流體剪切力通過Gαq-ERK5信號通路促進MC3T3-E1細胞增殖.pdf

1、目的：骨骼系統(tǒng)中存在的流體剪切力能夠強有力地促進成骨細胞增殖。我們之前報道過Extracellular signal-regulated kinase5(ERK5)在流體剪切力誘導(dǎo)的成骨細胞增殖中發(fā)揮重要作用。然而流體剪切力通過激活ERK5信號通路促進成骨細胞增殖的具體機制的報道還很匱乏。本篇實驗的目的是為了研究Gαq在流體剪切力誘導(dǎo)的ERK5激活和成骨細胞增殖中發(fā)揮的作用和Gαq-ERK5信號通路的下游靶點。
　　方法：成骨MC

2、3T3-E1細胞給予轉(zhuǎn)染50 nM Gαq siRNA，孵育5μM XMD8-92（一種高選擇性ERK5活性抑制劑），和/或加載12 dyn/cm2流體剪切力處理，采用 MTT實驗檢測成骨細胞的增殖活性，采用蛋白免疫印記實驗檢測 Gαq、P-ERK5、ERK5、Cyclin B1和CDK1蛋白的表達水平。
　　結(jié)果：生理強度的流體剪切力作用于成骨MC3T3-E1細胞60 min后能顯著促進成骨細胞增殖。但是，成骨細胞轉(zhuǎn)染 Gαq

3、siRNA敲除 Gαq基因或孵育XMD8-92抑制ERK5活性后，流體剪切力誘導(dǎo)的成骨細胞增殖活性明顯降低。說明流體剪切力誘導(dǎo)的成骨細胞增殖受到Gαq和ERK5信號通路的調(diào)控。而且成骨細胞轉(zhuǎn)染Gαq siRNA后，ERK5活性明顯下降。此外，流體剪切力可顯著上調(diào)成骨細胞中Cyclin B1和CDK1表達水平，而此生理效應(yīng)可被Gαq siRNA或XMD8-92顯著抑制。
　　結(jié)論：流體剪切力通過Gαq-ERK5信號通路上調(diào)Cycli