簡(jiǎn)介：目錄中文摘要（1）英文摘要（3）論文題目（5）材料與方法（7）結(jié)果（16）討論（23）結(jié)論（25）參考文獻(xiàn)（25）文獻(xiàn)綜述（29）參考文獻(xiàn)（35）縮略語(yǔ)表（39）攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況（41）個(gè)人簡(jiǎn)歷（42）致謝（43）

簡(jiǎn)介：研究目的通過(guò)檢測(cè)慢病毒介導(dǎo)的Γ谷氨?；然福╒ITAMINKDEPENDENTGAMMAGLUTAMYLCARBOXYLASE，GGCX）基因轉(zhuǎn)染兔骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞后對(duì)其凋亡的影響，以及對(duì)兔膝骨性關(guān)節(jié)炎的軟骨細(xì)胞中MMP13、Ⅱ型膠原和Ⅹ型膠原的影響，探討其對(duì)兔膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞的作用。進(jìn)而為體外骨性關(guān)節(jié)炎的基因治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究方法1、選取12只重量約20±02KG左右的日本雄性大耳兔，運(yùn)用膝前交叉韌帶切斷的方法構(gòu)建動(dòng)物模型。對(duì)白兔進(jìn)行6周飼養(yǎng)后處死，對(duì)兔膝關(guān)節(jié)的軟骨細(xì)胞進(jìn)行分離以及培養(yǎng)，最后運(yùn)用ALCIANBLUE染色法以及Ⅱ型膠原纖維染色法對(duì)軟骨細(xì)胞做鑒定。2、隨機(jī)將軟骨細(xì)胞分為三個(gè)組空白對(duì)照組（不作任何處理）、陰性對(duì)照組（轉(zhuǎn)染不含GGCX慢病毒的空載體）、轉(zhuǎn)染組（轉(zhuǎn)染含GGCX慢病毒）。檢測(cè)轉(zhuǎn)染成功后分別用QRTPCR法及WESTERNBLOT法檢測(cè)各組中軟骨細(xì)胞中GGCX、MMP13、Ⅱ型膠原、Ⅹ型膠原MRNA及蛋白表達(dá)水平。3、運(yùn)用ANNEXINVFITCPI法來(lái)檢測(cè)各個(gè)分組中軟骨細(xì)胞的凋亡的情況。4、運(yùn)用茜素紅染色軟骨細(xì)胞進(jìn)行組織學(xué)檢查。研究結(jié)果1、兔骨關(guān)節(jié)炎的軟骨細(xì)胞在初代中顯現(xiàn)為扁平，多角不規(guī)則，有幾個(gè)隆突，胞核為橢圓形，位于胞體中間。ALCIANBLUE染色軟骨細(xì)胞表現(xiàn)天藍(lán)色，Ⅱ型膠原纖維染色發(fā)現(xiàn)軟骨細(xì)胞和胞外基質(zhì)表現(xiàn)棕色或黃色。2、QRTPCR檢測(cè)結(jié)果示GGCX在轉(zhuǎn)染組中表達(dá)水平明顯升高，MMP13在轉(zhuǎn)染組中的表達(dá)水平明顯降低，Ⅱ型膠原在轉(zhuǎn)染組中表達(dá)明顯升高，X型膠原在轉(zhuǎn)染組中表達(dá)水平亦明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜005），陰性對(duì)照組以及空白對(duì)照組之間相比較未見(jiàn)顯著差異（P＞005）；WB檢測(cè)結(jié)果顯示GGCX在轉(zhuǎn)染組中表達(dá)水平明顯升高，MMP13在轉(zhuǎn)染組中的表達(dá)水平明顯降低，Ⅱ型膠原在轉(zhuǎn)染組中表達(dá)水平明顯升高，X型膠原在轉(zhuǎn)染組中表達(dá)水平亦明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜005），陰性對(duì)照組以及空白對(duì)照組之間相比較未見(jiàn)明顯的差異（P＞005）。3、運(yùn)用ANNEXINVFITCPI法檢測(cè)各個(gè)分組凋亡率的結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染組總凋亡率為17833±2612％，與空白對(duì)照組總凋亡率（25467±2623）以及陰性對(duì)照組總凋亡率（26167±2637）相比明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜005），陰性對(duì)照組以及空白對(duì)照組相比較未見(jiàn)明顯差異存在（P＞005）。4、茜素紅染色結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染組中軟骨基質(zhì)深染，細(xì)胞數(shù)量多，可見(jiàn)少量鈣結(jié)節(jié)，空白組和陰性對(duì)照組中軟骨基質(zhì)染色均一，大量鈣結(jié)節(jié)形成。結(jié)論1、采取前叉韌帶切斷大白兔的韌帶能夠成功造出白兔骨關(guān)節(jié)炎的模型，并能夠成功分離培養(yǎng)出兔膝骨性關(guān)節(jié)炎的軟骨細(xì)胞；2、慢病毒能成功介導(dǎo)GGCX基因轉(zhuǎn)染兔骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞使其表達(dá)顯著增加；3、轉(zhuǎn)染含GGCX慢病毒能夠使軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原的表達(dá)顯著增加；4、轉(zhuǎn)染含GGCX慢病毒能夠使軟骨細(xì)胞MMP13、X型膠原的表達(dá)顯著降低；5、轉(zhuǎn)染含GGCX慢病毒后能夠使骨性關(guān)節(jié)炎中軟骨細(xì)胞的凋亡受到顯著抑制；6、轉(zhuǎn)染含GGCX慢病毒后能夠使骨性關(guān)節(jié)炎鈣結(jié)節(jié)形成受到顯著抑制。

簡(jiǎn)介：目的現(xiàn)階段，用于研究干細(xì)胞的主要材料來(lái)源于胚胎干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，但這兩種來(lái)源的干細(xì)胞都存在著部分的局限性，例如涉及創(chuàng)傷性、倫理道德性等，所以現(xiàn)臨床急需要尋找一種新型的干細(xì)胞以避免上述干細(xì)胞標(biāo)本倫理學(xué)的爭(zhēng)議、來(lái)源的缺乏及腫瘤形成的潛在性等弊端。本實(shí)驗(yàn)主要研究來(lái)源于經(jīng)血的經(jīng)血源性子宮內(nèi)膜干細(xì)胞MENSTRUALBLOODDERIVEDMESENCHYMALSTEMCELLS。MENSCS在體外獲取及培養(yǎng)增殖的方法并鑒定，觀察細(xì)胞的形態(tài)及生長(zhǎng)情況等基本生物學(xué)特性以及體外誘導(dǎo)其向成骨細(xì)胞成脂細(xì)胞方向分化以及重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)體外誘導(dǎo)其向子宮內(nèi)膜上皮和間質(zhì)細(xì)胞方向分化的可行性及不同濃度雌激素對(duì)分化結(jié)果的影響。為其在臨床中的應(yīng)用奠定一定基礎(chǔ)。方法本實(shí)驗(yàn)采用FICOLL密度梯度法從月經(jīng)第二天健康女性經(jīng)血中分離MENSCS采用經(jīng)典的MTT法對(duì)體外擴(kuò)增的第一代、第二代細(xì)胞描繪生長(zhǎng)曲線，并通過(guò)傳代培養(yǎng)、體外擴(kuò)增使用倒置光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及在培養(yǎng)過(guò)程中的動(dòng)態(tài)增殖變化。第二代細(xì)胞經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)免疫表型的表達(dá)情況。取第二代MENSCS分成誘導(dǎo)組和對(duì)照組。分別按5104ML接種至明膠包被的6孔板中24小時(shí)細(xì)胞貼壁后。誘導(dǎo)組培養(yǎng)液更換成干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化基礎(chǔ)培養(yǎng)基專用血清成骨誘導(dǎo)液為雙抗、200ΜMOLL抗壞血酸、10MMOLLΒ甘油磷酸鈉和01ΜMOLL地塞米松。對(duì)照組培養(yǎng)液換為L(zhǎng)DMEM添加10％FBS細(xì)胞置入37℃、5CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)每?jī)商鞊Q液1次連續(xù)培養(yǎng)3周。分別在第1、2、3周結(jié)束誘導(dǎo)結(jié)束時(shí)，通過(guò)檢測(cè)ALP活性、膠原表達(dá)情況、以及鈣結(jié)節(jié)表達(dá)情況，觀察成骨誘導(dǎo)的效果；分組方法同上，取第2代MENSCS按5104ML接種于被明膠包被的6孔板中細(xì)胞過(guò)夜貼壁后誘導(dǎo)組更換為干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化基礎(chǔ)培養(yǎng)基專用血清1106MOLL地塞米松10MOLL胰島素05MMOLLIBMX02MMOLL吲哚美辛對(duì)照組培養(yǎng)液LDMEM添加10?S細(xì)胞置入37℃、5CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)每?jī)商鞊Q液1次。分別在誘導(dǎo)2、3、4周結(jié)束時(shí)進(jìn)行油紅O染色，鏡下觀察油紅染色的結(jié)果。通過(guò)檢測(cè)MENSCS成骨成脂的誘導(dǎo)情況。探討其在體外向成骨成脂方向分化的潛能。將培養(yǎng)后的MENSCS分為4個(gè)研究組，每組培養(yǎng)體系中添加生長(zhǎng)因子TGFΒ10NGML。EGF10NGML。PDGFBB10NGML和不同濃度17Β雌二醇1109MOLL、1108MOLL、1107MOLL、1106MOLL分別標(biāo)記為組1、組2、組3、組4，培養(yǎng)體系中未添加生長(zhǎng)因子和雌激素的組為對(duì)照組。誘導(dǎo)培養(yǎng)5天后觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化及應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞標(biāo)記物角蛋白（CYTOKERATIN，CK）和基質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物波形蛋白（VIMENTIN，VIM），同時(shí)運(yùn)用RTPCR和WESTERNBLOT檢測(cè)CK、VIMMRNA表達(dá)水平及蛋白表達(dá)的量，以進(jìn)一步驗(yàn)證MENSCS是否向子宮內(nèi)膜方向分化及不同雌激素濃度對(duì)分化過(guò)程的影響。結(jié)果本實(shí)驗(yàn)表明利用FICOLL離心法能從健康女性月經(jīng)血中分離并培養(yǎng)出干細(xì)胞，此原代細(xì)胞約15周達(dá)到8590融合，細(xì)胞多成梭形、漩渦狀、輻射狀。MTT法得出細(xì)胞倍增時(shí)間約為3032H。此細(xì)胞傳代后能穩(wěn)定生長(zhǎng)，可見(jiàn)細(xì)胞形態(tài)以纖維樣為主導(dǎo)。發(fā)現(xiàn)傳代中，在接種細(xì)胞12天，細(xì)胞增殖緩慢，第34天全量換液后細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，接著56天后細(xì)胞生長(zhǎng)較前緩慢，進(jìn)入平臺(tái)期，整個(gè)過(guò)程未出現(xiàn)抑制現(xiàn)象。用流式細(xì)胞儀術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示，此類細(xì)胞表面標(biāo)記OCT4、STROL1、CD45、表達(dá)率分別為9513±081，180±092，093±042。細(xì)胞表現(xiàn)出OCT4強(qiáng)陽(yáng)性，STROL1、CD45陰性。此說(shuō)明培養(yǎng)的細(xì)胞具有胚胎干細(xì)胞性質(zhì)。誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)表明MENSCS成骨誘導(dǎo)前期誘導(dǎo)組細(xì)胞膠原表達(dá)量較后期升高M(jìn)ENSCS誘導(dǎo)兩周后經(jīng)茜素紅染色可見(jiàn)鈣結(jié)節(jié)明顯誘導(dǎo)組細(xì)胞ALPALKALINEPHOSPHATASE活性成骨細(xì)胞分化成熟的重要標(biāo)志隨著誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)呈上升趨勢(shì)，強(qiáng)陽(yáng)性，對(duì)照組陰性。經(jīng)成脂誘導(dǎo)3周有明顯的脂滴出現(xiàn)，油紅O染色呈陽(yáng)性，對(duì)照組陰性。體外向子宮內(nèi)膜細(xì)胞方向分化結(jié)果表明各研究組CK、VIMMRNA表達(dá)水平及蛋白表達(dá)量明顯高于對(duì)照組（P結(jié)論通過(guò)FICOLL密度梯度離心法能獲得MENSCS，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)特定的細(xì)胞表面標(biāo)志物也證實(shí)了其為經(jīng)血源性子宮內(nèi)膜干細(xì)胞，進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)也表明其能在體外誘導(dǎo)向成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞方向分化。MENSCS在體外能夠誘導(dǎo)向子宮內(nèi)膜上皮和間質(zhì)細(xì)胞方向分化。生長(zhǎng)因子和雌激素在此過(guò)程中起重要作用，并且不同濃度雌激素分化的效果影響不同。其具有較高的增殖能力、較低免疫原性、來(lái)源廣泛、多向分化潛能等特性為經(jīng)血源性子宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞用于臨床應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)，有望成為組織工程較為理想的種子細(xì)胞。

簡(jiǎn)介：科大學(xué)CALUNIVERSITY碩士學(xué)位論文TSPYL在Y染色體陽(yáng)性肝癌細(xì)胞中的表達(dá)及其生物學(xué)功能研究勞顯鈞導(dǎo)師姓名李山專業(yè)名稱臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)申請(qǐng)學(xué)位類型學(xué)術(shù)型學(xué)位答辯委員會(huì)主席顧國(guó)龍答辯委員會(huì)委員黃之虎朱旭秦雪莫武寧O一六年五月基本情況姓名勞顯鈞民族漢族籍貫廣西學(xué)習(xí)工作經(jīng)歷起止時(shí)間200809201306201309201606個(gè)人簡(jiǎn)歷所在院校或單位廣西醫(yī)科大學(xué)廣西醫(yī)科大學(xué)研究生期間科研經(jīng)歷性別女出生年月1989年10月政治面貌中共黨員學(xué)歷學(xué)位本科碩士項(xiàng)目起止時(shí)間項(xiàng)目名稱項(xiàng)目來(lái)源201306201512TSPYL在Y染畢業(yè)課題色體陽(yáng)性肝癌細(xì)胞中的表達(dá)及其生物學(xué)功能研究職稱學(xué)生學(xué)生本人承擔(dān)任務(wù)實(shí)驗(yàn)執(zhí)行、數(shù)據(jù)分析、論文撰寫(xiě)

簡(jiǎn)介：運(yùn)動(dòng)損傷主要包括肌肉組織部位的拉傷、扭傷和挫傷，以及肌腱和韌帶損傷。這些損傷不僅會(huì)影響身體健康而且阻礙日常生活與工作，當(dāng)前醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中干細(xì)胞治療的出現(xiàn)使得治療相關(guān)疾病被寄予厚望。本研究旨在建立骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞與肌腱干細(xì)胞的體外擴(kuò)增培養(yǎng)體系，并探索其細(xì)胞增殖、分化等生物學(xué)特性及其在肌肉損傷模型與肌腱損傷模型移植后體內(nèi)遷移情況，得到結(jié)論如下1采用機(jī)械分離法與酶消化法，成功分離獲得肌肉衛(wèi)星細(xì)胞和肌腱干細(xì)胞，分離后的兩種細(xì)胞傳代培養(yǎng)后增殖能力強(qiáng)，其中肌肉衛(wèi)星細(xì)胞傳至27代，肌腱干細(xì)胞傳至38代，此外經(jīng)凍存后復(fù)蘇的細(xì)胞仍具有較高的活性。2通過(guò)RTPCR、免疫熒光以及流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞相關(guān)特異性基因和表面標(biāo)記物進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示肌肉衛(wèi)星細(xì)胞中DESMIN、PAX7、CMET、MYF5、MYOD，肌腱干細(xì)胞中COLLAGENI，COLLAGENIII，CD44，NUCLEOSTEMIN和TENINC等特異性基因及表面抗原均呈陽(yáng)性表達(dá)，表明所分離的細(xì)胞分別具有肌肉衛(wèi)星細(xì)胞和肌腱干細(xì)胞的特性，此外對(duì)分離的兩種細(xì)胞進(jìn)行生長(zhǎng)曲線和克隆形成能力、核型分析等生物學(xué)特性鑒定，表明細(xì)胞具有較強(qiáng)的增值能力并且無(wú)染色體突變，以此保證本實(shí)驗(yàn)獲取兩種干細(xì)胞可用于細(xì)胞庫(kù)的構(gòu)建及日后相關(guān)研究的使用。3為鑒定肌肉衛(wèi)星細(xì)胞的多分化潛能特性，在體外將肌肉衛(wèi)星細(xì)胞分別向成肌細(xì)胞、成脂肪細(xì)胞、和成骨細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)，而肌腱干細(xì)胞則向成脂細(xì)胞、成骨細(xì)胞及軟骨細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)并對(duì)誘導(dǎo)結(jié)果進(jìn)行鑒定，結(jié)果表明肌肉衛(wèi)星細(xì)胞在向成肌細(xì)胞誘導(dǎo)7天后形態(tài)明顯發(fā)生變化，通過(guò)免疫組化對(duì)FASTSKELETALMYOSIN抗體進(jìn)行染色結(jié)果呈陽(yáng)性，RTPCR檢測(cè)成肌相關(guān)基因MYOG與FASTSKELETALMYOSIN均陽(yáng)性表達(dá)；肌腱干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)軟骨球形態(tài)明顯，阿利新藍(lán)染色成陽(yáng)性，RTPCR相關(guān)基因COLLAGENII，SOX9和ACAN均表達(dá)；此外兩種細(xì)胞在向成脂和成骨細(xì)胞誘導(dǎo)時(shí)均獲得成功，利用脂肪誘導(dǎo)液對(duì)肌肉衛(wèi)星細(xì)胞進(jìn)行成脂誘導(dǎo)，21天后油紅O染色可見(jiàn)到紅色脂滴，RTPCR檢測(cè)到脂肪細(xì)胞特異性分子標(biāo)記LPL和PPARΓ陽(yáng)性表達(dá)；肌肉衛(wèi)星細(xì)胞在成骨誘導(dǎo)液中誘導(dǎo)4周后進(jìn)行茜素紅染色呈陽(yáng)性，RTPCR檢測(cè)到成骨細(xì)胞特異性分子標(biāo)記COLLAGENI，OPN，RUNX2和ALP陽(yáng)性表達(dá)；以上研究表明肌肉衛(wèi)星細(xì)胞在體外培養(yǎng)的過(guò)程中具有多分化潛能特性。4分別采用心臟毒素（CYTOTOXIN，CTX）和膠原酶構(gòu)建小鼠肌肉損傷模型與肌腱損傷模型，HE（HEMATOXYLINEOSINSTAINING，染色顯示肌肉和肌腱組織正常結(jié)構(gòu)均被破壞，血清檢測(cè)發(fā)現(xiàn)CK均明顯超出正常范圍表明建模成功。對(duì)肌肉衛(wèi)星細(xì)胞進(jìn)行CMDIL細(xì)胞示蹤劑標(biāo)記，將標(biāo)記的細(xì)胞直接注射到小鼠肌肉損傷位點(diǎn)，熒光顯微鏡下可見(jiàn)組織中分布標(biāo)記的細(xì)胞，血清檢測(cè)顯示干細(xì)胞移植組CK值與損傷組和生理鹽水組相比有所降低，研究結(jié)果表明，對(duì)兩種模型進(jìn)行干細(xì)胞移植后可在三周內(nèi)穩(wěn)定的遷移到相應(yīng)組織中對(duì)損傷可能具有一定的作用。綜上所述，本實(shí)驗(yàn)在體外成功分離培養(yǎng)了肌肉衛(wèi)星細(xì)胞與肌腱干細(xì)胞，并對(duì)其生物學(xué)特性和多分化潛能進(jìn)行了研究，通過(guò)體外小鼠肌肉損傷模型移植，肌肉衛(wèi)星細(xì)胞移植后可在三周內(nèi)穩(wěn)定的遷移到相應(yīng)組織中，對(duì)小鼠肌肉損傷具有一定的恢復(fù)作用，并初步為以干細(xì)胞為基礎(chǔ)的細(xì)胞療法治療損傷、促進(jìn)組織再生修復(fù)的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

簡(jiǎn)介：目的血管內(nèi)皮細(xì)胞VULARENDOTHELIALCELL，VEC是一層覆蓋在血管內(nèi)壁上、參與組成血管管腔面的單層細(xì)胞，是血管壁的重要組成部分，可通過(guò)合成和分泌多種血管活性物質(zhì)參與血管活性物質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)，調(diào)節(jié)血管的收縮和舒張，從而在全身血管性疾病的發(fā)生發(fā)展中起到了重要的作用。近年來(lái)，人血管內(nèi)皮細(xì)胞的研究對(duì)象以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUMANUMBILICALVEINENDOTHELIALCELL，HUVEC及人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞HUMANATICENDOTHELIALCELLS，HAEC為主，二者原代細(xì)胞的分離培養(yǎng)均需取自一段血管內(nèi)皮，所以都存在著取材不方便的問(wèn)題，而購(gòu)買來(lái)的細(xì)胞株又在儲(chǔ)存解凍過(guò)程很容易導(dǎo)致細(xì)胞損傷，以及細(xì)胞免疫原性較高等方面的不足。內(nèi)皮祖細(xì)胞ENDOTHELIALPROGENITCELLS，EPC是成熟內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞，在特定條件下可經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)分化成為血管內(nèi)皮細(xì)胞，從而具有新生血管和內(nèi)皮的作用。自ASAHARA等于1997年發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮祖細(xì)胞以來(lái)，對(duì)其的研究逐漸深入，目前普遍認(rèn)為CD34、CD133及KDR是內(nèi)皮祖細(xì)胞的表面標(biāo)志。內(nèi)皮祖細(xì)胞的主要來(lái)源有臍靜脈血、骨髓以及外周血，目前人內(nèi)皮祖細(xì)胞主要以外周血為來(lái)源進(jìn)行分離及培養(yǎng)。同血管內(nèi)皮細(xì)胞一樣，內(nèi)皮祖細(xì)胞也可在MATRIGEL上形成毛細(xì)血管管腔結(jié)構(gòu)，在體外培養(yǎng)過(guò)程中也可以分泌一氧化氮N0這種重要的內(nèi)皮依賴性舒張因子。與血管內(nèi)皮細(xì)胞相比，人外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞來(lái)源更加豐富，取材也更加方便，而且可以獲得細(xì)胞免疫原性比購(gòu)買來(lái)的血管內(nèi)皮細(xì)胞更低的細(xì)胞，在實(shí)際應(yīng)用中可以更加符合人體情況。本研究通過(guò)分析人外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖能力、血管生成能力、一氧化氮分泌能力等生物學(xué)特征，并對(duì)所得出的結(jié)果進(jìn)行比較，以求為血管內(nèi)皮細(xì)胞的研究提供新的對(duì)象或思路。方法1、細(xì)胞的獲得與培養(yǎng)通過(guò)肝素抗凝管（紫頭管）采取20ML外周血后，使用密度梯度離心法分離出人外周血單個(gè)核細(xì)胞，然后以EGM2MV培養(yǎng)基將獲取的單個(gè)核細(xì)胞重懸，接種到已經(jīng)事先用人纖維連接蛋白FN包被好的培養(yǎng)瓶之中，在37℃5％CO2環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)，三天后換液，去除未貼壁的懸浮細(xì)胞，剩余的貼壁細(xì)胞則留下繼續(xù)培養(yǎng)，之后視細(xì)胞生長(zhǎng)情況，大約每3天換液一次，3周左右可見(jiàn)培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)出現(xiàn)鵝卵石樣細(xì)胞，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)對(duì)其表面抗原進(jìn)行鑒定后，確認(rèn)其為內(nèi)皮組細(xì)胞EPC，并以此為實(shí)驗(yàn)組。購(gòu)買來(lái)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC解凍后，同樣以EGM2MV為培養(yǎng)基，在37℃5％CO2環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增，并以此為對(duì)照組。2、細(xì)胞增殖能力比較為比較內(nèi)皮祖細(xì)胞與臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖能力，將分離培養(yǎng)獲得的內(nèi)皮祖細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞接種于6孔板，細(xì)胞每3天換液1次。在細(xì)胞培養(yǎng)至第2，4，6和8天時(shí)，首先通過(guò)錐蟲(chóng)藍(lán)染色來(lái)區(qū)別并去除無(wú)活性的細(xì)胞，然后用胰酶消化細(xì)胞，消化下來(lái)的細(xì)胞用細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行計(jì)數(shù)，然后用SPSS210統(tǒng)計(jì)軟件分析比較人外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖能力是否有差異。3、體外血管形成實(shí)驗(yàn)為了將內(nèi)皮祖細(xì)胞的體外血管形成能力與臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行比較，吸取300ΜLMATRIGEL凝膠鋪于24孔板內(nèi)，然后孵育30分鐘，孵育環(huán)境溫度為37℃，隨后將消化下來(lái)的原代內(nèi)皮祖細(xì)胞及臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分別以5104個(gè)同300ΜL的EGM2MV完全培養(yǎng)基混合重懸后加入到24孔板內(nèi)，孵育12H后，在倒置相差顯微鏡下觀察毛細(xì)血管管腔樣結(jié)構(gòu)的形成情況，拍照并使用WIMTUBE軟件分析后得到生成的管腔樣結(jié)構(gòu)的數(shù)目以及長(zhǎng)度，然后用SPSS210統(tǒng)計(jì)軟件分析比較人外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的體外血管形成能力是否有差異。4、一氧化氮分泌功能測(cè)定為比較內(nèi)皮祖細(xì)胞與臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的一氧化氮分泌功能是否有差別，分別取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，以5104個(gè)細(xì)胞種植于6孔板，培養(yǎng)至第三天后，取培養(yǎng)基上清，按照一氧化氮試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定上清液中的一氧化氮濃度。然后用SPSS210統(tǒng)計(jì)軟件分析比較人外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的一氧化氮分泌功能是否有差別，以及其差別是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果從外周血分離出的單個(gè)核細(xì)胞在體外經(jīng)特定的培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)后，于一周左右在顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞形成紡錘樣細(xì)胞簇，并逐漸變小消失。大約三周左右，培養(yǎng)瓶中開(kāi)始出現(xiàn)鵝卵石樣外觀的細(xì)胞，且細(xì)胞逐漸融合，呈外生性生長(zhǎng)，行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其細(xì)胞表面的特征性抗原，結(jié)果顯示所培養(yǎng)出的鵝卵石樣細(xì)胞表達(dá)CD34912％、CD133136％以及KDR955％，證實(shí)其為內(nèi)皮祖細(xì)胞EPC。人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞解凍復(fù)蘇后，細(xì)胞于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)迅速貼壁，也表現(xiàn)為外生性生長(zhǎng)。二者在同等條件下培養(yǎng)至第2、4、6、8天時(shí)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)并比較其平均值為164±014150±012105、372±033309±048105、841±063641±039105、1290±041，1048±089105，其差異均具有顯著性意義P＜005，N8。體外血管形成實(shí)驗(yàn)，二者形成的毛細(xì)血管管腔平均數(shù)分別為100±12，86±10個(gè)，管道長(zhǎng)度平均數(shù)分別為699±054，557±079MMMM2，差異均具有顯著性差異P＜005，N8。細(xì)胞一氧化氮分泌功能測(cè)定結(jié)果顯示，培養(yǎng)三天后，人外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基上清中一氧化氮濃度分別為181±040，253±028ΜMOLL，其差異具有顯著性意義P＜005，N8。結(jié)論人外周血分離培養(yǎng)獲得的內(nèi)皮祖細(xì)胞比人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞具有更好的增殖潛能及體外血管形成能力，可以作為臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞在其相關(guān)研究中的替代品。

簡(jiǎn)介：【目的】聚左旋乳酸（PLLA）生物材料生物相容性好、可降解吸收、具有一定的力學(xué)強(qiáng)度，應(yīng)用廣泛的一類生物材料，但其表面親水性差，不利于細(xì)胞黏附生長(zhǎng)，難以完全發(fā)揮其生物特性。通過(guò)聚乙二醇改性得到的聚左旋乳酸聚乙二醇（PLLAPEG）更利于細(xì)胞的黏附及生長(zhǎng)。納米羥基磷灰石（NHA）具有良好的生物相容性、骨傳導(dǎo)性好，易于組織結(jié)合，可與多種天然及人工高分子材料形成復(fù)合材料。通過(guò)添加超順磁性納米ΑFE2O3粒子，在恒定磁場(chǎng)作用下，磁性材料能夠同時(shí)誘導(dǎo)并促進(jìn)前交叉韌帶重建術(shù)后移植肌腱與骨組織表面的愈合。該學(xué)位論文運(yùn)用本實(shí)驗(yàn)探討通過(guò)NHA、PLLA結(jié)合磁性納米ΑFE2O3粒子以及PEG親水粒子，制備具有超順磁性及親水性的生物復(fù)合材料，并對(duì)其性能進(jìn)行檢測(cè)，期待制備出更理想、合適的前交叉韌帶重建內(nèi)固定材料?！痉椒ā?取50克的NHA粉末和200克PLLA于干燒杯中，加入25G超順磁性納米ΑFE2O3粒子，均勻混合后，將混合材料加入注塑機(jī)中熔融注塑成型。同樣方法制備NHAPLLAPEGΑFE2O3復(fù)合材料螺釘。以NHAPLLAΑFE2O3界面螺釘及NHAPLLAPEGΑFE2O3復(fù)合材料螺釘為實(shí)驗(yàn)組，BICIHA螺釘為對(duì)照組，比較三組界面螺釘?shù)牧W(xué)性能。2取3－5月月齡、體重20－25KG的新西蘭大白兔，無(wú)菌環(huán)境下股骨穿刺抽取兔骨髓，采用密度梯度離心法聯(lián)合貼壁法分離、純化兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（RBMSCS），10％FBS的低糖DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)RBMSCS，培養(yǎng)傳代至第3代，取生長(zhǎng)良好的P3代RBMSCS觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，備后續(xù)研究使用。3將第3代RBMSCS分別于NHAPLLAΑFE2O3、NHAPLLAPEGΑFE2O3組固定螺釘放入培養(yǎng)基中共同培養(yǎng)，通過(guò)CCK8法檢測(cè)細(xì)胞黏附率及細(xì)胞在螺釘表面的增殖活性。4通過(guò)計(jì)算機(jī)控制電子萬(wàn)能實(shí)驗(yàn)機(jī)進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)BICIHA螺釘，NHAPLLAΑFE2O3界面螺釘及NHAPLLAPEGΑFE2O3復(fù)合材料螺釘三組材料螺釘?shù)牧W(xué)性能進(jìn)行對(duì)比分析。1拉伸強(qiáng)度檢測(cè)將樣品螺釘?shù)膬啥朔謩e固定于實(shí)驗(yàn)機(jī)模塊上，設(shè)定加載負(fù)荷為1000N，加載速度為5MMMIN。每組材料測(cè)試樣本量N10。5將螺釘放置于實(shí)驗(yàn)機(jī)測(cè)試平臺(tái)上，跨距設(shè)定為20MM，加載速度5MMMIN，通過(guò)三點(diǎn)側(cè)彎法對(duì)螺釘進(jìn)行檢測(cè)。每組材料測(cè)試樣本量N10。6把三組風(fēng)干處理好的螺釘放入裝有PBS溶液的培養(yǎng)瓶中，溶液平面高于螺釘，密封置于37℃，5％CO2恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中。分別于4周、8周、12周、16周、20周取出螺釘干燥處理后稱重，并分別記錄每組螺釘重量，計(jì)算出每個(gè)時(shí)間點(diǎn)螺釘?shù)慕到獍俜直取癉值”。7使用新鮮豬脛骨進(jìn)行前十字韌帶重建，分別應(yīng)用三組螺釘對(duì)脛骨端肌腱移植物進(jìn)行擠壓固定。肌腱移植物固定完成后，對(duì)三組實(shí)驗(yàn)樣本實(shí)施生物力學(xué)測(cè)試，包括最大載荷、剛度測(cè)試和失敗模式測(cè)試。8使用成年五指山豬麻醉后進(jìn)行ACL重建手術(shù)，采用與肌鍵移植物直徑匹配的鉆具分別經(jīng)前交叉韌帶在股骨和脛骨的附著點(diǎn)建立股骨、脛骨隧道，然后將肌腱移植物，經(jīng)脛骨隧道及股骨隧道拉出。使用NHAPLLAΑFE2O3螺釘、NHAPLLAPEGΑFE2O3復(fù)合材料螺釘以及BICIHA螺釘進(jìn)行固定，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于術(shù)后8周按照動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理原則處死，取雙側(cè)膝關(guān)節(jié)標(biāo)本，觀察皮質(zhì)骨擠壓釘固定后的腱骨愈合組織學(xué)轉(zhuǎn)歸?！窘Y(jié)果】通過(guò)熱熔融注塑成型制得的NHAPLLAΑFE2O3及NHAPLLAPEGΑFE2O3復(fù)合界面螺釘外形良好，螺紋均勻規(guī)則，內(nèi)部孔徑三維結(jié)構(gòu)良好。力學(xué)性能結(jié)果顯示BICIHA組，NHAPLLAΑFE2O3組及NHAPLLAPEGΑFE2O3組螺釘拉伸強(qiáng)度分別為54±265MPA，51±305MPA，38±276MPA；三組結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P【結(jié)論】通過(guò)ΑFE2O3磁性鐵離子改性的NHAPLLAΑFE2O3復(fù)合界面螺釘以及通過(guò)PEG親水改性后的NHAPLLAPEGΑFE2O3復(fù)合界面螺釘?shù)募?xì)胞粘附率及增殖活性高于臨床使用的BICIHA螺釘，說(shuō)明兩種改性螺釘可以更好的促進(jìn)細(xì)胞增殖生長(zhǎng)，是一種性能良好的內(nèi)植物材料。但改性后的NHAPLLAPEGΑFE2O3及NHAPLLAΑFE2O3復(fù)合界面螺釘力學(xué)性能弱于臨床使用的BICIHA螺釘，目前還需通過(guò)對(duì)原材料的材料組成比例、材料分子量及材料制備工藝上進(jìn)行改進(jìn)及優(yōu)化。同時(shí)改性后NHAPLLAPEGΑFE2O3及NHAPLLAΑFE2O3復(fù)合界面螺釘促進(jìn)腱骨愈合能力與臨床使用的BICIHA界面螺釘相似，表明兩種復(fù)合材料界面螺釘均可符合臨床上腱骨愈合的要求。

簡(jiǎn)介：金屬植入體表面修飾以增強(qiáng)其與宿主骨的骨性鍵合（骨整合）是骨修復(fù)領(lǐng)域的重要課題。采用微納結(jié)構(gòu)和生物活性物質(zhì)構(gòu)建適合細(xì)胞組織生長(zhǎng)的表面微環(huán)境，是促進(jìn)表面骨組織形成和骨整合的有效手段。然而，二者如何有效結(jié)合，共同發(fā)揮作用仍是一個(gè)挑戰(zhàn)。本論文以具有優(yōu)良細(xì)胞響應(yīng)性的TIO2納米結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)，進(jìn)一步優(yōu)化微納結(jié)構(gòu)，承載生物活性元素MG或ZN，在鉭金屬上構(gòu)建出具有高成骨效能的表面修飾層（薄膜），并對(duì)其在細(xì)胞粘附、增殖、分化和礦化等方面進(jìn)行評(píng)價(jià)，探討了微納結(jié)構(gòu)和活性元素對(duì)細(xì)胞成骨協(xié)同作用的機(jī)制。本文主要取得了如下3方面的研究結(jié)果1含MG的TIO2納米點(diǎn)薄膜。采用溶膠凝膠法直接將MG元素?fù)饺隩IO2納米點(diǎn)中。通過(guò)在前驅(qū)體溶膠中控制MG加入量（001MGTI，摩爾比），可形成納米點(diǎn)尺寸和分布相似的不同MG含量的TIO2納米點(diǎn)薄膜。其納米點(diǎn)為多晶銳鈦礦，MG在納米點(diǎn)表面層有一定的富集。薄膜的MG釋放量與其含量近似成正比，但累積總釋放量很低（01MGTIO2的14天累計(jì)釋放為0017ΜGML）。在薄膜吸附蛋白質(zhì)能力方面，MG的摻入有一定的促進(jìn)作用。前成骨細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果顯示，摻MG后，TIO2納米點(diǎn)薄膜的1天的細(xì)胞粘附數(shù)量和7天的增殖數(shù)量方面分別提高175％和184，表明了MG摻入具有一定增強(qiáng)細(xì)胞相容性的作用。2以生物玻璃為載體的含ZN的TIO2納米棒薄膜。采用溶膠凝膠法將含ZN生物玻璃嵌入TIO2納米棒薄膜中。在制備中，改變了生物玻璃前驅(qū)體溶膠的濃度（SI濃度0160MOLL0320MOLL），SI濃度為02130256MOLL時(shí)，嵌入薄膜厚度為200270NM。玻璃的嵌入不僅為ZN提供了載體，也進(jìn)一步改善了TIO2納米棒薄膜的微納結(jié)構(gòu)，提高了生物響應(yīng)性。在生物玻璃中引入TIO2組元，能有效抑制生物玻璃的過(guò)快降解，當(dāng)TISI05（摩爾比）時(shí)嵌入的生物玻璃具有合適降解行為，可滿足刺激細(xì)胞的要求。用ZN替代部分CA，結(jié)果顯示不影響生物玻璃的嵌入厚度和降解行為，14天的ZN釋放總量低于01ΜGML。在細(xì)胞培養(yǎng)方面，嵌入含ZN生物玻璃的TIO2納米棒薄膜（TIO2ZNBG）的生物響應(yīng)性明顯高于含ZN玻璃薄膜（ZNBG）和嵌入不含ZN玻璃的TIO2薄膜（TIO2BG），尤其在成骨分化的評(píng)價(jià)中，TIO2ZNBG薄膜上的細(xì)胞的7天ALP活性分別高于ZNBG薄膜251和TIO2BG薄膜439，14天的OCN分泌分別高出1309和10410，14天的RUNX2基因表達(dá)分別高出3098和5056，21天的細(xì)胞外基質(zhì)礦化水平分別高出1769和4765。在較低的ZN釋放濃度條件下，TIO2ZNBG薄膜能產(chǎn)生上述各個(gè)細(xì)胞階段的優(yōu)良成骨分化活性，反映出納米結(jié)構(gòu)與生物活性元素發(fā)揮了協(xié)同作用，其機(jī)制可理解為T(mén)IO2納米棒結(jié)構(gòu)促進(jìn)細(xì)胞初期粘附和鋪展，TIO2納米棒、含ZN生物玻璃和粘附于頂端的細(xì)胞三者一起構(gòu)建了一個(gè)半封閉的空間，這樣的微環(huán)境有利于ZN有效發(fā)揮對(duì)細(xì)胞的刺激作用，從而使細(xì)胞具有高成骨分化效能。3以磷酸鈣為載體的含ZN的TIO2納米棒薄膜。采用旋涂法將含ZN磷酸鈣（ZNCAP）涂覆于TIO2納米棒薄膜上。在制備中，通過(guò)旋涂方法和轉(zhuǎn)速的改變，可獲得ZNCAP的不同分布，ZNCAP在薄膜表面的存在，不僅給薄膜賦予了活性成分ZN，也為薄膜提供了微米尺度的結(jié)構(gòu)。在ZNCAP密分布的薄膜（TIO2DZCP）上，ZNCAP厚度為314±20NM，覆蓋度為497；在稀分布的薄膜（TIO2SZCP）上，ZNCAP厚度為204±37NM，覆蓋度為376。未覆蓋的TIO2納米棒區(qū)域的長(zhǎng)寬尺寸在50150ΜM，其與呈微米尺度分布的ZNCAP覆蓋層共同構(gòu)建了特殊拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的表面形貌。由于經(jīng)過(guò)500℃熱處理，ZNCAP覆蓋層與TIO2納米棒薄膜結(jié)合牢固，且覆蓋層的ZNCAP成分為結(jié)晶度較低的羥基磷灰石（HA），ZN的摻入沒(méi)有影響CAP的晶相。TIO2DZCP和TIO2SZCP薄膜的ZNCAP覆蓋層降解較快，且ZN累積釋放濃度（7天累計(jì)釋放分別為0104ΜGML和0087ΜGML）遠(yuǎn)低于完全覆蓋的參照試樣（FZCP，0200ΜGML）。在細(xì)胞培養(yǎng)方面，與TIO2DZCP薄膜和FZCP薄膜相比，培養(yǎng)在TIO2SZCP薄膜上的MC3T3E1細(xì)胞有更強(qiáng)的成骨分化的能力，TIO2SZCP薄膜上的細(xì)胞的14天的OCN活性分別高于TIO2DZCP薄膜209和FZCP薄膜454，14天的RUNX2基因表達(dá)分別高出1880和1844，21天的細(xì)胞外基質(zhì)礦化水平分別高出1092和1082。在較短周期的降解釋放后，TIO2SZCP薄膜能產(chǎn)生上述細(xì)胞分化后期的優(yōu)良成骨活性，反映出其結(jié)構(gòu)與成分的組合作用，其促進(jìn)機(jī)制可認(rèn)為是納米尺度的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)促進(jìn)了細(xì)胞的粘附和偽足伸展，微米尺度的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)促進(jìn)了細(xì)胞的增殖，ZN等活性元素釋放促進(jìn)了分化。本文TIO2微納結(jié)構(gòu)與生物活性元素結(jié)合的薄膜能很好地產(chǎn)生出兩者協(xié)同增強(qiáng)的生物學(xué)效應(yīng)，此為金屬植入體表面修飾中結(jié)合微米納米拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)和生物活性元素提供了一種新穎設(shè)計(jì)思路，對(duì)高效促進(jìn)骨整合具有重要的意義。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)R73密級(jí)公開(kāi)UDC610學(xué)校代碼10555碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文（專業(yè)學(xué)位）（專業(yè)學(xué)位）模擬不同照射模式對(duì)鼻咽癌細(xì)胞系模擬不同照射模式對(duì)鼻咽癌細(xì)胞系CNE2CNE2放射生物學(xué)效應(yīng)的影響放射生物學(xué)效應(yīng)的影響研究生姓名陳琛指導(dǎo)教師、職稱席許平主任醫(yī)師合作導(dǎo)師、職稱專業(yè)學(xué)位類別（領(lǐng)域）臨床醫(yī)學(xué)（腫瘤學(xué)）研究方向放射治療學(xué)所在學(xué)院湖南省腫瘤醫(yī)院二〇一五年五月一五年五月南華大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得南華大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我共同工作的同志對(duì)本研究所作的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。作者簽名年月日南華大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文是本人在南華大學(xué)攻讀（博碩）士學(xué)位期間在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的學(xué)位論文。本論文的研究成果歸南華大學(xué)所有，本論文的研究?jī)?nèi)容不得以其它單位的名義發(fā)表。本人同意南華大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保留學(xué)位論文；學(xué)?？筛鶕?jù)國(guó)家或湖南省有關(guān)部門(mén)規(guī)定送交學(xué)位論文。同意學(xué)校將論文加入中國(guó)優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)，并按中國(guó)優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)出版章程規(guī)定享受相關(guān)權(quán)益。同意授權(quán)中國(guó)科學(xué)信息技術(shù)研究所將本學(xué)位論文收錄到中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)，并通過(guò)網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。對(duì)于涉密的學(xué)位論文，解密后適用該授權(quán)。作者簽名年月日導(dǎo)師簽名年月日

簡(jiǎn)介：近幾年，我國(guó)空氣霧霾情況逐年加劇，人們?nèi)諠u重視對(duì)咽喉、肺部的保健，提高了對(duì)加強(qiáng)自身免疫力的意識(shí)。蹄葉橐吾的根及根莖在吉林省藥材標(biāo)準(zhǔn)中記載為山紫莞，主“溫肺下氣，消痰止嗽”，它的葉片具有特殊風(fēng)味，是延吉人民喜食的一種野菜，有研究表明蹄葉橐吾葉片提取物具有消炎和提高免疫力等功效，目前主要集中為有機(jī)溶劑提取物，本文以水提物為研究對(duì)象，提取、精制并分級(jí)蹄葉橐吾葉多糖（PLF），最后從抗氧化能力及對(duì)細(xì)胞存活率的影響兩方面初步探討其生物學(xué)活性。主要研究了以下幾方面內(nèi)容。研究了PLF的提取及精制工藝。首先，對(duì)葉片定性檢出酚類、多糖類、黃酮類、生物堿等活性成分；水提醇沉提取PLF，采用響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化PLF最佳提取工藝為料液比120（GML）條件下，在90℃水浴鍋中提取2H，收集濾液3次，PLF提取率為876％；殼聚糖絮凝純化PLF得到精制蹄葉橐吾葉多糖（DPLF），采用正交試驗(yàn)優(yōu)化最優(yōu)精制工藝為在50MLPLF（濃度為2MGML）中加入殼聚糖（濃度為2）1ML，30℃條件下攪拌，絮凝60MIN后蛋白質(zhì)去除率為8503，脫色率為8174，多糖損失率為4281；通過(guò)定性實(shí)驗(yàn)、紫外全波長(zhǎng)掃描（UVVIS）、紅外光譜掃描（FTIR）和高效液相色譜（HPLC）等技術(shù)確定DPLF的理化性質(zhì)，初步判斷其除雜程度，特征基團(tuán)及單糖組成成分。采用離子交換層析柱梯度洗脫DPLF，結(jié)合瓊脂糖凝膠柱層析進(jìn)一步分級(jí)，最終得到DPLFN，DPLFA11，DPLFA12，DPLFA21，DPLFA31，DPLFA32，DPLFA41和DPLFA51八個(gè)組分。通過(guò)UVVIS、FTIR、HPLC和高效凝膠滲透色譜（HPGPC）確定了其中五種組分幾乎不含干擾類雜質(zhì)；推測(cè)出可能含有的特征基團(tuán)；明確了單糖組成成分，其中主要包含的單糖種類有甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、巖藻糖和阿拉伯糖等；計(jì)算出該四種組分相對(duì)分子量（MW）依次為40992105，13016106，34410104和10280104。研究了DPLF的生物學(xué)活性。（1）DPLF的抗氧化活性從總抗氧化能力、還原力和對(duì)DPPH自由基、超氧陰離子自由基、羥基自由基的清除能力五方面綜合評(píng)價(jià)，結(jié)果表明DPLF具有一定的抗氧化能力，尤其對(duì)DPPH自由基清除能力較強(qiáng)，半抑制濃度為00351MGML；（2）采用MTT比色法測(cè)定DPLF對(duì)CONA誘導(dǎo)的小鼠脾細(xì)胞存活率的影響當(dāng)濃度為2ΜGL時(shí)，影響顯著，細(xì)胞存活率為1003135，此時(shí)CONA刺激細(xì)胞增殖指數(shù)為17606。

簡(jiǎn)介：目的體外篩選設(shè)計(jì)并合成的抑制效率最佳的MMP3SHRNA慢病毒載體，并觀察其對(duì)人退變髓核細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)。方法采用酶序貫消化法對(duì)臨床腰椎間盤(pán)突出癥患者需行摘除術(shù)來(lái)源的髓核組織進(jìn)行分離、單層原代細(xì)胞培養(yǎng)，應(yīng)用細(xì)胞免疫組化法、細(xì)胞免疫熒光法等方法對(duì)髓核細(xì)胞進(jìn)行鑒定；根據(jù)人MMP3基因MRNA序列設(shè)計(jì)合成4對(duì)不同的MMP3SHRNA序列，與酶切后LV3載體鏈接并轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞，通過(guò)PCR和基因測(cè)序?qū)U(kuò)增的陽(yáng)性克隆進(jìn)行鑒定，對(duì)慢病毒進(jìn)行包裝和滴度測(cè)定；通過(guò)熒光定量PCR、WESTERNBLOT分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染人退變髓核細(xì)胞后MMP3、Ⅱ型膠原、蛋白多糖基因和蛋白質(zhì)水平的變化，從而篩選最佳抑制序列慢病毒載體及其對(duì)人退變髓核細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)。結(jié)果原代髓核細(xì)胞呈三角形、多角形或短梭形等不規(guī)則形狀，細(xì)胞核較大，培養(yǎng)約3周時(shí)，原代髓核細(xì)胞匯合可達(dá)80％以上；蘇木精伊紅染色細(xì)胞核呈藍(lán)色，胞漿呈淡紅色，甲苯胺藍(lán)染色胞核成深藍(lán)色，胞漿呈淡藍(lán)色，細(xì)胞免疫組化及細(xì)胞免疫熒光Ⅱ型膠原分別呈黃褐色和綠色熒光。經(jīng)酶切鑒定陽(yáng)性擴(kuò)增片段正確，基因測(cè)序顯示與設(shè)計(jì)序列完全相符，滴度檢測(cè)顯示大于1X108TUML。MMP3SHRNA慢病毒轉(zhuǎn)染72和96小時(shí)后從MMP3基因和蛋白水平綜合篩選得出MMP3SHRNA3為最佳抑制序列（P結(jié)論成功構(gòu)建并篩選出抑制效率最佳的MMP3SHRNA慢病毒載體；慢病毒介導(dǎo)的RNAI可以顯著抑制人退變髓核細(xì)胞MMP3的表達(dá)，從而增加人退變髓核細(xì)胞外基質(zhì)表達(dá)量，有望成為阻止或逆轉(zhuǎn)椎間盤(pán)退變的進(jìn)程而治療椎間盤(pán)退變。

簡(jiǎn)介：聚乳酸（PLA）因其良好的機(jī)械性能、可加工性能、可生物降解等性能，而被廣泛用于骨組織修復(fù)領(lǐng)域。然而，其本身又有一定的局限性，如親水性較差、細(xì)胞相容性不夠理想、缺乏成骨和成血管化功能等。通過(guò)對(duì)PLA材料表面進(jìn)行生物學(xué)修飾，可以有效改善PLA材料的上述性能。作為貽貝粘附蛋白的關(guān)鍵成分，多巴胺（DOPA）幾乎可以粘附在任何材料的表面，有效改善材料表面的親水性和細(xì)胞相容性；尤為重要的是，其形成的聚多巴胺PDOPA層可以作為二級(jí)反應(yīng)平臺(tái)，在基體材料表面進(jìn)一步修飾生物活性分子，賦予基體材料優(yōu)異的生物學(xué)性能。為此，本文首先選用聚（D、L乳酸）（PDLLA）作為基體材料，利用溶液澆注法制備成膜，基于DOPA在堿性條件下的氧化自聚合反應(yīng)對(duì)其進(jìn)行改性，得到一系列不同濃度的DOPA改性的PDLLAPDOPAX復(fù)合膜，利用SEM、AFM、接觸角和表面能對(duì)改性前后的表面形貌、親疏水性及表面能進(jìn)行觀察測(cè)試。結(jié)果表明經(jīng)DOPA改性之后，PDLLA膜表面的形貌發(fā)生了明顯的變化，粗糙度明顯增大，親水性得到了提高，表面能增大，最終確定出DOPA合適的反應(yīng)濃度為2GL。鑒于殼寡糖（COS）具有優(yōu)異的生物相容性、良好的成骨活性和水溶性，本文在上述實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步以PDOPA層為反應(yīng)平臺(tái)，引入不同濃度的COS，從而制得不同濃度的COS功能化的PDLLAPDOPACOSY復(fù)合膜。利用SEM、AFM、接觸角、表面能、FTIR和XPS對(duì)改性前后的表面形貌、親疏水性、表面能、化學(xué)結(jié)構(gòu)和表面元素進(jìn)行觀察測(cè)試。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明DOPA和COS改性之后，光滑的PDLLA膜表面出現(xiàn)了明顯的溝槽或突起結(jié)構(gòu)，且粗糙度明顯增大。與純的PDLLA膜相比，PDLLAPDOPA和PDLLAPDOPACOS復(fù)合膜的親水性均得到了提高，表面能也相應(yīng)增大。FTIR和XPS分析進(jìn)一步證實(shí)了DOPA和COS被成功引入到材料表面，同時(shí)確定了材料表面氮元素的含量及COS的合適反應(yīng)濃度為4GL。以該濃度制得的復(fù)合膜作為評(píng)價(jià)細(xì)胞相容性的實(shí)驗(yàn)材料，以MC3T3E1作為種子細(xì)胞對(duì)改性前后的膜材料進(jìn)行體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。材料的成骨細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明與純的PDLLA膜相比，PDLLAPDOPA和PDLLAPDOPACOS復(fù)合膜對(duì)MC3T3E1的增殖、分化及堿性磷酸酶（ALP）的分泌均具有明顯的促進(jìn)作用。復(fù)合膜PDLLAPDOPA與PDLLAPDOPACOS相比，PDLLAPDOPA對(duì)MC3T3E1的增殖效果更明顯，而PDLLAPDOPACOS在促進(jìn)MC3T3E1的分化及ALP的分泌方面具有更明顯的優(yōu)勢(shì)。鑒于去鐵胺（DFO）在血管的再生過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用，本文在上述實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，進(jìn)一步以PDOPA層為反應(yīng)平臺(tái)，引入不同濃度的DFO，從而制得不同濃度的DFO功能化的PDLLAPDOPADFOZ復(fù)合膜。利用SEM、AFM、接觸角、表面能、FTIR和XPS對(duì)改性前后的表面形貌、親疏水性、表面能、化學(xué)結(jié)構(gòu)和化學(xué)元素進(jìn)行觀察測(cè)試。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明與純的PDLLA膜相比，PDLLAPDOPADFO和PDLLAPDOPADFO復(fù)合膜的表面形貌發(fā)生了明顯的變化，表面有大量的凸起結(jié)構(gòu)，粗糙度明顯增大。且復(fù)合膜的親水性明顯得到了提高，表面能也相應(yīng)增大，相比之下，PDLLAPDOPADFO復(fù)合膜的改善效果更明顯。FTIR和XPS分析進(jìn)一步證實(shí)了DOPA和DFO被成功引入到材料表面，同時(shí)確定了材料表面氮元素的含量及DFO的合適反應(yīng)濃度為2GL。以該濃度制得的復(fù)合膜作為細(xì)胞相容性評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)材料，以MC3T3E1和HUVECS作為種子細(xì)胞對(duì)改性前后的膜材料進(jìn)行體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。材料的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明對(duì)于MC3T3E1而言，與純的PDLLA膜相比，PDLLAPDOPA和PDLLAPDOPADFO復(fù)合膜對(duì)MC3T3E1的粘附、增殖和鋪展均具有一定的促進(jìn)作用。對(duì)比PDLLAPDOPA和PDLLAPDOPADFO兩種復(fù)合膜，可以發(fā)現(xiàn)PDLLAPDOPA更有利于促進(jìn)MC3T3E1的粘附、增殖和鋪展。對(duì)于HUVECS而言，與純的PDLLA膜相比，PDLLAPDOPA和PDLLAPDOPADFO復(fù)合膜對(duì)HUVECS的粘附、增殖和鋪展，均具有明顯的促進(jìn)作用。對(duì)比PDLLAPDOPA和PDLLAPDOPADFO兩種復(fù)合膜，可以發(fā)現(xiàn)PDLLAPDOPADFO在促進(jìn)HUVECS的粘附、增殖和鋪展方面均表現(xiàn)出了絕對(duì)的優(yōu)勢(shì)。

簡(jiǎn)介：碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文堿性成纖維生長(zhǎng)因子對(duì)牙齦間充質(zhì)堿性成纖維生長(zhǎng)因子對(duì)牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)性能的影響干細(xì)胞生物學(xué)性能的影響EFFECTSOFBASICFIBROBLASTGROWTHFACTONTHEDEVELOPMENTOFTHEGINGIVADERIVEDMESENCHYMALSTEMCELLPROPERTIES專業(yè)名稱外科學(xué)研究方向口腔醫(yī)學(xué)研究生方穎導(dǎo)師葛立宏教授廣州醫(yī)科大學(xué)廣州醫(yī)科大學(xué)廣州廣州二零一六年五二零一六年五月中文摘要1中文中文摘要摘要堿性成纖維生長(zhǎng)因子對(duì)牙齦間充質(zhì)堿性成纖維生長(zhǎng)因子對(duì)牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)性能的影響細(xì)胞生物學(xué)性能的影響研究生方穎指導(dǎo)老師葛立宏教授輔導(dǎo)老師曾素娟主任醫(yī)師研究研究目的目的間充質(zhì)干細(xì)胞具有自我復(fù)制、高度增殖和多向分化的能力，在組織與器官的修復(fù)再生方面有重要的作用。牙齦組織具有很強(qiáng)的組織愈合能力，取材容易、方便，并且愈合后無(wú)疤痕形成。牙齦組織中也存在著間充質(zhì)干細(xì)胞，和其他間充質(zhì)干細(xì)胞一樣，具有基本的干細(xì)胞特性，并且具有免疫調(diào)節(jié)功能。本課題旨在體外研究堿性成纖維生長(zhǎng)因子對(duì)牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響，為組織再生提供合適的種子細(xì)胞和細(xì)胞生長(zhǎng)因子。研究研究方法方法第一部分GMSC的分離培養(yǎng)和鑒定1、GMSC的分離培養(yǎng)在家長(zhǎng)知情同意下，取臨床中全身健康的接受冠延長(zhǎng)手術(shù)患者，術(shù)中切去的牙齦組織，采用酶消化法進(jìn)行分離、培養(yǎng)。2、GMSC的鑒定通過(guò)檢測(cè)GMSC的克隆形成能力、多向分化潛能（成骨分化能力、成脂分化能力）、間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記物（STRO1、CD146、CD90、CD105、CD45、CD34），對(duì)分離、培養(yǎng)的GMSC進(jìn)行鑒定。第二部分BFGF對(duì)GMSC生物學(xué)特性的影響1、GMSC的分離培養(yǎng)鑒定在家長(zhǎng)知情同意下，取臨床中全身健康的接受冠延長(zhǎng)手術(shù)患者，術(shù)中切去的牙齦組織，采用酶消化法進(jìn)行分離、培養(yǎng)。通過(guò)檢測(cè)GMSC

簡(jiǎn)介：分類號(hào)分類號(hào)R7381R7381密級(jí)密級(jí)公開(kāi)公開(kāi)專業(yè)學(xué)位研究生學(xué)位論文論文題目（中文）論文題目（中文）靶向沉默靶向沉默RIPK4RIPK4基因?qū)侨饬龌驅(qū)侨饬鯩GMG6363細(xì)胞生細(xì)胞生物學(xué)特性的研究物學(xué)特性的研究論文題目（外文）論文題目（外文）THERESEARCHOFTHEBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFMG63CELLSAFTERRIPK4GENEINHIBITEDBYSIRNA研究生姓名研究生姓名田夏威田夏威學(xué)位類別學(xué)位類別臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)學(xué)位臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)學(xué)位專業(yè)學(xué)位領(lǐng)域?qū)I(yè)學(xué)位領(lǐng)域骨科學(xué)位級(jí)別學(xué)位級(jí)別碩士校內(nèi)校內(nèi)導(dǎo)師姓名、職稱導(dǎo)師姓名、職稱王栓科王栓科教授教授論文工作起止年月論文工作起止年月20142014年0606月至月至20152015年0909月論文提交日期論文提交日期20162016年0303月論文答辯日期論文答辯日期20162016年0505月學(xué)位授予日期學(xué)位授予日期20162016年0606月校址甘肅省蘭州市校址甘肅省蘭州市IRIPK4RIPK4在骨肉瘤組織中的表達(dá)及靶向沉默在骨肉瘤組織中的表達(dá)及靶向沉默RIPK4RIPK4基因?qū)侨饣驅(qū)侨饬鯩GMG6363細(xì)胞生物學(xué)特性的研究細(xì)胞生物學(xué)特性的研究中文摘要中文摘要目的目的研究RIPK4（RECEPTORINTERACTINGPROTEINKINASE4）基因在骨肉瘤組織及細(xì)胞中的表達(dá)；通過(guò)小干擾RNA沉默骨肉瘤MG63細(xì)胞中RIPK4基因的表達(dá)，觀察抑制RIPK4基因后對(duì)骨肉瘤MG63細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。方法方法使用免疫組織化學(xué)方法和實(shí)時(shí)熒光定量PCR法分別檢測(cè)骨肉瘤患者原發(fā)灶中RIPK4蛋白的表達(dá)情況及骨肉瘤細(xì)胞中RIPK4MRNA的表達(dá)情況；設(shè)計(jì)具有沉默效應(yīng)作用的RIPK4SIRNA，將其通過(guò)載體脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染入骨肉瘤細(xì)胞，使MG63細(xì)胞中RIPK4基因的表達(dá)水平下調(diào)，CCK8法檢測(cè)骨肉瘤細(xì)胞的增殖水平；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡的情況；實(shí)時(shí)熒光定量PCR法和蛋白質(zhì)免疫印跡（WESTERNBLOT）法分別從MRNA及蛋白的表達(dá)水平檢測(cè)MG63骨肉瘤細(xì)胞中Β連環(huán)蛋白（ΒCATENIN），細(xì)胞周期蛋白（CYCLIND1），細(xì)胞凋亡及自噬相關(guān)因子BCL2、LC3及BECLIN1的表達(dá)。結(jié)果結(jié)果①免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)顯示骨肉瘤患者標(biāo)本中RIPK4蛋白表達(dá)陽(yáng)性，實(shí)時(shí)熒光定量PCR法結(jié)果顯示RIPK4MRNA在骨肉瘤細(xì)胞中的表達(dá)明顯高于正常成骨細(xì)胞（P＜005）；干擾后，RIPK4SIRNA轉(zhuǎn)染組骨肉瘤MG63細(xì)胞中RIPK4MRNA的轉(zhuǎn)錄水平及蛋白的表達(dá)水平明顯低于陰性對(duì)照組（CONTROLSIRNA組）及空白對(duì)照組（未加任何試劑的MG63細(xì)胞）（P＜005）；CCK8檢測(cè)骨肉瘤MG63細(xì)胞RIPK4SIRNA轉(zhuǎn)染組較陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組增殖能力明顯受到抑制（P＜005）；RIPK4SIRNA轉(zhuǎn)染組骨肉瘤MG63細(xì)胞中ΒCATENINMRNA及CYCLIND1MRNA及其蛋白的表達(dá)水平下調(diào)（P＜005）；流式細(xì)胞儀檢測(cè)骨肉瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)染組較CONTROLSIRNA組及空白對(duì)照組細(xì)胞凋亡率明顯增加（P＜005）；RIPK4SIRNA轉(zhuǎn)染組骨肉瘤MG63細(xì)胞中BCL2MRNA及其蛋白表達(dá)量下降（P＜005），BECLIN1及LC3MRNA及其蛋白的表達(dá)水平上升（P＜005）。結(jié)論結(jié)論①RIPK4蛋白及其MRNA在骨肉瘤組織及骨肉瘤細(xì)胞中異常表達(dá)，RIPK4基因可能參與骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。②沉默RIPK4基因的表達(dá)可以抑制人骨肉瘤MG63細(xì)胞的增殖，這一作用可能與抑制WNT/ΒCATENIN信號(hào)通路有關(guān)。③沉默RIPK4基因可以促進(jìn)骨肉瘤MG63細(xì)胞的凋亡和自噬，且兩者之間

簡(jiǎn)介：分類號(hào)R7359密級(jí)公開(kāi)UDC61636編號(hào)2013213718廣州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文尿路上皮癌胚抗原尿路上皮癌胚抗原1UCA1對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞生物學(xué)功能影響的實(shí)驗(yàn)研究生物學(xué)功能影響的實(shí)驗(yàn)研究研究生楊勇濤研究生楊勇濤導(dǎo)師楊宏宇師楊宏宇教授教授研究生楊勇濤研究生楊勇濤導(dǎo)師楊宏宇導(dǎo)師楊宏宇教授教授申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別醫(yī)學(xué)碩士申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別醫(yī)學(xué)碩士學(xué)科專業(yè)口腔頜面外科學(xué)學(xué)科專業(yè)口腔頜面外科學(xué)論文提交日期二零一六年五月論文提交日期二零一六年五月學(xué)位類型醫(yī)學(xué)臨床學(xué)位學(xué)位類型醫(yī)學(xué)臨床學(xué)位年級(jí)二零一三級(jí)年級(jí)二零一三級(jí)研究方向口腔癌研究方向口腔癌論文答辯日期二零一六年五月論文答辯日期二零一六年五月學(xué)位授予單位廣州醫(yī)科大學(xué)學(xué)位授予單位廣州醫(yī)科大學(xué)答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)主席周健教授教授評(píng)議人張國(guó)志教授評(píng)議人張國(guó)志教授張芳婷教授張芳婷教授二零一六二零一六年五月學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。文中依法引用他人的成果、對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中做出明確標(biāo)注或得到許可。論文內(nèi)容未包含法律意義上已屬于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他學(xué)位申請(qǐng)的論文或成果。本人如違反上述聲明，愿意承擔(dān)以下責(zé)任和后果1．交回學(xué)校授予的學(xué)位證書(shū)；2．學(xué)?？稍谙嚓P(guān)媒體上對(duì)作者本人的行為進(jìn)行通報(bào)；3．本人按照學(xué)校規(guī)定的方式，對(duì)因不當(dāng)取得學(xué)位給學(xué)校造成的名譽(yù)損害，進(jìn)行公開(kāi)道歉。4．本人負(fù)責(zé)因論文成果不實(shí)產(chǎn)生的法律糾紛。論文作者簽名日期年月日學(xué)位論文知識(shí)產(chǎn)權(quán)權(quán)屬聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下所完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬?gòu)V州醫(yī)學(xué)院及附屬單位。廣州醫(yī)科大學(xué)及附屬單位享有以任何方式發(fā)表、復(fù)制、公開(kāi)閱覽、借閱以及申請(qǐng)專利等權(quán)利。本人離校后發(fā)表或使用學(xué)位論文或與該論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí)，署名單位仍然為廣州醫(yī)學(xué)院及附屬單位。任何其他收存和保管本論文的單位和個(gè)人，未經(jīng)本論文作者、導(dǎo)師授權(quán)，不得將本論文轉(zhuǎn)借他人、復(fù)制、抄錄或以其他任何方式傳播，否則，引起有礙作者的著作權(quán)益問(wèn)題，將會(huì)追究相應(yīng)的法律責(zé)任。論文作者簽名日期年月日導(dǎo)師簽名日期年月日