DADLE通過激活Nrf2-HO-1途徑改善小鼠肝臟缺血再灌注損傷.pdf

1、目的：
　　肝臟缺血再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)損傷是臨床常見的病理生理過程，能夠引起肝臟的急性損傷，嚴(yán)重的可導(dǎo)致肝功能衰竭。大量研究表明，DADLE作為特異性delta阿片受體(delta opioid receptor, DOR)激動劑在腦、心臟和腎臟的缺血再灌注損傷中都具有一定的保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)旨在探討DADLE對小鼠肝臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其作用機(jī)制，為臨床預(yù)防肝臟缺血再灌注損傷提供新策

2、略。
　　方法：
　　48只小鼠在70％肝臟缺血45 min后，在肝臟再灌注不同時間點(diǎn)（0 h、1h、2h、4h、6h、8h、12h、24h）分別處死6只小鼠，測定小鼠肝臟缺血再灌注后不同時間點(diǎn)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)的變化。30只小鼠在70%肝臟缺血前15 min腹腔注射不同濃度的DADLE（1 m

3、g/kg、3 mg/kg、5 mg/kg、7 mg/kg、10 mg/kg）溶液，每組6只，缺血45 min后，根據(jù)前期實(shí)驗(yàn)在再灌注同一時間點(diǎn)處死小鼠，觀察不同濃度DADLE對血清ALT和AST的影響。將24只C57BL/6小鼠隨機(jī)分成4組：正常組（Sham組）、缺血再灌注組（I/R組）、DADLE激動劑組（DADLE組）和納洛酮拮抗組（N/D組）。全自動生化檢測儀檢測各組血清ALT和AST水平。HE染色觀察肝臟組織的形態(tài)變化。通過酶活

4、法和分光光度法檢測SOD、MDA、GSH和CAT水平變化分析肝臟的氧化水平。RT-PCR檢測核因子E2相關(guān)因子2（NF-E2-related factor-2，Nrf2）下游通路HO-1mRNA的表達(dá)水平。Werstern Blot檢測Nrf2及其下游通路蛋白HO-1的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　?。?）我們分別在缺血再灌注不同時間點(diǎn)（0h、1h、2h、4h、6h、8 h、12 h、24 h）檢測血清ALT和AST的表達(dá)水平。結(jié)果

5、顯示，血清轉(zhuǎn)氨酶在缺血再灌注6小時達(dá)到最高水平。
　?。?）我們又分別檢測不同濃度的DADLE（1mg/kg、3mg/kg、5mg/kg、7mg/kg、10mg/kg）對血清ALT和AST水平的影響。結(jié)果顯示，ALT和AST水平在DADLE5 mg/kg時明顯降低。
　?。?）DADLE預(yù)處理能夠降低缺血再灌注損傷中血清ALT和AST水平，并且能夠改善肝竇堵塞，肝細(xì)胞腫脹、變性、壞死和炎癥細(xì)胞浸潤。
　　（4）檢測肝組

6、織勻漿中T-SOD、GSH、CAT和MDA的水平，結(jié)果表明DADLE預(yù)處理能夠升高肝組織勻漿中T-SOD、GSH和CAT水平，降低MDA的水平。
　?。?）RT-PCR檢測肝臟中HO-1mRNA的表達(dá)，結(jié)果顯示DADLE預(yù)處理能夠升高肝臟中HO-1mRNA的表達(dá)水平。
　?。?）Western bloting檢測發(fā)現(xiàn)，DADLE預(yù)處理能夠促進(jìn)Nrf2的核轉(zhuǎn)移，并且能夠增加其下游蛋白HO-1的表達(dá)。
　　結(jié)論：