簡介：隨著電力工業(yè)的快速發(fā)展與家用電器的日益普及，環(huán)境工頻磁場（在我國主要為50HZ磁場）的暴露水平不斷增加，其可能的健康危害日益引起公眾的關(guān)注?；谟邢薜牧餍胁W(xué)研究證據(jù)，世界衛(wèi)生組織下屬的國際癌癥研究中心將極低頻磁場0300HZ歸類為人類可疑致癌原。大量實驗研究結(jié)果提示工頻磁場暴露可能影響生物體或細(xì)胞產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)，但研究結(jié)果不一致，其關(guān)鍵是低強(qiáng)度工頻磁場與生物體作用的生物學(xué)機(jī)制不清楚。已有研究顯示，靜磁場、脈沖電場暴露影響液體或溶液中生物大分子的物理特性，且受暴露的液體或生物大分子能作用于細(xì)胞或生物體產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)。為此，我們假設(shè)工頻磁場暴露體外培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)可能是通過作用細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)而影響細(xì)胞功能實現(xiàn)的。為探索工頻磁場產(chǎn)生效應(yīng)的機(jī)制，本學(xué)位論文研究分析了50HZ磁場暴露對細(xì)胞培養(yǎng)液物理特性的影響及經(jīng)磁場暴露后的培養(yǎng)液對細(xì)胞功能的影響。首先，我們將ΑMEM細(xì)胞培養(yǎng)液（含10％FBS）暴露于40MT的50HZ磁場不同時間0～60MIN，利用檢測表面等離子體共振SURFACEPLASMONRESONANCE，SPR的相位信號變化來分析培養(yǎng)液折射率的變化情況，并觀察了不同強(qiáng)度0～40MT50HZ磁場暴露對細(xì)胞培養(yǎng)液SPR相位信號的影響。結(jié)果顯示，50HZ磁場暴露引起ΑMEM細(xì)胞培養(yǎng)液的SPR相位信號變化，且該效應(yīng)具有磁場暴露時間、暴露強(qiáng)度依賴性。同時，我們將細(xì)胞培養(yǎng)液暴露于40MT的50HZ磁場暴露30MIN后停止磁場暴露，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液的SPR相位信號能夠恢復(fù)并接近本底水平，提示該效應(yīng)具有可逆性。進(jìn)一步，本研究利用受40MT的50HZ磁場暴露或假暴露1H后的細(xì)胞培養(yǎng)液來處理人羊膜上皮FL細(xì)胞，將細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)至48H，采用CCK8法分別檢測FL細(xì)胞的活力將50HZ磁場暴露組的細(xì)胞培養(yǎng)液孵育FL細(xì)胞5～60MIN，采用WESTERNBLOT法檢測MAPK信號通路ERK，P38和自噬信號通路P62，LC3相關(guān)蛋白的表達(dá)水平采用ΓH2AX焦點形成實驗檢測細(xì)胞DNA雙鏈斷裂情況，采用堿性彗星實驗檢測DNA片段化情況利用流式細(xì)胞儀檢測胞內(nèi)活性氧自由基ROS的變化。結(jié)果顯示，受40MT的50HZ磁場暴露的細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)FL細(xì)胞，對細(xì)胞的活力、MAPK信號通路和自噬通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平、DNA損傷和胞內(nèi)ROS水平?jīng)]有顯著影響。另一方面，本研究采用相位SPR成像傳感技術(shù)分析50HZ磁場暴露對表皮生長因子EGF溶液SPR信號的影響。結(jié)果顯示，相對于假暴露組，50HZ磁場暴露組的EGF溶液SPR相位值較初始值減小。以表皮生長因子受體EGFR連接金膜為固定相，以EGF溶液為流動相，我們發(fā)現(xiàn)相位SPR成像傳感技術(shù)能檢測EGF和EGFR的相互作用，但經(jīng)50HZ磁場暴露的EGF未影響EGF和EGFR的相互作用。進(jìn)一步，我們分析了受50HZ磁場暴露的EGF作用細(xì)胞產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)，即將50HZ磁場暴露的EGF配制入含1％FBS的ΑMEM細(xì)胞培養(yǎng)液并培養(yǎng)FL細(xì)胞，然后檢測細(xì)胞活力和EGFR聚簇。結(jié)果顯示，EGF能增強(qiáng)細(xì)胞活力和促進(jìn)EGFR聚簇但與假暴露組相比，50HZ磁場暴露組的EGF未能影響FL細(xì)胞的活力和EGFR聚簇。基于以上研究結(jié)果，我們認(rèn)為，在本實驗條件下，50HZ磁場暴露引起含10％FBS的ΑMEM細(xì)胞培養(yǎng)液SPR相位信號的變化，但受50HZ磁場暴露的細(xì)胞培養(yǎng)液對FL細(xì)胞活力、MAPK信號通路和自噬通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平、DNA損傷和細(xì)胞內(nèi)ROS水平均沒有顯著影響。此外，50HZ磁場暴露影響生物大分子EGF的SPR相位信號，但受50HZ磁場暴露的EGF末影響體外EGF和EGFR的相互作用和FL細(xì)胞活力、EGFR聚簇。我們的研究數(shù)據(jù)提示，與靜磁場、脈沖電場不同，50HZ磁場暴露引起的細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)可能不是通過影響細(xì)胞培養(yǎng)液或培養(yǎng)液中生物大分子的物理特性實現(xiàn)的。

簡介：BTK抑制劑對急性髓系細(xì)胞自血病細(xì)胞生物學(xué)的影響及其機(jī)制的研究THEINFLUENCEOFBTKINHIBITORTOWARDSBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFAMLCELLLINESANDMECHANISMRESEARCH導(dǎo)論文課題起止時間2Q壘生魚月2Q魚生3旦中國醫(yī)科大學(xué)遼寧2016年3月目錄一、摘要中文論著摘要1英文論著摘要3二、英文縮略語6三、論文前言與背景7材料與方法9結(jié)果11討論17結(jié)論19四、本研究創(chuàng)新性的自我評價20五、參考文獻(xiàn)2L六、附錄綜述24致謝32個人簡介33

簡介：溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文答辯委員會主席答辯委員會成員論文答辯日期溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3．1SF9昆蟲細(xì)胞的培養(yǎng)???????????．243．2BACMIDFGF8B轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞????????．．243．3收獲病毒??????????????．243．4病毒滴度的測定????????????．253．5蛋白表達(dá)條件初步優(yōu)化??????????．253．6FGF8B蛋白的純化???????????．．26實驗結(jié)果???????????????．．264．1正常及感染病毒之后的SF9昆蟲細(xì)胞??????．264．2昆蟲細(xì)胞的活細(xì)胞率隨病毒侵染時間的變化????．274．3FGF8B表達(dá)條件優(yōu)化???????????274．4FGF8B蛋白的純化???????????．．28分析與討論???????????????29第三部分FGF8B的生物活性研究引言?????????????????30實驗儀器與材料?????????????．．30實驗方法一????一．．???．．????．．．??313．1FGF8B細(xì)胞促增殖活性測定?????????313．2帕金森病細(xì)胞模型的建立?????????．．313．3不同濃度FGF8B，BFGF蛋白對帕金森病細(xì)胞模型促增殖作用．313．4FGF8B重組蛋白帕金森病細(xì)胞模型的抗凋亡作用???32實驗結(jié)果???????????????．．324．1FGF8B，BFGF蛋白對NLH3T3細(xì)胞的促增殖作用???．323

簡介：中醫(yī)藥是中華民族的寶貴財富。中藥作為中醫(yī)藥文化的重要組成部分，在中醫(yī)藥事業(yè)的發(fā)展中起著重要的作用。道地藥材更是中醫(yī)藥文化的精髓與中華民族文化的瑰寶。道地藥材的研究更是關(guān)系到中醫(yī)藥現(xiàn)代化、國際化的進(jìn)程。課題組對中藥道地理論研究進(jìn)行整理與總結(jié)，創(chuàng)新性地提出并創(chuàng)建遺傳化學(xué)生態(tài)相關(guān)性分析的研究新體系，綜合運(yùn)用轉(zhuǎn)錄組學(xué)、DNA條形碼技術(shù)、化學(xué)成分分析、氣候生態(tài)因子分析、土壤微量元素分析等對中藥道地性的生物學(xué)機(jī)制進(jìn)行探索，并在西洋參、肉蓯蓉、黃芪等中藥材成功應(yīng)用與實踐，為中藥材道地性研究提供理論依據(jù)。本文對中國產(chǎn)兩大主產(chǎn)地西洋參轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行測序，篩選出23個人參皂苷生物合成途徑相關(guān)差異關(guān)鍵酶基因，并提取其表達(dá)量（RPKM值），結(jié)合人參皂苷化學(xué)含量測定及氣候因子數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果表明西洋參人參皂苷的含量與HMGRCOMP76232_C1的表達(dá)成負(fù)相關(guān)，與其它相關(guān)關(guān)鍵酶基因的表達(dá)成正相關(guān)與溫度、日照等氣候因子成負(fù)相關(guān)，與水分成正相關(guān)。蒙古黃芪化學(xué)成分的含量與其ITS2序列的遺傳距離呈負(fù)相關(guān)與溫度、水分等呈強(qiáng)烈負(fù)相關(guān)，與日照、風(fēng)速等氣候因子呈強(qiáng)烈正相關(guān)。兩主產(chǎn)地肉蓯蓉化學(xué)成分存在差異，2乙酰毛蕊花糖苷可作為區(qū)分兩大產(chǎn)地肉蓯蓉的指標(biāo)成分PSBATRNH序列存在顯著SNP位點，新疆產(chǎn)肉蓯蓉在191位點為G，內(nèi)蒙古產(chǎn)則為A堿基。本研究應(yīng)用DNA條形碼技術(shù)，對常見中藥材及其偽品進(jìn)行分子鑒別，包括中藥材威靈仙、紫萁貫眾、當(dāng)歸、鼓槌石斛，及百合屬、半夏屬、堇菜屬等中藥材與藥用植物。研究結(jié)果表明DNA條形碼技術(shù)可以準(zhǔn)確地鑒別中藥材及其偽品。本文理論研究及提出的研究新體系，為中藥道地性的理論研究提供科學(xué)依據(jù)。

簡介：光滑純鈦片表面抗菌短肽涂層的組裝、性能和生物學(xué)評價⑧論文作者簽名壓么指導(dǎo)教師簽名論文評閱人1匿名評閱人2評閱人3評閱人4評閱人5答辯委員會主席委員L委員2委員3委員4委員5答辯日期2015年2月27日浙江大學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得逝婆盤堂或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名ZI互。簽字日期≯L唯年阮月九日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解逝鎏盤堂有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交本論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)逝姿盤堂可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索和傳播，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書學(xué)位論文作者簽名Z鰒聊繇垂嘶簽字日期≯LY年F。乞月FT日簽字日期糾Y年／護(hù)他日

簡介：分類號密級UDC學(xué)號416523213154南昌大學(xué)專業(yè)學(xué)位研究生學(xué)位論文MIR140在骨肉瘤組織中的表達(dá)及其對在骨肉瘤組織中的表達(dá)及其對骨肉瘤細(xì)胞惡性生物學(xué)表型的影響骨肉瘤細(xì)胞惡性生物學(xué)表型的影響THEEXPRESSIONOFMICRNA140INOSTEOSARCOMATHEEFFECTOFMICRNA140ONOSTEOSARCOMACELLSBIOLOGICALBEHAVISINVITRO陳翔培養(yǎng)單位（院、系）南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院指導(dǎo)教師姓名、職稱曹凱副教授碩士生導(dǎo)師專業(yè)學(xué)位種類臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)領(lǐng)域名稱外科學(xué)（骨科）論文答辯日期2016年05月答辯委員會主席評閱人2016年05月摘要II摘要目的目的檢測骨肉瘤組織標(biāo)本及細(xì)胞株中MIRNA140的表達(dá)情況，探討MIRNA140對骨肉瘤細(xì)胞生物學(xué)行為包括細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞侵襲的影響及其調(diào)控作用的分子機(jī)制。方法方法臨床上收集南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院、南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院和江西省腫瘤醫(yī)院40例骨肉瘤組織標(biāo)本，采用實時熒光定量RTPCR的方法檢測所收集到的組織標(biāo)本和骨肉瘤細(xì)胞株（U2OS）中MIR140的表達(dá)。用脂質(zhì)體法將MIR140MIMIC（模擬物）和SIHDAC4轉(zhuǎn)染至U2細(xì)胞中；實驗設(shè)置為轉(zhuǎn)染組、NC組和BLANK組，RTPCR檢測MIR140和HDAC4核酸水平，WESTERNBLOT檢測HDAC4及HIF1的蛋白水平表達(dá)；CCK8法檢測增殖，流式細(xì)胞術(shù)檢測凋亡，TRANSWELL小室檢測侵襲。熒光素酶報告實驗驗證HDAC4是否為MIR140的靶基因。結(jié)果結(jié)果40對骨肉瘤組織標(biāo)本中有29例骨肉瘤組織中MIR140的表達(dá)明顯低于與之其對應(yīng)的瘤旁組織（P＜005）。轉(zhuǎn)染MIR140組的U2細(xì)胞中MIRNA140的表達(dá)水平明顯升高，HDAC4的表達(dá)下降（P＜005）。轉(zhuǎn)染MIR140組的U2細(xì)胞增殖能力明顯下降，凋亡率增加，侵襲能力下降（P＜005）；螢光素酶驗證實驗結(jié)果顯示HDAC4是MIR140的一個靶基因。轉(zhuǎn)染SIHDAC4片段后U2細(xì)胞中HDAC4的表達(dá)明顯降低（P＜005）。SIHDAC4后U2細(xì)胞增殖能力下降（P＜005），凋亡率增加P005，侵襲力減弱（P＜005）。SIHDAC4能夠明顯降低HDAC4以及下游基因HIF1的表達(dá)。結(jié)論結(jié)論骨肉瘤組織中MIR140的表達(dá)降低；HDAC4是MIR140的一個靶基因，MIR140可抑制U2細(xì)胞的惡性表型。MIR140能靶向抑制HDAC4的表達(dá)。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞骨肉瘤；微小RNA140；組蛋白去乙?；?；生物學(xué)特性

簡介：BER通路功能性SNP與鼻咽癌易感性的關(guān)聯(lián)分析及其生物學(xué)功能研究博士學(xué)位畢業(yè)論文1179BER通路功能性SNP與鼻咽癌易感性的關(guān)聯(lián)分析及其生物學(xué)功能研究博士學(xué)位畢業(yè)論文3179個人簡歷基本情況姓名韋正波性別男民族壯出生年月197310籍貫廣西柳江縣政治面貌群眾學(xué)習(xí)工作經(jīng)歷起止時間所在院?；騿挝粚W(xué)歷學(xué)位職稱199109199606廣西醫(yī)科大學(xué)大學(xué)本科學(xué)生199607200008廣西南寧市第一人民醫(yī)院大學(xué)本科醫(yī)師200009200306廣西醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)生200307200606廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院碩士研究生醫(yī)師200607201006廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院碩士研究生主治醫(yī)師201007201512廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院碩士研究生副主任醫(yī)師201207至今廣西醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)生201601至今廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院碩士研究生主任醫(yī)師研究生期間科研經(jīng)歷臨床工作經(jīng)歷項目起止時間項目名稱項目來源本人承擔(dān)任務(wù)20140101堿基切除修復(fù)通路國家自然負(fù)責(zé)人20171231與鼻咽癌的關(guān)聯(lián)性分科學(xué)基金析及風(fēng)險點功能探索

簡介：分類號分類號密級密級研究生學(xué)位論文論文題目（中文）論文題目（中文）非小細(xì)胞肺癌對非小細(xì)胞肺癌對12C6重離子重離子的輻射敏感性輻射敏感性及其及其分子分子細(xì)胞生物學(xué)機(jī)制細(xì)胞生物學(xué)機(jī)制論文題目（外文）論文題目（外文）RADIOSENSITIVITYOFNONSMALLCELLLUNGCANCERTO12C6HEAVYIONITSMOLECULARCELLBIOLOGICALMECHANISM研究生姓研究生姓名楊立娜楊立娜學(xué)科、專業(yè)學(xué)科、專業(yè)生物學(xué)細(xì)胞生物學(xué)生物學(xué)細(xì)胞生物學(xué)研究方向研究方向醫(yī)學(xué)與腫瘤細(xì)胞生物學(xué)醫(yī)學(xué)與腫瘤細(xì)胞生物學(xué)學(xué)位級別學(xué)位級別博士導(dǎo)師姓名、職稱導(dǎo)師姓名、職稱王新宇王新宇教授教授王小虎王小虎教授教授論文工論文工作起止年月20122012年9月至月至20162016年4月論文提交日論文提交日期20162016年5月論文答辯日期論文答辯日期20162016年5月學(xué)位授予日學(xué)位授予日期20162016年6月校址甘肅省蘭校址甘肅省蘭州市州市蘭州大學(xué)博士研究生學(xué)位論文NSCLC對12C6的輻射敏感性及其分子細(xì)胞生物學(xué)機(jī)制I非小細(xì)胞肺癌對非小細(xì)胞肺癌對12C6重離子的重離子的輻射輻射敏感性及其分子敏感性及其分子細(xì)胞細(xì)胞生物學(xué)機(jī)制生物學(xué)機(jī)制中文摘要中文摘要肺癌以高發(fā)病率、高致死率和低治愈率的特點位居惡性腫瘤榜首。肺癌分為非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）和小細(xì)胞肺癌SCLC兩類，其中NSCLC占肺癌患者總數(shù)的85，并且五年生存率僅為171。大量研究發(fā)現(xiàn)NSCLC輻射敏感性較低，且具有較高的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率，因此傳統(tǒng)放射治療X射線和Γ射線的療效較差。輻射敏感性低意味著細(xì)胞的抗輻射損傷能力強(qiáng)，放射治療的效果差，提高輻射敏感性有望提高放射治療的效果。近些年來發(fā)現(xiàn)，重離子作為一種新的輻射源在腫瘤治療方面有較好的應(yīng)用前景。然而，關(guān)于NSCLC對重離子的輻射敏感性及其分子機(jī)制，目前還不清楚。為此，本研究以腺癌A549、大細(xì)胞癌PGCL3和鱗癌H520三個不同的NSCLC細(xì)胞株為對象，分析了它們對重離子的輻射敏感性及其分子機(jī)制，同時以XRAY照射為參照，比較了它們對12C6重離子與XRAY的輻射敏感性及其差異。主要結(jié)果如下1以上三種NSCLC細(xì)胞株經(jīng)12C6和XRAY照射后，克隆形成隆形成實驗實驗和RTCES檢測檢測結(jié)果結(jié)果顯示顯示，與未經(jīng)照射的細(xì)胞相比，無論是經(jīng)12C6還是XRAY照射，A三個細(xì)胞株的存活分?jǐn)?shù)（SF）和增殖能力均顯著下降，并且下降的幅度與照射劑量成正相關(guān)；B）H520的SF和增殖能力都始終最低，A549的最高，PGCL3的居中（H520PGCL3A549）。此外，相同劑量下，12C6照射后G2M阻滯率和凋亡率顯著高于XRAY照射后G2M阻滯率和凋亡率。以上結(jié)果說明，不同類型的NSCLC對12C6和XRAY的輻射敏感性不同，同種NSCLC對12C6的輻射敏感性顯著大于對XRAY的輻射敏感性。

簡介：分類號分類號密級密級研究生學(xué)位論文論文題目（中文）論文題目（中文）X射線射線輻射對乳腺癌細(xì)胞對乳腺癌細(xì)胞MDAMB231生物生物學(xué)特性的影響及蛋白組學(xué)研究學(xué)特性的影響及蛋白組學(xué)研究論文題目（外文）論文題目（外文）STUDYOFBIOLOGICALEFFECTSPROTEOMICSONBREASTCANCERCELLSMDAMB231INDUCEDBYXRAYIRRADIATION研究生姓名研究生姓名楊新瑞楊新瑞學(xué)科、專業(yè)學(xué)科、專業(yè)生物生物學(xué)細(xì)胞生物學(xué)細(xì)胞生物學(xué)研究方向研究方向醫(yī)學(xué)與腫瘤細(xì)胞生物學(xué)醫(yī)學(xué)與腫瘤細(xì)胞生物學(xué)學(xué)位級別學(xué)位級別碩士導(dǎo)師姓名、職稱導(dǎo)師姓名、職稱王小虎王小虎教授教授論文工作論文工作起止年月起止年月2013年9月至月至2016年6月論文提交日期論文提交日期2016年5月論文答辯日期論文答辯日期2016年6月學(xué)位授予日期學(xué)位授予日期2016年6月校址甘肅省蘭州校址甘肅省蘭州蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文X射線輻射對乳腺癌細(xì)胞MDAMB231生物學(xué)特性的影響及蛋白組學(xué)研究IIX射線射線輻射對乳腺癌細(xì)胞對乳腺癌細(xì)胞MDAMB231生物學(xué)特性的生物學(xué)特性的影響影響及蛋白組學(xué)及蛋白組學(xué)研究研究中文摘要中文摘要乳腺癌是危害女性健康常見惡性腫瘤之一。放射治療是乳腺癌治療的重要手段之一，然而由于個體或腫瘤細(xì)胞對射線的輻射敏感性存在差異，導(dǎo)致放療療效的差異。在放療中，利用各種輔助手段降低腫瘤細(xì)胞的輻射抗性，增加其輻射敏感性，是提高腫瘤放療療效的重要途徑。因此，研究X射線對乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及相關(guān)蛋白的表達(dá)變化，對于提高腫瘤細(xì)胞的放射敏感性并了解其相關(guān)分子調(diào)控機(jī)制具有重要的理論意義。1X射線射線輻射對乳腺癌細(xì)胞對乳腺癌細(xì)胞MDAMB231生物學(xué)特性的影響生物學(xué)特性的影響目的比較不同劑量的X射線輻射對乳腺癌MDAMB231細(xì)胞的增殖、周期和凋亡的影響，分析其生物學(xué)特性與細(xì)胞輻射敏感性關(guān)系。方法選擇指數(shù)生長期的乳腺癌MDAMB231細(xì)胞，不同劑量0、1、2、4、8、10GY的X射線輻射后24H，48H和72H采用MTT法檢測MDAMB231的增殖能力，比較不同劑量的X射線輻射對MDAMB231細(xì)胞的生長抑制作用；輻照后24H和48H，采用PI單染法和ANNEXINVPI雙染法分別檢測細(xì)胞周期分布與凋亡，通過流式細(xì)胞儀計算并分析不同劑量的X射線輻射對MDAMB231細(xì)胞周期與凋亡的影響。結(jié)果MTT實驗結(jié)果顯示，X射線輻射后，在24H、48H和72H時間點上，各劑量點的MDAMB231細(xì)胞增殖能力減弱，其抑制率隨劑量和時間的變化而變化。在48H和72H時間點，細(xì)胞的抑制率隨劑量的增加而增加；但72H各劑量點的抑制率顯著低于48H各劑量點的抑制率，24H時間點上各劑量點和對照組相比均表現(xiàn)出一定的抑制作用；在各劑量點，細(xì)胞的抑制率都隨著時間的延長呈先上升后下降的趨勢。凋亡結(jié)果顯示，不同劑量的X射線輻射MDAMB231細(xì)胞后，在24H和48H時間點，細(xì)胞總凋亡率隨著劑量的升高而增加，且同一劑量點在照射后24H的總凋亡率大于48H的總凋亡率。24H和48H各劑量點的早期凋亡率無明顯差異，24H不存在劑量依賴性，但48H存在劑量依賴性，即隨劑量的增加細(xì)胞凋亡逐漸增多；24H和48H各劑量點的晚期凋亡率存在明顯差異，24H和48H均存在劑量依賴性，且同一劑量24H的晚期凋亡率高于48H的晚期凋亡率。細(xì)胞周期結(jié)果顯示，X射線輻射后24H和48H，乳腺癌MDAMB231細(xì)胞的周期影響主要表現(xiàn)為G2M期周期阻滯，24H和48H均表現(xiàn)

簡介：分類號分類號R6573密級公開密級公開研究生學(xué)位論文研究生學(xué)位論文論文題目論文題目中文中文SFRP5沉默對人膽管癌細(xì)胞生物學(xué)特性的沉默對人膽管癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響影響論文題目論文題目外文外文EFFECTSOFSILENCINGSFRP5TOTHECELLULARPROPERTYINHUMANCHOLANGIOCARCINOMARBECELLS研究生姓名研究生姓名李力宏李力宏學(xué)科、專業(yè)學(xué)科、專業(yè)醫(yī)學(xué)醫(yī)學(xué)外科學(xué)外科學(xué)研究方向研究方向消化道腫瘤消化道腫瘤學(xué)位級別學(xué)位級別碩士碩士導(dǎo)師姓名、職稱導(dǎo)師姓名、職稱周文策周文策教授教授論文工作論文工作起止年月起止年月2014年3月至月至2016年3月論文提交日期論文提交日期2016年3月論文答辯日期論文答辯日期2016年5月學(xué)位授予日期學(xué)位授予日期2016年6月校址甘肅省蘭州市校址甘肅省蘭州市SFRP5沉默對人膽管癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響沉默對人膽管癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響中文摘要中文摘要研究目的研究目的探討使用慢病毒介導(dǎo)短發(fā)夾RNA（SHTHAIRPINRNASHRNA）沉默SFRP5（SECRETEDFRIZZLEDRELATEDPROTEINS5SFRP5）基因?qū)θ祟惸懝馨㏑BE細(xì)胞株增殖、遷移以及細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響。研究方法研究方法對人膽管癌RBE細(xì)胞株進(jìn)行體外培養(yǎng)，制備設(shè)計SFRP5干擾片段，使用慢病毒載體PLVXSHRNA2構(gòu)建慢病毒載體質(zhì)粒，并進(jìn)行基因測序鑒定，將構(gòu)建好的慢病毒SHRNA載體以及輔助質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞獲得重組慢病毒利用梯度測定法測定慢病毒滴度，使用FUGENEHD轉(zhuǎn)染試劑將慢病毒轉(zhuǎn)染入RBE細(xì)胞株，獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的RBE細(xì)胞株，利用WESTERNBLOT印跡法檢測SFRP5SIRNA干擾組以及對照組的SFRP5蛋白表達(dá)水平變化，通過細(xì)胞免疫熒光染色檢測SFRP5在RBE細(xì)胞中的表達(dá)情況，利用REALTIMEPCR檢測SFRP5SIRNA干擾組以及對照組MRNA表達(dá)水平的變化，通過TRANSWELL細(xì)胞遷移實驗以及細(xì)胞劃痕實驗研究SFRP5沉默對膽管癌細(xì)胞的遷移能力的變化，使用CCK8法檢測SFRP5低表達(dá)對膽管癌細(xì)胞增殖水平的影響，利用流式細(xì)胞術(shù)檢測SFRP5低表達(dá)對膽管癌細(xì)胞周期以及細(xì)胞凋亡的影響。實驗結(jié)果實驗結(jié)果細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示RBE細(xì)胞株呈SFRP5陽性，故使用RBE細(xì)胞實行后續(xù)實驗，將慢病毒RNA干擾慢病毒載體及其輔助包裝原件載體質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染進(jìn)293T細(xì)胞后，在熒光倒置顯微鏡下可見轉(zhuǎn)染成功的293T細(xì)胞表達(dá)綠色熒光，慢病毒濃縮后測得滴度為1109TUML，測序結(jié)果呈陽性；重組慢病毒成功轉(zhuǎn)染RBE細(xì)胞，48H后通過熒光倒置顯微鏡可見綠色熒光，轉(zhuǎn)染效率約達(dá)90；WESTERNBLOT結(jié)果顯示，與對照組對比，SFRP5SIRNA干擾組組蛋白表達(dá)明顯抑制，同時RTPCR結(jié)果顯示，SFRP5SIRNA干擾組細(xì)胞株SFRP5基因MRNA表達(dá)水平明顯降低（P00087），證實重組SFRP5慢病毒載體能夠有效抑制RBE細(xì)胞MRNA和蛋白表達(dá)水平；CCK8法檢測結(jié)果顯示，與對照組對比，SFRP5SIRNA干擾組增殖活性明顯增加（P005）；同時TRANSWELL法檢測結(jié)果顯示，SFRP5SHRNARBE組的穿膜細(xì)胞數(shù)約為（3101563）個，較NCSHRNARBE組的穿膜細(xì)胞數(shù)（7586）個明顯增加（P005）；同時細(xì)胞劃痕實驗結(jié)果顯示劃痕后的12H及24H時，SFRP5SIRNA干擾組細(xì)胞遷移率顯著大于對照組（P005）；流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示，SFRP5SIRNA干擾組細(xì)胞

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簡介：南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文分類號R7396密級題單位代碼學(xué)號1031220131605南京醫(yī)科大掌碩士學(xué)位論文南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄中文摘要1英文摘要4前言8研究一人源全分子抗CMET抗體的制備及免疫學(xué)特性分析前言11材料與方法11結(jié)果25討論30研究二人源全分子抗CMET抗體對鼻咽癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響前言33材料與方法33結(jié)果37討論40小結(jié)44參考文獻(xiàn)45文獻(xiàn)綜述52參考文獻(xiàn)58附錄縮略語62攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文64致謝65

簡介：類鼻疽伯克霍爾德菌BURKHOLDERIAPSEUDOMALLEI，簡稱類鼻疽菌）是一種革蘭陰性桿菌，主要存在于水或土壤中，可經(jīng)由呼吸道吸入、消化道攝入、皮膚侵入等方式進(jìn)行傳播，主要侵犯人體肺部，可引起以肺炎、肺部空洞及肺部膿腫為特點的類鼻疽病，還可導(dǎo)致皮膚、腎臟、肝臟等多器官膿腫，嚴(yán)重者還可能發(fā)展為急性敗血癥而導(dǎo)致死亡。類鼻疽作為一種新發(fā)現(xiàn)傳染病，診斷困難、致病性強(qiáng)、臨床用藥治療困難，并且潛伏期較長，流行地區(qū)死亡率高達(dá)40％其流行區(qū)域主要分布在南、北緯二十度內(nèi)，涵蓋新加坡、澳大利亞、越南、柬埔寨、馬來西亞、老撾、泰國東北部等地區(qū)以及我國香港、臺灣、廣東、海南等地區(qū)，越來越多的證據(jù)表明它是一種正在全球擴(kuò)散的人獸共患傳染病，目前尚無批準(zhǔn)使用的有效類鼻疽疫苗，因此亟待加強(qiáng)類鼻疽的相關(guān)研究。毒力因子在細(xì)菌致病過程中發(fā)揮重要作用，類鼻疽菌的毒力因子主要有Ⅲ型分泌系統(tǒng)、Ⅵ型分泌系統(tǒng)、莢膜多糖、鞭毛、菌毛、群體感應(yīng)分子、脂多糖等。2011年被發(fā)現(xiàn)的類鼻疽伯克霍爾德菌致死因子1BURKHOLDERIALETHALFACT1，BLF1，由BPSL1549基因編碼，結(jié)構(gòu)類似于大腸桿菌的細(xì)胞毒力因子CNF1C，主要通過抑制EIF4A解旋酶的活性干擾蛋白質(zhì)的翻譯起始階段，引起肌動蛋白細(xì)胞骨架的改變，并最終導(dǎo)致宿主細(xì)胞死亡。類鼻疽的死亡率較高，而BLF1作為類鼻疽菌第一個被發(fā)現(xiàn)的致死因子，其重要性不言而喻，獲取該毒素對研究其致病機(jī)制以及指導(dǎo)類鼻疽的診斷和防治具有重要意義。近年來，隨著蛋白合成抑制劑在抗腫瘤治療方面的效果逐漸被認(rèn)可，人們對蛋白質(zhì)翻譯起始因子EIF4A的抑制劑在靶向抗腫瘤治療中應(yīng)用的關(guān)注度也越來越高。BLF1作為潛在的EIF4A解旋酶活性抑制劑，能夠抑制蛋白質(zhì)的合成。那么可以設(shè)想，如果將該毒素遞送至腫瘤細(xì)胞后，毒素是否具有廣譜殺傷腫瘤細(xì)胞的作用呢目前國內(nèi)外尚無相關(guān)的研究報道。本研究的主要目的是通過基因工程技術(shù)重組表達(dá)BLF1RBLF1蛋白，并初步研究BLF1對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，為該蛋白在抗腫瘤治療中的應(yīng)用提供依據(jù)。方法1以BPC006菌株的全基因組DNA為模板，PCR擴(kuò)增BPSL1549基因，目的基因與PGEX6P2載體質(zhì)粒同時進(jìn)行BAMHIXHOI雙酶切，酶切產(chǎn)物經(jīng)回收、連接后轉(zhuǎn)化大腸桿菌XL1BLUE感受態(tài)細(xì)胞，氨芐抗性LB平板篩選陽性克隆，雙酶切及DNA測序驗證。2IPTG誘導(dǎo)陽性重組子表達(dá)GSTBLF1融合蛋白，親和層析純化融合蛋白并經(jīng)PSP酶酶切后獲得RBLF1蛋白。以純化RBLF1蛋白免疫新西蘭兔，制備抗BLF1血清，并通過WESTERNBLOT及ELISA法鑒定。3A549細(xì)胞模型中，通過CCK8實驗研究目的蛋白的細(xì)胞毒性效應(yīng)及抗體阻斷作用。不同濃度RBLF1蛋白腹腔注射BALBC小鼠，觀察小鼠生存率。結(jié)果1從類鼻疽菌基因組DNA中PCR得到了編碼BLF1的目的基因，并通過PGEX6P2載體成功構(gòu)建了高效表達(dá)BLF1的工程菌株。2經(jīng)過二步親和層析得到了分子量為23KD的高純度RBLF1，將純化蛋白免疫新西蘭兔制備抗血清，ELISA效價達(dá)1∶1280000，WESTERNBLOT鑒定在目的蛋白位置處出現(xiàn)特異印跡條帶。3RBLF1蛋白能明顯殺傷A549細(xì)胞，抗體可有效阻斷其殺傷作用。4RBLF1蛋白腹腔注射BALBC小鼠，小鼠死亡率隨蛋白劑量的增加而升高，同時正常小鼠對低劑量BLF1表現(xiàn)出一定的耐受性。結(jié)論重組表達(dá)了具有生物活性的RBLF1，該蛋白具有明顯殺傷A549腫瘤細(xì)胞的作用，同時能夠?qū)е滦∈笏劳?，但表現(xiàn)出一定耐受性。以上結(jié)果為進(jìn)一步研究類鼻疽菌的致病機(jī)制、尋找有效防治手段以及開發(fā)該毒素在抗腫瘤中的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

簡介：人白細(xì)胞介素37INTERLEUKIN37，IL37屬于IL1家族，處于人類2號染色體的IL1家族基因簇上。IL37是已知為數(shù)不多的具有炎癥抑制功能的細(xì)胞因子之一，其表達(dá)水平的變化與多種炎癥及免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后相關(guān)。有關(guān)于系統(tǒng)性紅斑狼瘡SYSTEMICLUPUSERYTHEMATOSUS，SLE患者IL37表達(dá)水平研究顯示，與正常對照比較，SLE患者血清IL37水平明顯增高。另有研究發(fā)現(xiàn)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的血漿IL37表達(dá)水平顯著高于正常對照。除此之外，BHI等人發(fā)現(xiàn)IL37在人冠脈和頸動脈粥樣硬化斑塊的泡沫細(xì)胞中高表達(dá)，揭示在動脈粥樣硬化性疾病的進(jìn)展中IL37可能充當(dāng)一定角色。此外，最近的一系列研究發(fā)現(xiàn)IL37蛋白或MRNA的表達(dá)水平增高與炎癥性腸病、格林巴利綜合征、慢性乙肝、病態(tài)肥胖、甲狀腺功能亢進(jìn)和強(qiáng)制性脊柱炎的發(fā)生發(fā)展密切有關(guān)。值得注意的是，近期一項針對人免疫缺陷病毒HUMANIMMUNODEFICIENCYVIRUS1，HIV1感染人群的隊列研究表示，與正常人外周血單核細(xì)胞PERIPHERALBLOODMONONUCLEARCELLS，PBMCS中IL37MRNA水平相比，HIV感染者PBMCS中穩(wěn)態(tài)IL37MRNA表達(dá)水平明顯升高。此外，HIV1感染者血漿中單核細(xì)胞炎性標(biāo)記物SCD14表達(dá)水平與其PBMC中IL37MRNA表達(dá)水平呈正相關(guān)。此項研究還觀察到HIV儲存庫PBMCS中總HIV1DNA與PBMC中IL37MRNA表達(dá)水平具有顯著相關(guān)性。目的1比較HIV感染者與正常人群血漿IL37、IP10等細(xì)胞因子表達(dá)水平差異，分析HIV感染者血漿IL37表達(dá)水平與外周血CD4T細(xì)胞數(shù)量及外周血HIVRNA的相關(guān)性2構(gòu)建人IL37原核表達(dá)載體，對其進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)并建立IL37原核重組蛋白純化技術(shù)，并在分子和細(xì)胞水平鑒定IL37重組蛋白的部分生物學(xué)性質(zhì)，包括IL37重組蛋白是否能夠抑制THP1A549細(xì)胞對炎癥刺激因子的應(yīng)答IL37重組蛋白是否保留與其受體IL18RΑ特異性結(jié)合的能力，為利用動物疾病模型研究IL37的炎癥抑制功能奠定一定的基礎(chǔ)。方法1酶聯(lián)免疫吸附法ENZYMELINKEDIMMUNOSBENTASSAY，ELISA測定HIV感染者及健康對照人群血漿中IL37、IL10、IP10將特異性識別各細(xì)胞因子的捕獲抗體包被到酶標(biāo)板上，4℃孵育過夜洗板3次后加入封閉液，室溫孵育1H血漿以原液∶PBS1∶2稀釋，標(biāo)準(zhǔn)品按說明書稀釋到不同濃度，各加入酶標(biāo)板不同孔洞中，以稀釋液作為空白對照，然后室溫孵育2H總計洗板5次后加入檢測工作液（檢測抗體和HRP標(biāo)記的二抗），隨后室溫孵育1H總計洗板7次后加入顯色底物，置于室溫孵育30MIN，然后加入終止液結(jié)束反應(yīng)，用酶標(biāo)儀在450NM波長處檢測后分析結(jié)果。2IL37變體重組蛋白原核表達(dá)載體的構(gòu)建、誘導(dǎo)表達(dá)以及純化操作通過PCR從PCDHHIL37T2ACOPGFP載體上擴(kuò)增出人IL37的基因，使用PET19B質(zhì)粒，構(gòu)建IL37的原核表達(dá)載體，并在ECOLIBL21DE3中經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)N端帶有6個組蛋白HIS6標(biāo)簽的融合蛋白，利用鎳離子親和層析柱純化得到IL37的重組蛋白，并使用SDSPAGE和WESTERNBLOT（使用ANTIHIS和ANTIIL37單克隆抗體）對重組蛋白進(jìn)行鑒定，并對IL37進(jìn)行部分生物學(xué)功能分析。結(jié)果1本研究比較了HIV感染者和正常人群血漿IP10、IL10和IL37表達(dá)水平，結(jié)果顯示HIV感染者血漿中IP10和IL37表達(dá)水平顯著高于正常人群，而IL10在HIV感染者和正常人群中無明顯差異對HIV感染者IP10、IL10和IL37水平與CD4T細(xì)胞計數(shù)作相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，血漿中IP10、IL10和IL37水平與CD4計數(shù)均不具有明顯相關(guān)性。2本實驗構(gòu)建了ECOLI重組表達(dá)載體PET19BHIS6HIL37在ECOLI中實現(xiàn)了IL37的高效誘導(dǎo)表達(dá)，初步建立了IL37蛋白純化工藝，利用該工藝路線我們從細(xì)菌誘導(dǎo)物中獲得高純度的IL37蛋白。進(jìn)行IL37相關(guān)功能分析表明，在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入一定量的IL37重組蛋白后，使用LPS和IL1Β分別刺激人巨噬細(xì)胞系THP1細(xì)胞和人肺上皮細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞，炎癥因子IL6的表達(dá)水平受到一定程度抑制，且我們純化得到的IL37重組蛋白保留了與其受體IL18RΑ特異性結(jié)合的能力。結(jié)論我們的研究揭示，與正常對照組比較，HIV感染者血漿中IP10、IL37水平顯著高于正常人群，提示IL37介入到了人體對HIV的感染的免疫應(yīng)答中。此外，所獲大腸桿菌來源的IL37重組蛋白具有一定生物學(xué)活性。以上研究結(jié)果為進(jìn)一步研究IL37的免疫調(diào)控機(jī)制營造了良好的條件。