羊B淋巴細胞增殖誘導配體(goat APRIL)的克隆、表達及其生物學功能的研究.pdf_第1頁
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1、增殖誘導配體(APRIL)是TNF家族的新成員,在免疫調節(jié)中起著重要作用。本實驗通過同源克隆,從羊脾臟組織細胞中擴增得753bp羊的增殖誘導配體基因(簡稱gAPRIL)。羊APRIL的可溶性部分與人APRIL的可溶性部分在蛋白一級結構上有83.20％的相似性。羊APRIL的分子質量為27.87 kDa,預測的等電點為9.54,羊APRIL的可溶性部分的分子質量為16.54,預測的等電點為9.23。gAPRIL的開放讀碼框由250個氨基酸

2、組成。Real-time PCR結果顯示,gAPRIL在免疫器官中表達量較高。用BL21(DE3)高效表達了NusA融合的gsAPRIL蛋白(NusA-His-gsAPRIL),并用SDS-PAGE和蛋白質印跡法檢測其表達。在體外,通過MTT證明該蛋白在anti-IgM存在下對羊脾臟B細胞具有共刺激作用,流式細胞術也證明羊APRIL可以促進羊B細胞的存活。通過激光共聚焦,我們觀察到在體外羊可溶性APRIL可以結合于羊脾臟B細胞。有生物活

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