高劑量吉非替尼脈沖式給藥克服人肺腺癌細(xì)胞PC9-GR的體外觀察研究.pdf

1、目的：
　　目前，在最新腫瘤發(fā)病率、致死率統(tǒng)計(jì)排名中肺癌居于首位，其中80-85％為非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）。表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKIs)為非小細(xì)胞肺癌EGFR+患者經(jīng)典用藥，但臨床療效卻因藥物繼發(fā)性耐藥而被限制。近年來(lái)相關(guān)臨床實(shí)驗(yàn)證明EGFR-TKIs耐藥后二次使用EGFR-TKIs藥物可以提高患者疾病反應(yīng)率、延緩疾病進(jìn)展、延長(zhǎng)生存期。本體外研究實(shí)驗(yàn)通過(guò)探討高劑量吉非替尼脈沖式給藥對(duì)人NSCLC吉非替

2、尼耐藥細(xì)胞PC9/GR的抗腫瘤效應(yīng)，探索相關(guān)作用機(jī)制，為臨床治療提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　MTT法檢測(cè)吉非替尼對(duì)PC9/GR細(xì)胞的增值抑制率，通過(guò)各組OD值計(jì)算半數(shù)抑制濃度（half inhibitory concentration，IC50）。根據(jù)IC50值，將實(shí)驗(yàn)分組如下：空白對(duì)照組、吉非替尼IC50值常規(guī)藥物溶度組、吉非替尼2IC50值藥物溶度脈沖式給藥組、吉非替尼4IC50值藥物溶度高劑量脈沖式組。各組經(jīng)吉非替

3、尼不同方法處理后，在熒光顯微鏡下觀察PC9/GR細(xì)胞凋亡形態(tài)變化；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各處理組細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞周期；Western Blot檢測(cè) EGFR通路相關(guān)蛋白，如EGFR/p-EGFR、ERK/p-ERK、AKT/p-AKT蛋白表達(dá)水平變化。
　　結(jié)果：
　　MTT法檢測(cè)吉非替尼對(duì)PC9/GR的IC50為（5.44±0.91）μmol/L，呈劑量依賴(lài)性規(guī)律。根據(jù) IC50將實(shí)驗(yàn)分組為：空白對(duì)照組、吉非替尼 IC50值常規(guī)藥

4、物溶度組、吉非替尼2IC50值藥物溶度脈沖式給藥組、吉非替尼4IC50值藥物溶度高劑量脈沖式組，即是對(duì)照組、5μmol/L、10μmol/L以及20μmol/L組。經(jīng)過(guò)吉非替尼不同處理方法后，在顯微鏡下觀察到20μmol/L處理組較對(duì)照組、5μmol/L組、10μmol/L組晚期凋亡細(xì)胞明顯增多，伴隨細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則如核固縮、核碎裂。同時(shí)流式細(xì)胞儀檢測(cè)20μmol/L組細(xì)胞凋亡率明顯高于對(duì)照組、5μmol/L組、10μmol/L組，差異具

5、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。細(xì)胞周期顯示20μmol/L組較空白組及其他吉非替尼劑量處理組，G0/G1期細(xì)胞比例明顯增加，伴隨 S期細(xì)胞比例減少。在蛋白質(zhì)印跡法中，發(fā)現(xiàn)高劑量吉非替尼脈沖式給藥可明顯抑制PI3K-AKT、MEK-ERK信號(hào)通路，下調(diào)p-EGFR、p-AKT、p-ERK蛋白表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　本體外研究結(jié)果顯示高劑量吉非替尼脈沖式給藥在一定程度上可以通過(guò)抑制EGFR信號(hào)通路，在一定程度上克服TKI耐藥。推