN在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)表達增加，積累到一定程度時可進入核內(nèi)引起下游WNT相關(guān)基因如CMYC等轉(zhuǎn)錄表達。研究表明，SP調(diào)控骨髓基質(zhì)干細(xì)胞增殖效應(yīng)、促進BMSCS和前成骨細(xì)胞MC3T3E1分化程度均與經(jīng)典WNT通路有關(guān)，而WNT信號通路與細(xì)胞凋亡通路也具有相關(guān)性。因此SP的抗凋亡作用是否由經(jīng)典WNT信號通路介導(dǎo)有必要進行研究。以上研究背景提示目前存在三個問題，即P物質(zhì)是否能夠調(diào)控骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的去血清誘導(dǎo)凋亡過程其調(diào)控效應(yīng)具有何種濃度及時間特點其調(diào)控機制涉及何種凋亡信號通路及WNT信號通路改變這些問題的解釋將進一步加深目前對神經(jīng)因素通過神經(jīng)肽調(diào)控骨折愈合過程的分子機制的研究，以及骨折修復(fù)過程中的神經(jīng)保護作用的理解。本研究主要是研究神經(jīng)肽P物質(zhì)對大鼠BMSCS去血清誘導(dǎo)凋亡的調(diào)控效應(yīng)、凋亡蛋白3等凋亡信號改變及相關(guān)經(jīng)典WNTΒCATENIN通路機制，同時探討NK1受體表達水平在細(xì)胞凋亡過程中的變化情況。本實驗主要的實驗材料、方法、內(nèi)容和結(jié)論主要包括以下幾個部分研究目的1神經(jīng)肽P物質(zhì)對大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞去血清凋亡的影響。2神經(jīng)肽P物質(zhì)作用下去血清誘導(dǎo)凋亡的大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的凋亡通路相關(guān)信號改變情況。3神經(jīng)肽P物質(zhì)調(diào)控骨髓基質(zhì)干細(xì)胞凋亡與經(jīng)典WNTΒCATENIN通路的關(guān)系。第1部分大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的獲取鑒定及NK1受體檢測實驗?zāi)康耐ㄟ^全骨髓培養(yǎng)法獲取純度較高的大鼠BMSCS，并通過流式鑒定其純度，同時研究其NK1受體表達。實驗方法1大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞獲取實驗動物選擇年齡一個月左右重量80100G大小的SD大鼠，按照實驗動物倫理學(xué)要求直接脫頸法處死，于清潔條件無菌器械輔助下，按層次切開大鼠解剖結(jié)構(gòu)后獲取大鼠的股骨及脛骨。使用針頭沖洗骨髓腔，加入DMEM培養(yǎng)基（含10％胎牛血清）行全骨髓法分離培養(yǎng)BMSCS。2大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)原代培養(yǎng)大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞4872H后，首次換液后及時清洗培養(yǎng)瓶，去除未貼壁細(xì)胞后傳代培養(yǎng)，按照1∶2或1∶3的接種比例經(jīng)胰酶消化后傳代至培養(yǎng)瓶中，采用含胎牛血清10％及青霉素鏈霉素溶液1％的DMEM培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)液體每23天進行換液，細(xì)胞生長鋪滿瓶底后傳三代，胰酶消化后按1∶2傳代，通過光鏡及倒置顯微鏡觀察大鼠BMSCS形態(tài)變化特點。實驗結(jié)果通過全骨髓培養(yǎng)法于體外成功分離培養(yǎng)出可用于實驗的較高純度大鼠BMSCS。流式細(xì)胞術(shù)鑒定結(jié)果顯示FL1HEIGHT02％±17％、CD90997％±31％、IGG1（096％±13％）、CD34（106％±13％）、CD44998％±41％、CD4517％±21％、IGG2A035％±29％、CD11BC06％±17％、HAMSTER009％±07％、CD299988％±31％，符合骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的免疫表型特征。同時，NK1受體表達于骨髓基質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，其蛋白表達量相對穩(wěn)定。實驗結(jié)論全骨髓培養(yǎng)法可獲得大量純度較高的大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，且其表面穩(wěn)定表達NK1受體，為下一步研究提供了種子細(xì)胞和理論基礎(chǔ)。第2部分P物質(zhì)對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞去血清誘導(dǎo)下細(xì)胞活性的影響實驗?zāi)康某醪接^察P物質(zhì)作用于去血清誘導(dǎo)下的BMSCS后的細(xì)胞活性變化。實驗方法1實驗分組處理取三代骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，分為四組，即對照組（加入等量PBS做安慰劑）、SP108MOLL組、SP1010MOLL組、SP1012MOLL組，接種于96孔板內(nèi)于去學(xué)期誘導(dǎo)凋亡后12小時和24小時分別采用MTT法檢測細(xì)胞活性。初步篩選出適宜濃度和適宜時間點后，使用DAPI熒光染色法和ANNEXINVFITCPI染色，熒光顯微鏡觀察和上機（流式細(xì)胞儀）檢測細(xì)胞凋亡率改變。2MTT法檢測細(xì)胞活性96孔板內(nèi)每孔加入15ΜL的MTT溶液（1∶10稀釋），于37℃環(huán)境下孵育4H后，每孔加入150Μ1的DMSO用于溶解產(chǎn)生的晶體，隨后利用酶標(biāo)儀測定吸光度495NM波長讀數(shù)。實驗結(jié)果MTT結(jié)果顯示24H去血清處理后，1010MOLLSP實驗處理能夠提高細(xì)胞活性，進一步的DAPI熒光染色顯示SP能夠保護細(xì)胞核形態(tài)皺縮形變等改變，且減少細(xì)胞凋亡率ANNEXINV熒光標(biāo)記法。實驗結(jié)論P物質(zhì)能夠提高骨髓基質(zhì)干細(xì)胞于去血清處理后的細(xì)胞活性，改善細(xì)胞核形態(tài)變化且減少細(xì)胞凋亡率。第3部分P物質(zhì)對骨髓間充質(zhì)于細(xì)胞去血清誘導(dǎo)凋亡影響及相關(guān)凋亡通路調(diào)控機制的初步探討實驗?zāi)康某醪教接慞物質(zhì)調(diào)控骨髓基質(zhì)干細(xì)胞凋亡過程中的細(xì)胞凋亡通路信號改變。實驗方法1實驗分組處理首先將第三代大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞隨機分為四組，即對照組、SP108MOLL組、SP1010MOLL組、SP1012MOLL組，測定凋亡蛋白3表達，探討P物質(zhì)抗凋亡效應(yīng)的濃度特異性。進一步設(shè)置對照組、SP1010MOLL組、SP1010MOLLNK1受體拮抗劑SPANTIDE108MOLL組，探討SP抗凋亡效應(yīng)機制。實驗結(jié)果P物質(zhì)作用于去血清的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞后，凋亡蛋白3熒光染色陽性細(xì)胞數(shù)量減少，相關(guān)RNA和蛋白表達減少，以1010MOLL最為明顯。凋亡基因改變顯示P物質(zhì)在12小時和24小時可減少凋亡信號BAXBCL2比例，調(diào)控CASPASE8、CASPASE9和CASPASE3凋亡基因改變。實驗結(jié)論P物質(zhì)可調(diào)控骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的內(nèi)源性凋亡通路信號，減少凋亡蛋白3表達，從而抑制細(xì)胞去血清凋亡過程。第4部分P物質(zhì)調(diào)控骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞去血清誘導(dǎo)凋亡的相關(guān)經(jīng)典WNTΒCATENIN通路機制的探討實驗?zāi)康某醪教接慞物質(zhì)調(diào)控骨髓基質(zhì)干細(xì)胞凋亡的經(jīng)典WNT通路信號相關(guān)機制。實驗方法1實驗分組處理首先設(shè)置對照組、SP1010MOLL組、SP1010MOLLWNT通路拮抗劑DKK（001GL）組、SP1010MOLLNK1受體拮抗劑SPANTIDE108MOLL組，測定WNT通路和凋亡通路基因蛋白改變，并再次設(shè)置對照組、SP108MOLL組、SP（1010MOLL）組、SP1012MOLL組確認(rèn)WNT通路蛋白相關(guān)改變情況。2WESTERNBLOT、QPCR檢測WNT通路和凋亡通路基因、蛋白表達提取實驗組總RNA后進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，熒光定量測定BCL2、BAX、CASPASE3、CASPASE8、CASPASE9、ΒCATENIN、GSK3Β、CMYC和CYCLIND1含量。相關(guān)結(jié)果于12小時和24小時分別測定三次。3免疫細(xì)胞熒光法檢測ΒCATENIN蛋白定位取三代細(xì)胞進行實驗處理后，固定液處理15分鐘后，使用04％TRITON溶液破膜10分鐘，脫脂牛奶封閉抗體30分鐘，之后以1∶300稀釋的ΒCATENIN一抗PBST溶液孵育過夜。PBS沖洗三次后，以FITC綠色熒光二抗室溫下避光孵育30分鐘，吸出液體后再次已DAPI染色15分鐘，熒光顯微鏡下觀察。實驗結(jié)果P物質(zhì)作用于骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，促進經(jīng)典WNT通路ΒCATENIN、PGSK3Β、CMYC和CYCLIND1基因和蛋白表達增高以及ΒCATENIN轉(zhuǎn)移入核，阻斷WNT通路后P物質(zhì)抗凋亡效應(yīng)減弱且WNT通路表現(xiàn)水平減低。實驗結(jié)論骨髓基質(zhì)干細(xì)胞可激活經(jīng)典WNT通路，從而調(diào)控去血清凋亡過程。

簡介：外周動脈疾病（PERIPHERYARTERYDISEASEPAD包括一系列由供應(yīng)腦部、內(nèi)臟器官和肢體的動脈結(jié)構(gòu)和功能改變而導(dǎo)致的非冠狀動脈系統(tǒng)綜合征，即指除冠狀動脈之外的主動脈及其分支動脈的狹窄、閉塞或瘤樣擴增疾病，以下肢動脈硬化閉塞最為常見。目前手術(shù)和藥物均無法逆轉(zhuǎn)動脈壁本身的病變。治療PAD的關(guān)鍵為血管內(nèi)皮細(xì)胞（VULAENDOTHELIALCELLSVECS），其激活、增殖、遷移、管腔結(jié)構(gòu)的形成以及塑形，以出芽的方式形成新的血管并重建形成新生血管網(wǎng)，可增加末梢循環(huán)血量或改善微循環(huán)血液灌注，同時可解決外科血管重建術(shù)后動脈長期通暢率的問題。然而，成熟的VECS的活性低，生長速度及自我更新速度慢。VECS降解細(xì)胞外基質(zhì)和遷移能力弱，導(dǎo)致側(cè)枝循環(huán)建立不良，綜上獲得一種耐凋亡、促增殖，同時具備強大的遷移能力和降解細(xì)胞外基質(zhì)的理想VECS是治療PAD的關(guān)鍵所在。存活素（SURVIVIN，SVV）由142個氨基酸組成，為IAP（INHIBITOFAPOPTOSISPROTEIN家族中分子量最小的成員在腫瘤細(xì)胞中其強大的調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和抗凋亡能力得到了大量研究證實。SVV是目前已知最強的凋亡抑制因子1，可通過抑制CASPASE3CASPASE9CASPASE10等凋亡通路中的多個環(huán)節(jié)來抑制細(xì)胞的凋亡，同時參與不同細(xì)胞周期的調(diào)控，并與多種周期調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合，直接調(diào)節(jié)細(xì)胞的有絲分裂，包括CYCLINDCYCLINE等，近年來已有很多研究證實SVV也表達于非腫瘤細(xì)胞，如胃粘膜2、巨噬細(xì)胞3以及腎小管上皮細(xì)胞等4，且SVV并非腫瘤的特異基因，表達后細(xì)胞不會產(chǎn)生腫瘤樣轉(zhuǎn)化。因此本研究培養(yǎng)大鼠動脈內(nèi)皮細(xì)胞，上調(diào)其SURVIVIN基因的表達，以獲得抗凋亡，促增殖的理想血管內(nèi)皮細(xì)胞，并從整體水平探討SURVIVIN基因促進VECS增殖及抗凋亡的機制以及對體內(nèi)血管生成的影響，為PAD的治療提供一定的理論及實驗基礎(chǔ)。第一部分SURVIVIN在大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的表達目的探討SURVIVIN在大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞中的表達方法采用真核細(xì)胞裂解將正常長至90％左右的大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞裂解，并按照說明提取相應(yīng)蛋白質(zhì)，通過WESTERNBLOT方法檢測正常大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞中SURVIVIN表達狀況。結(jié)果在正常培養(yǎng)的原代大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞中，SURVIVIN表達率高達100，WESTERNBLOT結(jié)果顯示，在幾組正常的RAEC中，條帶顯色較弱，灰度均值達1348。結(jié)論在正常大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞中SURVIVIN均有較低的表達。第二部分?jǐn)y帶針對大鼠SURVIVIN基因的腺病毒的轉(zhuǎn)染及對血管內(nèi)皮細(xì)胞生物特性的影響及其機制的研究目的研究SURVIVIN基因?qū)Υ笫笱軆?nèi)皮細(xì)胞增殖、凋亡、周期以及血管生成的影響。方法擴增、純化過表達大鼠SURVIVIN基因重組腺病毒，利用RTQPCR、WESTERNBLOT檢測對大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的感染及基因過表達效果。針對過表達SURVIVIN基因后的大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞，采用流式細(xì)胞儀、CCK8等，檢測SURVIVIN基因在體外對細(xì)胞凋亡、增殖、周期的影響。采用WESTERNBLOT檢測在凋亡和周期通路中與SURVIVIN相互作用的凋亡蛋白CASPASE3、BCL2和周期蛋白CYCLIND。將過表達SVV的RAEC采用肌肉注射的方法種植于裸鼠體內(nèi)，采用免疫組織化學(xué)技術(shù)對CD31表達陽性的大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞進行檢查。結(jié)果增殖型腺病毒在MOI為300時，轉(zhuǎn)染率為95，并具有很明顯的基因過表達作用。SURVIVIN過表達后，上調(diào)了BCL2表達、下調(diào)了CASPASE3從而失活或抑制了其介導(dǎo)的凋亡通路，凋亡率明顯降低；同時，SURVIVIN促進了CYCLIND的表達，說明SVV可能同時參與了大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞周期的調(diào)控，通過細(xì)胞周期蛋白CYCLIND等使細(xì)胞加速從G1期到S期的轉(zhuǎn)化。細(xì)胞移植2周以后，肌肉種植處免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示有明顯的新生血管產(chǎn)生，說明SURVIVIN抗凋亡、促增殖能力促進大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞在體內(nèi)血管生成過程，并一定程度抵抗同種異體抑移植產(chǎn)生的排斥反應(yīng)。結(jié)論構(gòu)建的增殖型腺病毒具有很高的轉(zhuǎn)染率和基因過表達效果，SURVIVIN對大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，抗凋亡，周期有明顯的影響。胞質(zhì)中的SURVIVIN參與細(xì)胞抗凋亡及細(xì)胞周期的調(diào)控。SURVIVIN基因過表達抗凋亡，促增殖有助于血管內(nèi)皮細(xì)胞體內(nèi)血管生成。

簡介：本研究主要目的是以國內(nèi)兒童肺炎鏈球菌血清型分布狀況為基礎(chǔ)，以分子生物學(xué)方法為手段，建立一種簡單、實用、適合發(fā)展中國家使用的肺炎鏈球菌血清型檢測“雞尾酒”策略，即將CPSB基因測序輔以優(yōu)化的序貫MPCR及血清型6A6D特異PCR相結(jié)合，并將該策略運用于肺炎鏈球菌臨床株血清型的測定，結(jié)合耐藥性檢測，對評價本地區(qū)疫苗的覆蓋率和有效性，指導(dǎo)合理臨床用藥提供更好的流行病學(xué)證據(jù)。第一部分CPSB基因測序檢測肺炎鏈球菌血清序列型目的利用已建立的CPSB基因測序方法對我們臨床收集的肺炎鏈球菌株進行血清序列型檢測，同時建立涵蓋目前已知肺炎鏈球菌95個血清型CPSB基因序列型數(shù)據(jù)庫，將該方法進一步完善，提高檢測的準(zhǔn)確性。方法下載GENBANK中收錄（截止2015年1月1日）肺炎鏈球菌所有CPSB基因全長的序列，應(yīng)用GENBANK中的CLUSTALW軟件和或BLASTN軟件對下載的序列進行列對、比對分析，建立肺炎鏈球菌95個血清型CPSB基因序列型數(shù)據(jù)庫。對2009年～2013年收集的我院5歲以下住院兒童中肺炎鏈球菌性疾病不同樣本來源不重復(fù)肺炎鏈球菌菌株193株，用特異性引物CPS1CPS2進行單步PCR擴增CPSB基因目的片段，繼之進行雙向測序。測序結(jié)果與GENBANK中的序列進行比對，參照我們建立的CPSB基因序列型數(shù)據(jù)庫中數(shù)據(jù)確定血清型序列型。結(jié)果我們建立的數(shù)據(jù)庫包括GENBANK中（截止2015年1月1日）所有的390個含CPSB基因全長的GENBANK收錄號，包含目前所知肺炎鏈球菌95個血清型CPSB基因732BP標(biāo)準(zhǔn)序列型的數(shù)據(jù)資料。所有193株臨床分離的肺炎鏈球菌菌株進行CPSB基因擴增均成功。基于CPSB基因在一個或多個位點的異質(zhì)性，一共識別出21個序列型。其中8個序列型3，9V，6B，10B，14，19A，23F，23A是血清型特異序列型，可以由序列型直接預(yù)測出菌株的血清型5個序列型6C6D，6B6E6X，15B15C，19F19A及28F28A是同一個血清群不同血清型共享序列型，可以由序列型直接預(yù)測出菌株相應(yīng)的血清群3個序列型1320，15A33B，17A34雖然也屬于多個血清型共享序列型，但無法明確菌株具體屬于哪個血清型。通過CPSB基因測序方法，193株菌中342％的菌可直接確定其血清型554％的菌可確定至相應(yīng)血清群水平。結(jié)論本研究建立的肺炎鏈球菌95個血清型CPSB基因序列型數(shù)據(jù)庫對分子生物學(xué)方法檢測血清序列型是一個補充和完善。應(yīng)用單步PCR進行CPSB基因測序確定肺炎鏈球菌血清序列型可以作為血清型檢測的初篩。第二部分優(yōu)化的序貫MPCR方法檢測肺炎鏈球菌血清型目的根據(jù)我國兒童肺炎鏈球菌血清型分布狀況，對美國CDC推薦的序貫MPCR方法進行優(yōu)化組合，建立一個適合我國兒童血清型檢測的序貫MPCR方法，可以在最初三個MPCR反應(yīng)中識別出最常見血清型。方法采用優(yōu)化的序貫MPCR方法對收集的193株菌進行肺炎鏈球菌血清型檢測。參照美國CDC網(wǎng)站公布的引物序列合成肺炎鏈球菌40對血清型特異性引物和1對莢膜特異性引物。根據(jù)我國兒童肺炎鏈球菌血清型分布狀況，對美國CDC推薦的序貫MPCR前三步反應(yīng)中引物進行優(yōu)化組合。優(yōu)化后的前三步MPCR反應(yīng)可識別十個血清群型，包括我國兒童最常見血清群型19F，19A，14，23F及6，PCV7中包含的三個血清型4，9V9A及18C，以及近些年在血清型替換中越來越受到關(guān)注的血清型15B15C和15A15F。第一步MPCR反應(yīng)包含血清群型9V9A、14、23F、15B15C的特異性引物第二步MPCR反應(yīng)包含血清群型4，6和19A的特異性引物第三步MPCR反應(yīng)包含血清型15A15F，18C和19F的特異性引物。每一步MPCR反應(yīng)中均加入莢膜特異性引物作為內(nèi)部陽性對照。如果一個標(biāo)本在前三步MPCR反應(yīng)中檢測均陰性，則需要按照美國CDC推薦的方法進行序貫8個MPCR反應(yīng)。結(jié)果從193株臨床肺炎鏈球菌菌株中一共識別出肺炎鏈球菌12個血清群型，包括3（2株），627株，9V9A（3株），14（14株），15F15A（2株），15B15C（13株），19F（67株），19A（23株），20（2株），23F（33株），23A（2株）和34（1株）。血清型4和18C在本研究中沒有該型菌株，故擴增陰性。通過優(yōu)化的序貫MPCR前三步反應(yīng)可識別大多數(shù)菌株的血清型，僅11株菌57％需要進行美國CDC推薦的序貫8步MPCR反應(yīng)鑒定，其中4株菌21％改用后者依然不能進行分型。序貫MPCR方法無法分型的4株菌中2株菌CPSB基因測序顯示序列型為10B，28F28A。另有2株菌應(yīng)用兩種方法均無法分型，需要進行莢膜腫脹試驗鑒定。CPSB基因測序與MPCR結(jié)果相比，兩者一致性可達922％。CPSB基因測序提示序列型是15A33B，1320A20B，17A34，序貫MPCR確定其血清型分別為15F15A，20以及34，并證實13株肺炎鏈球菌CPSB基因血清序列型為新的序列型。結(jié)論根據(jù)中國兒童血清型分布狀況，優(yōu)化的序貫MPCR反應(yīng)用于肺炎鏈球菌血清分型可以彌補基因測序的不足，提高檢測準(zhǔn)確性，并且在前三步MPCR反應(yīng)中識別出常見血清型。第三部分血清型6A6D特異PCR方法檢測血清6群肺炎鏈球菌目的應(yīng)用我們已建立的血清型6A6D特異PCR方法對CPSB基因測序及序貫MPCR識別出的肺炎鏈球菌血清6群菌株進一步細(xì)分其血清型。方法收集CPSB基因測序及序貫MPCR方法均鑒定為血清6群的27株肺炎鏈球菌菌株DNA。用特異性引物WCIP584ASWCIPR6B和WCIP584GSWCIPR6A，通過單步PCR擴增WCIP基因，初步將血清6群菌株區(qū)分為血清型6A6C與6B6D對血清型6A6C與6B6D菌株，用特異性引物WCINΒS1WCINΒA2再次采用單步PCR擴增WCINΒ基因，從6A6C與6B6D中分別區(qū)分血清型6C與6D菌株。結(jié)果27株CPSB測序和序貫MPCR方法均鑒定為血清6群的肺炎鏈球菌，我們采用血清型6A6D特異PCR細(xì)分血清型，發(fā)現(xiàn)12株血清型6A1227，444％，13株6B1327，481％，2株6C227，74％，沒有發(fā)現(xiàn)6D菌株。結(jié)論本研究再次證實血清型6A6D特異PCR方法能快速、簡單、有效的區(qū)分血清6群肺炎鏈球菌。第四部分CPSB基因測序輔以MPCR、血清型6A6D特異PCR檢測肺炎鏈球菌血清型的“雞尾酒”策略及臨床應(yīng)用目的應(yīng)用CPSB基因測序輔以優(yōu)化的序貫MPCR、血清型6A6D特異PCR的肺炎鏈球菌血清分型“雞尾酒”策略，對我院臨床收集193株肺炎鏈球菌進行血清分型，并對耐藥性進行檢測。旨在尋找一種適合于我國流行病學(xué)調(diào)查和研究的肺炎鏈球菌血清分型策略，并提供直接來自社區(qū)的肺炎鏈球菌血清型、耐藥性、疫苗覆蓋情況等資料。方法收集2009年～2013年我院5歲以下住院兒童中肺炎鏈球菌性疾病的肺炎鏈球菌193株。首先采用CPSB基因測序初篩，確定血清序列型對CPSB基因測序有歧義的結(jié)果或不能分型、新的CPSB序列型菌株應(yīng)用優(yōu)化的序貫MPCR方法明確血清型對上述方法確定為血清6群的菌株應(yīng)用血清型6A6D特異PCR方法細(xì)分血清型6A，6B，6C和6D。將本次研究中發(fā)現(xiàn)新的CPSB基因序列上傳GENBANK。采用KB法對193株菌進行抗菌素藥物敏感試驗，根據(jù)美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)委員會CLSI2013年版標(biāo)準(zhǔn)進行判讀。結(jié)果193株肺炎鏈球菌中共識別出16個血清型。初篩后，595％菌株序列型的結(jié)果需要進一步采用優(yōu)化的序貫MPCR方法給予明確。大多數(shù)菌株血清型在序貫MPCR的前3個反應(yīng)中可以識別，僅57％的菌株需要進行8個MPCR反應(yīng)。多重耐藥菌比例高達868％，最常見耐藥模式紅霉素克林霉素復(fù)方新諾明。按非腦膜炎標(biāo)準(zhǔn)未檢測出耐青霉素肺炎鏈球菌，按腦膜炎標(biāo)準(zhǔn)和口服標(biāo)準(zhǔn)對青霉素耐藥性顯著增加，分別為886％和392％。結(jié)論1對國內(nèi)尚無法采用傳統(tǒng)莢膜腫脹試驗進行SP血清分型的地區(qū)，本研究建立的CPSB基因測序輔以優(yōu)化的序貫MPCR、血清型6A6D特異PCR的“雞尾酒”策略是一個值得推廣的分子生物學(xué)檢測策略2血清型19A已經(jīng)成為南方沿海地區(qū)一個常見的血清型PCV13血清覆蓋率高，可為本地區(qū)兒童提供更好的免疫保護血清15群（尤其15B15C）的比例高于國內(nèi)其它地區(qū)報道值得引起關(guān)注3小于5歲兒童肺炎鏈球菌多重耐藥比例高，應(yīng)避免使用紅霉素、克林霉素和復(fù)方新諾明治療PDS，對非腦膜炎SP感染臨床醫(yī)生仍可選用青霉素，避免選擇壓力，保護三代頭孢菌素敏感性，腦膜炎SP感染則需參考藥敏結(jié)果選擇敏感抗生素。

簡介：上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文金銀納米團簇的生物學(xué)效應(yīng)及在胃癌診斷治療中的應(yīng)用博士生金銀納米團簇的生物學(xué)效應(yīng)及在胃癌診斷治療中的應(yīng)用博士生張春雷導(dǎo)師專業(yè)導(dǎo)師專業(yè)崔大祥教授生物醫(yī)學(xué)工程（生物納米醫(yī)藥）院系院系電子信息與電氣工程學(xué)院授予學(xué)位單位授予學(xué)位單位上海交通大學(xué)上海交通大學(xué)2015年5月上海交通大學(xué)2015年5月上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文I金銀納米團簇的生物學(xué)效應(yīng)及在胃癌診斷治療中的應(yīng)用摘要近些年，配體包覆的原子數(shù)目可控的金銀納米團簇，因其在傳感、催化、光電學(xué)以及生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的巨大應(yīng)用價值，吸引了眾多研究者的目光。與較大粒徑的金銀納米晶體不同，硫醇配體包覆的金銀納米團簇沒有局域表面等離子體共振現(xiàn)象，而表現(xiàn)出獨特的熒光性質(zhì)和分立結(jié)構(gòu)的線狀吸收光譜，這是因為其表面金原子的自由電子受到限制，電子處于分立的能級上。然而，到現(xiàn)在為止尚沒有關(guān)于手性金銀納米團簇影響細(xì)胞的生長和增殖等細(xì)胞毒性的報道。本文內(nèi)容主要分為兩大部分第一部分主要是關(guān)于以LGSH和DGSH為配體的手性金銀納米團簇的合成和表征，以及金銀納米團簇對MGC803和GES1細(xì)胞的毒性研究；第二部分是金納米團簇的功能化及其在雙模式成像以及熒光成像指導(dǎo)下的光動力學(xué)治療中的應(yīng)用。主要內(nèi)容詳述如下1手性金納米團簇AUNCSLGSH和AUNCSDGSH均能引起MGC803和GES1的細(xì)胞毒性，并表現(xiàn)出濃度依賴的性質(zhì)。細(xì)胞生理學(xué)的研究表明，兩種金納米團簇均能導(dǎo)致活性氧的產(chǎn)生、線粒體去極化、DNA損傷、細(xì)胞周期阻滯、凋亡介導(dǎo)的死亡等。MGC803和GES1兩種細(xì)胞的實驗均表明，AUNCSDGSH的細(xì)胞毒性明顯高于AUNCSLGSH，這種與手性相關(guān)的細(xì)胞毒性突出了手性因素在納米材料與生物體系的相互作用中的重要性。全基因組表達譜芯片技術(shù)揭示AUNCSLGSH和AUNCSDGSH均能引起與調(diào)控細(xì)胞周期阻滯、凋亡、應(yīng)對氧化應(yīng)激、外源物質(zhì)代謝等生物學(xué)過程相關(guān)的基因發(fā)生顯著差異表達，此外，AUNCSDGSH還影響與代謝和生物合成相關(guān)的通路。此外，我們還發(fā)現(xiàn)在相同的AUNCS處理條件下，MGC803比GES1更敏感、細(xì)胞毒性更大，這可能與MGC803細(xì)胞GSTP1基因啟動子區(qū)域高甲基化導(dǎo)致的GSTP1表達沉默有關(guān)。因此，我們在研究納米材料與生物體系的相互作用時，