韭菜精細胞、卵細胞及原胚細胞的分離.pdf

1、被子植物的精卵細胞都位于體內(nèi)，其中精細胞包裹在花粉粒中，卵細胞又深埋在胚珠中，且整個受精過程到早期的胚胎發(fā)生也都在體內(nèi)完成，其中包括精卵細胞的識別、合子的不對稱分裂及胚胎發(fā)生模式等。精細胞和卵細胞的成功分離，為受精機理的研究提供了基本前提。本研究成功分離得到了具有生活力的精、卵細胞、合子及早期原胚細胞，為進一步的研究韭菜雌雄配子體的分子生物學特性及受精機理等提供了條件。主要內(nèi)容如下： ⑴韭菜生殖細胞、精細胞的分離：韭菜的花粉屬于

2、二胞型，即成熟的花粉粒中只含有一個生殖細胞，只有在花粉管中才會發(fā)生有絲分裂形成兩個精細胞。本實驗首先采用直接爆破花粉粒的方法分離得到具生活力的生殖細胞，并收集得到了生殖細胞的群體；嘗試完全離體萌發(fā)花粉管及活體-離體法，成功分離得到了具生活力的精細胞，并收集得到了群體。為迸一步的研究韭菜的精細胞發(fā)生及其他分子生物學特性提供了實驗基礎。 ⑵韭菜卵細胞、合子及早期原胚細胞的分離：根據(jù)韭菜的開花及受精規(guī)律，成功的分離得到了卵細胞，并且還

3、觀察了從開花當天到開花第三天整個卵器細胞的發(fā)育規(guī)律，發(fā)現(xiàn)整個過程中，兩個助細胞的體積都逐漸變大，但細胞的極性并沒有發(fā)生明顯的變化；卵細胞也逐漸變大，細胞核較大位于細胞的一邊，另一邊有一個大的液泡，且細胞中存在著明顯的細胞質(zhì)索，經(jīng)FDA染色后熒光也多集中在細胞核部位；受精后，卵細胞變化成為合子，體積明顯變小，細胞質(zhì)明顯變濃厚，細胞核不再明顯，大液泡消失，經(jīng)FDA染色后，熒光彌散于整個細胞表面；最后還成功收集得到了卵細胞及合子的細胞群體，為