耐熱木聚糖酶的體外分子進化及其生物信息學分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、木聚糖酶(E.C3.2.1.8)是一類以內切方式降解木聚糖分子中β-1,4-木糖苷鍵的酶系。它對自然界中大量存在的半纖維素起著重要的作用,該酶廣泛應用于造紙、食品、飼料添加等方面。其中耐熱木聚糖酶由于其耐熱性好,被廣泛運用于工業(yè)生產特別是造紙工業(yè),因此已受到廣泛的關注。 本研究以高產木聚糖酶的黑曲霉C3486(Aspergillus niger C3486)的基因組為模板,通過PCR擴增出木聚糖酶的特異性條帶,連接到原核表達載

2、體pET32a(+),轉化E.coli BL21(DE3),IPTG誘導表達后得到目的蛋白,純化后所得蛋白Xyn-1不具有木聚糖酶活性。而后將木聚糖酶基因連接到真核表達載體pPIC9K,轉化至畢赤酵母Pichia pastoris GS115中,純化所得的木聚糖酶Xyn-2具有一定的酶活性。 然后再以Aspergillus niger C3486總RNA為摸板,進行RT-PCR后,重新轉化至大腸桿菌中,所得的木聚糖酶Xyn-3

3、也具有一定的酶活性。通過木聚糖酶DNA與cDNA的序列比對,發(fā)現(xiàn)該酶的的基因組中且一個大小約為50 bp的內含子。 通過生物信息學分析表明,該酶含有187個氨基酸,具有信號肽。并且具有典型的木聚糖酶保守區(qū)域,利用在線預測該酶進行三級結的預測,結果表明該酶是一個以β-折疊為主為的蛋白酶,形成一個緊密的球狀蛋白。 通過Error PCR和DNA Shuffling體外分子進化技術,將來自于黑曲霉與里氏木霉的木聚糖酶基因進

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