窄帶成像聯(lián)合放大內(nèi)鏡對早期胃癌篩查的診斷價值和早期胃癌LncRNA表達(dá)譜分析及其生物學(xué)功能探索.pdf

1、胃癌是最常見的消化道惡性腫瘤，位居腫瘤死因的第二位。我國胃癌的發(fā)病率僅次于日本，每年病死人數(shù)約30萬例。早期發(fā)現(xiàn)病變并進行相應(yīng)治療，可以顯著改善胃癌患者的5年生存率。然而早期胃癌病灶往往較小，缺乏明顯的臨床癥狀，診斷率較低。內(nèi)鏡檢查是有效篩查早期胃癌的手段之一，放大內(nèi)鏡結(jié)合窄帶成像技術(shù)的運用可以明顯提高早期胃癌的診斷率，具有重要意義。此外，尋找早期胃癌相關(guān)的診斷標(biāo)志物，并針對早期胃癌癌變機制進行進一步研究，有助于在胃癌發(fā)生早期對其進行識

2、別，具有重要的臨床意義。許多研究表明，LncRNA在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著多種不同的作用，有希望成為腫瘤新型標(biāo)志物，在腫瘤的診斷、治療等方面具有良好應(yīng)用前景。本課題分為兩個部分，第一部分為窄帶成像聯(lián)合放大內(nèi)鏡對早期胃癌篩查診斷價值的研究，第二部分為早期胃癌LncRNA表達(dá)譜分析和生物學(xué)功能探索。
　　第一部分 窄帶成像聯(lián)合放大內(nèi)鏡對早期胃癌篩查診斷價值的研究
　　目的:通過對比分析普通白光內(nèi)鏡(white light

3、endoscopy，WLE)、放大內(nèi)鏡（magnifying endoscopy，ME）和窄帶成像聯(lián)合放大內(nèi)鏡（narrow-band imagingenhanced magnifying endoscopy，ME-NBI）對早期胃癌診斷的準(zhǔn)確性，評價放大內(nèi)鏡及窄帶成像技術(shù)的臨床應(yīng)用價值。
　　方法:納入2010年3月至2012年6月在四家醫(yī)療中心進行WLE篩查的3616例患者（包含3675處局灶性胃粘膜病變），進一步接受ME及M

4、E-NBI檢查，評估病變粘膜的微血管形態(tài)和微腺管形態(tài)，以VS診斷標(biāo)準(zhǔn)作為內(nèi)鏡下癌性病變的診斷標(biāo)準(zhǔn)，以活檢組織的病理診斷為金標(biāo)準(zhǔn)，評價WLE、ME和ME-NBI對早期胃癌診斷的準(zhǔn)確性。
　　結(jié)果:3616例患者的3675處胃粘膜病變中，組織病理診斷證實慢性胃炎1508處，慢性胃炎伴腸上皮化生1279處，低級別上皮內(nèi)瘤變631處，早期胃癌257處。WLE診斷早期胃癌的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值和準(zhǔn)確率分別為71.2％、99

5、.1％、85.5％、97.9％、97.1％，ME診斷的對應(yīng)值分別為81.3％、98.8％、83.3％、98.6％、97.6％，ME-NBI診斷的對應(yīng)值分別為87.2％、98.6％、82.1％、99.0％、97.8％。與WLE相比，ME和ME-NBI對早期胃癌診斷的靈敏度和準(zhǔn)確率均明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:WLE對早期胃癌的診斷具有較高準(zhǔn)確率，仍可作為早期胃癌篩查的首選方法，而對WLE發(fā)現(xiàn)的可疑局灶性

6、病變，進一步行ME及ME-NBI篩查可以顯著提高診斷的準(zhǔn)確性。
　　第二部分 早期胃癌LncRNA表達(dá)譜分析及其生物學(xué)功能探索
　　目的:通過分析早期胃癌患者病變組織和其相應(yīng)癌旁慢性非萎縮性胃炎組織的LncRNA表達(dá)譜特征，尋找其生物學(xué)聯(lián)系和差異，篩選胃早期癌變可能起關(guān)鍵作用的LncRNA，研究該關(guān)鍵LncRNA表達(dá)水平改變對胃癌細(xì)胞增殖、遷移的影響，探索其生物學(xué)功能。
　　方法:采用Agilent8×60k基因芯片平

7、臺，分析比較6例早期胃癌(early gastriccancer，EGC)患者病變組織及其相應(yīng)癌旁慢性非萎縮性胃炎組織樣品的LncRNA表達(dá)譜，通過生物信息學(xué)分析，獲得差異表達(dá)LncRNA，分別為LOC389332、LOC400043、LINC00982。針對有差異的上述3條LncRNA，以及文獻(xiàn)報道在胃癌組織中表達(dá)存在差異的1條LncRNA(UCA1)，通過實時定量PCR(quantitativereverse-transcripti

8、on PCR，qRT-PCR)在獨立的28例LGIN、30例HGIN、18例EGC、19例AGC和30例慢性胃炎患者的組織樣品中進行表達(dá)水平驗證。為進一步探索在早期胃癌病變組織中表達(dá)顯著升高的LOC389332、UCA1的生物學(xué)功能，本研究在HGC27、AGS這兩株胃癌細(xì)胞系和GES-1永生化正常胃粘膜上皮細(xì)胞中進行qRT-PCR表達(dá)水平驗證，并通過RNA干擾技術(shù)(RNA interference，RNAi)構(gòu)建LOC389332、UC

9、A1沉默表達(dá)的HGC27、AGS胃癌細(xì)胞系模型，進行體外細(xì)胞增殖、遷移等功能試驗。同時采用Agilent8×60k基因芯片平臺，針對LOC389332、UCA1沉默表達(dá)的HGC-27胃癌細(xì)胞系模型，進行基因表達(dá)譜分析，初探上述LncRNA發(fā)揮作用的機制。
　　結(jié)果:通過基因芯片分析發(fā)現(xiàn)，早期胃癌病變組織與癌旁慢性非萎縮性胃炎組織表達(dá)譜比較，共有差異mRNA基因577個，差異LncRNA基因72個，差異mRNA基因GO富集主要與細(xì)胞

10、膜功能、細(xì)胞信號傳導(dǎo)、細(xì)胞粘附等過程有關(guān)。與慢性非萎縮性胃炎組織相比，早期胃癌病變組織LOC389332相對含量顯著升高(P=0.0183)，LOC400043、LINC00982相對含量顯著降低(P分別為0.0489和0.0051)。在獨立樣本驗證階段，LGIN、HGIN、EGC、AGC患者組織LOC389332、UCA1表達(dá)水平顯著高于慢性胃炎患者(P＜0.001)，而LOC400043、LINC00982表達(dá)水平顯著低于慢性胃炎患

11、者(P＜0.001)。在胃癌細(xì)胞系HGC-27、AGS中，LOC389332、UCA1的表達(dá)水平高于GES-1。通過體外功能試驗發(fā)現(xiàn)，LOC389332、UCA1沉默表達(dá)可抑制HGC-27的增殖和遷移，提示LOC389332、UCA1是胃癌中潛在致癌的LncRNA。針對LOC389332、UCA1沉默表達(dá)的HGC-27胃癌細(xì)胞系模型進行的基因表達(dá)譜分析發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，LOC389332和UCA1沉默表達(dá)的胃癌細(xì)胞分別篩選出表達(dá)393

12、個和423個表達(dá)改變的mRNA基因。GO富集結(jié)果顯示，其中表達(dá)下調(diào)的基因主要參與細(xì)胞膜功能、信號傳導(dǎo)、細(xì)胞粘附等過程，表達(dá)上調(diào)的基因未富集出明顯集中的功能群。
　　結(jié)論:早期胃癌患者病變組織與癌旁慢性非萎縮性胃炎組織LncRNA表達(dá)譜差異顯著;LOC389332、UCA1是胃癌中潛在的非編碼致癌基因，其沉默表達(dá)可抑制胃癌細(xì)胞的增殖和遷移能力;LOC389332和UCA1可能通過改變細(xì)胞膜功能、信號傳導(dǎo)及細(xì)胞粘附能力發(fā)揮致癌作用，但