LXRs活化轉(zhuǎn)錄后調(diào)控THP-1巨噬細(xì)胞炎性細(xì)胞因子mRNA降解及其機(jī)制.pdf

1、肝X受體（LiverXReceptors，LXRs）具有廣譜抗炎特性，然而LXRs是否在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控炎性細(xì)胞因子表達(dá)尚未闡明。mRNA降解調(diào)控是轉(zhuǎn)錄后調(diào)控基因表達(dá)的重要方式之一，AREs(AU-richelements)介導(dǎo)的mRNA降解是炎性細(xì)胞因子mRNA代謝的一個(gè)共有方式。Tristetraprolin(TTP)作為一種典型的ARE結(jié)合蛋白，參與調(diào)控多種細(xì)胞因子mRNA降解。為闡明LXRs是否通過調(diào)控炎性細(xì)胞因子mRNA降解發(fā)揮

2、抗炎特性，本研究通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)探討LXRs在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因表達(dá)的作用及機(jī)制。
　　方法：佛波酯誘導(dǎo)THP-1單核細(xì)胞分化為巨噬細(xì)胞，LXRs激動(dòng)劑T0901317(10μM)預(yù)處理THP-1巨噬細(xì)胞6h后，予以脂多糖(10ng/mL)刺激6h，利用ELISA、PCR、WesternBlot等技術(shù)檢測TNF-α、IL-6、IL-1β和TTPmRNA及蛋白表達(dá)水平。不同因素處理組的THP-1巨噬細(xì)胞加入5ug/mL放線菌素D(A

3、ctinomycinD,ActD)終止轉(zhuǎn)錄，阻斷轉(zhuǎn)錄后的不同時(shí)間點(diǎn)提取RNA，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)不同時(shí)間段TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA的表達(dá)水平，以阻斷轉(zhuǎn)錄初始mRNA為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算mRNA殘留比例。通過小分子siRNA技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染18h后，Westernblot、ELISA檢測TTPsiRNA沉默TTP表達(dá)效果和炎性細(xì)胞因子表達(dá)影響，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測不同處理因素組炎性細(xì)胞因子mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果

4、：T0901317預(yù)處理顯著抑制脂多糖誘導(dǎo)的THP-1巨噬細(xì)胞IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA及蛋白表達(dá)，且T0901317預(yù)處理顯著上調(diào)LPS誘導(dǎo)的THP-1巨噬細(xì)胞TTP表達(dá)。放線菌素D阻斷轉(zhuǎn)錄后60，90，120min時(shí)間點(diǎn)，T0901317預(yù)處理的THP-1巨噬細(xì)胞顯著抑制LPS誘導(dǎo)的TNF-α，IL-6，IL-1βmRNA表達(dá)水平，殘留比例顯著低于單純LPS處理組，說明T0901317預(yù)處理促使LPS誘導(dǎo)的TNF-α，

5、IL-6，IL-1βmRNA降解。TTPsiRNA轉(zhuǎn)染的THP-1巨噬細(xì)胞顯著下調(diào)TTP的表達(dá)，并明顯抑制T0901317下調(diào)炎性細(xì)胞因子表達(dá)和促進(jìn)炎性細(xì)胞因子mRNA降解的作用。
　　結(jié)論：1.LXRs活化轉(zhuǎn)錄后調(diào)控THP-1巨噬細(xì)胞炎性細(xì)胞因子mRNA降解。2.LXRs通過TTP促使LPS誘導(dǎo)的THP-1巨噬細(xì)胞炎性細(xì)胞因子mRNA降解。本研究明確了LXRs轉(zhuǎn)錄后調(diào)控炎癥反應(yīng)的新型分子機(jī)制，為多靶點(diǎn)廣譜抗炎治療全身炎癥反應(yīng)綜合