益氣養(yǎng)陰，清利濕熱方對IgA腎病大鼠激肽釋放酶1及緩激肽表達的影響.pdf

1、目的:IgA腎病(IgAnephropathy，IgAN)又稱為Berger病，是指以IgA或者以IgA為主的免疫復合物沉積于腎小球的系膜區(qū)以及毛細血管袢，以反復發(fā)生的肉眼血尿伴有或不伴有鏡下血尿為其主要臨床特征的原發(fā)性腎小球疾病，是導致終末期腎衰竭的最主要的原因之一。至今為止，由于對IgAN的發(fā)病機制還沒有完全清楚，因此目前西醫(yī)尚無特殊有效的治療方法。中醫(yī)在治療IgAN方面具有一定優(yōu)勢。導師郭登洲教授[1-3］及多位學者[4-5］，結

2、合中醫(yī)理論，通過對IgAN患者的臨床研究指出，中藥能改善IgAN患者的臨床癥狀及實驗室指標，在IgAN的治療方面具有一定的作用，并取得了較為滿意的臨床療效。因此設計該實驗，其目的在于探討益氣養(yǎng)陰，清利濕熱方對IgAN大鼠激肽釋放酶1(kallikrein1，KLK1)及緩激肽(bradykinin，BK)表達的影響，探尋其可能的作用機制。
　　方法:將40只體重在140～160g左右的Sprague-Dauley(SD)大鼠，在溫

3、度:20℃～24℃，相對濕度:40％-60％的環(huán)境中，適應性飼養(yǎng)7天，第7天末檢測尿蛋白陰性、潛血陰性者，依據體重隨機分為4組，即正常組、中藥組、貝那普利組和模型組，每組各10只。運用牛血清白蛋白(BSA)+脂多糖(LPS)+四氯化碳(CCl4)的方法進行IgAN模型的復制[6]，具體方案如下:BSA400mg/kg隔天灌胃，持續(xù)6周;蓖麻油0.5mL+CCl40.10mL，皮下注射，每周1次，持續(xù)9周;LPS0.05mg尾靜脈注射，分

4、別于第6，8周末。正常組大鼠予蒸餾水灌胃，以4ml/kg計算，隔日1次，持續(xù)6周;皮下注射生理鹽水0.6ml，每周1次，持續(xù)9周;于第6、8周末0.2ml生理鹽水尾靜脈注射。模型復制成功后，中藥組予益氣養(yǎng)陰，清利濕熱中藥灌胃，貝那普利組予鹽酸貝那普利混懸液灌胃，模型組、正常組予等量蒸餾水灌胃，每日1次，共8周。分別于造模前、第7周末、第9周末、第13周末、第17周末檢測24h尿蛋白定量。第18周末將大鼠禁食水12h，稱重，按照3.50m

5、l/kg用量將10％水合氯醛注入腹腔，進行麻醉，于腹主動脈取血，測定血清肌酐(Scr)和尿素氮（BUN）的水平。留取腎臟標本，行HE、Masson、PAS、PASM染色，免疫熒光法檢測IgA免疫復合物在大鼠腎臟的沉積情況，逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)檢測大鼠KLK1和BK的表達情況，免疫組化法測定KLK1的表達情況。
　　結果:
　　124小時尿蛋白定量:與正常組相比較，中藥組、貝那普利組、模型組大鼠的24小時尿蛋白

6、定量明顯升高(P＜0.05)，與中藥組、貝那普利組相比較，模型組大鼠的24小時尿蛋白定量明顯升高(P＜0.05)，中藥組、貝那普利組大鼠的24小時尿蛋白定量無明顯差異(P＞0.05)。
　　2血清Scr、BUN:正常組、中藥組、貝那普利組、模型組四組大鼠的血清Scr、BUN各組間比較無明顯差異（P＞0.05）。
　　3光鏡下觀察，正常組腎小球結構完整，系膜及基質未見明顯異常改變;模型組觀察到系膜細胞增生、系膜基質增多;中藥組

7、與貝那普利組大鼠系膜細胞輕度增生和系膜基質增多，相對于模型組，病變減輕。
　　4 IgA免疫熒光:正常組大鼠沒有觀察到腎小球系膜區(qū)免疫復合物沉積，在模型組觀察到有熒光綠色免疫復合物沉積，貝那普利組、中藥組兩組大鼠也有不同程度的免疫復合物沉積，與模型組相比較，程度較輕。
　　5 KLK1在腎臟的表達情況:與正常組相比較，中藥組、貝那普利組、模型組大鼠的KLK1表達明顯增多(P＜0.05)，與模型組相比較，中藥組、貝那普利組大鼠

8、的KLK1表達明顯增多(P＜0.05)，中藥組、貝那普利組大鼠的KLK1表達無明顯差異(P＞0.05)。
　　6 BK在腎臟的表達情況:與正常組相比較，中藥組、貝那普利組、模型組大鼠的BK表達明顯增多(P＜0.05)，與模型組相比較，中藥組、貝那普利組大鼠的BK表達明顯增多(P＜0.05)，中藥組、貝那普利組大鼠的BK表達無明顯差異(P＞0.05)。
　　結論:
　　1 BSA+LPS+CCl4可以成功誘導大鼠IgAN