去泛素化酶UCH-L1和UCH-L5與急性髓細(xì)胞白血病關(guān)系的研究.pdf

1、目的:泛素蛋白酶體系統(tǒng)(ubiquitin-proteasome system，UPS)是除自噬以外的另一種存在于真核生物的重要的蛋白降解方式，它可以通過降解泛素蛋白來維持細(xì)胞的穩(wěn)定。去泛素羧基末端水解酶(UCH，ubiquitin carboxyterminalhydrolases)是UPS家族中的一員，近些年來有研究證實(shí)，UCH與某些腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)UCH-L3在急性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞HL-60自噬性死亡中

2、表達(dá)上調(diào)，并且在急性髓細(xì)胞白血病患者外周血中表達(dá)明顯下調(diào)，為了更全面的探討UCH與AML的關(guān)系，我們進(jìn)一步研究了UCH-L1與UCH-L5與白血病細(xì)胞自噬性死亡之間的關(guān)系，以及UCH-L1與UCH-L5在白血病發(fā)生發(fā)展及治療中的作用，從而深入探討泛素蛋白酶體系統(tǒng)與自噬在白血病的發(fā)生發(fā)展中的作用，為白血病的治療監(jiān)測指明一個(gè)新方向。
　　方法:1.自噬誘導(dǎo)劑雷帕霉素和自噬抑制劑3-MA分別處理HL-60細(xì)胞后，RT-PCR檢測UCH-

3、L1、UCH-L5、LC3Ⅱ三者mRNA的表達(dá)變化。2.Western-blot檢測雷帕霉素和3-MA處理后UCH-L1、UCH-L5、LC3Ⅱ蛋白的表達(dá)水平。3.急性白血病化療藥物阿糖胞苷處理HL-60細(xì)胞后，RT-PCR檢測UCH-L1、UCH-L5、LC3Ⅱ三者mRNA的表達(dá)變化。4.提取急性髓白血病患者外周血單個(gè)核細(xì)胞，RT-PCR檢測初發(fā)組和緩解組UCH-L1、UCH-L5 mRNA的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:1.雷帕霉素處

4、理HL-60細(xì)胞后，RT-PCR檢測LC3Ⅱ在基因水平表達(dá)上調(diào)，UCH-L1和UCH-L5表達(dá)下調(diào);3-MA處理HL-60細(xì)胞后，UCH-L1和UCH-L5表達(dá)上調(diào)，LC3Ⅱ下調(diào)。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　2.雷帕霉素處理HL-60細(xì)胞后，LC3Ⅱ在蛋白水平表達(dá)上調(diào)，UCH-L1和UCH-L5蛋白表達(dá)下調(diào)，3-MA處理HL-60細(xì)胞后，UCH-L1和UCH-L5蛋白表達(dá)上調(diào)，LC3Ⅱ表達(dá)下調(diào)。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0

5、.05)。
　　3.可糖胞苷處理HL-60細(xì)胞后UCH-L1和LC3Ⅱ表達(dá)上調(diào)，UCH-L5表達(dá)下調(diào)。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　4.外周血基因水平檢測顯示，急性髓白血病初發(fā)組UCH-L1的表達(dá)和對(duì)照組相比下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，緩解組和對(duì)照組、緩解組和初發(fā)組相比UCH-L1的表達(dá)上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。初發(fā)組UCH-L5的表達(dá)和對(duì)照組相比表達(dá)下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)

6、;緩解組UCH-L5的表達(dá)和對(duì)照組相比表達(dá)下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);緩解組UCH-L5的表達(dá)和初發(fā)組相比表達(dá)上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　結(jié)論:1.誘導(dǎo)急性髓白血病細(xì)胞HL-60自噬后，UCH-L1和UCH-L5在基因與蛋白水平均發(fā)生表達(dá)變化，說明二者可能參與雷帕霉素誘導(dǎo)的急性髓白血病細(xì)胞的自噬發(fā)生過程。
　　2.可糖胞苷處理HL-60細(xì)胞后LC3Ⅱ的表達(dá)上調(diào)，說明自噬參與了阿糖胞苷誘導(dǎo)急性髓細(xì)