C2cd4d基因在大鼠早期發(fā)育睪丸組織中的表達.pdf

1、目的：精子發(fā)生是精原干細胞自我更新和高度分化的一系列復(fù)雜過程。此過程涉及到數(shù)以千計的基因通過程序化的表達在特定階段編碼蛋白而完成，并發(fā)揮特定功能。因此，特定基因獨特的時空表達模式在調(diào)節(jié)精原干細胞早期發(fā)育及自我更新和分化過程中起著非常關(guān)鍵的作用。本課題通過研究C2cd4d基因在大鼠早期發(fā)育睪丸組織中的表達情況，探討C2cd4d基因與精子發(fā)生可能存在的關(guān)聯(lián)。
　　方法：（1）采用石蠟切片免疫熒光組織化學(xué)方法檢測65日齡大鼠睪丸組織中C

2、2cd4d(Them5)的蛋白表達；（2）通過飼養(yǎng)2、4、6、8、10、12、14、15、16、20、25、29、30、31、35、40、45、50、55、60、65日齡的Wistar雄性大鼠。采用Real-time PCR技術(shù)檢測大鼠早期發(fā)育睪丸組織中C2cd4d基因的mRNA在不同時間點的轉(zhuǎn)錄表達。
　　結(jié)果：成功提取2-65日齡的雄性Wistar大鼠睪丸組織RNA和總蛋白。將RNA反轉(zhuǎn)成cDNA，做Real-time PCR

3、，觀察了不同時間點的C2cd4d基因的轉(zhuǎn)錄表達。在mRNA水平中，觀察C2cd4d基因在大鼠早期發(fā)育睪丸組織中的轉(zhuǎn)錄的表達情況：大鼠出生后2-65天mRNA表達模式呈波浪式變化，出生后第2天開始逐漸上升，到第6天達到相對高值，直到第8天數(shù)值變低。從第10天開始迅速線性上升，12天,16天達到最高值，然后開始逐漸下降，直到第30天下降到最低值。30天之后開始緩慢上升，上升到第55、60天達到相對高值又開始下降，第65天達到相對低值。其中6

4、、12、16、55、60日齡大鼠睪丸組織mRNA表達有顯著增加。其中12、16日齡大鼠睪丸組織mRNA表達最高。在蛋白水平中，熒光免疫組化結(jié)果顯示C2cd4d基因在大鼠早期發(fā)育睪丸組織中的所有細胞都表達，但在接近管腔的成熟精子細胞和管腔與邊緣的中間處的精母細胞表達居多。
　　結(jié)論：C2cd4d基因表達與精子發(fā)生有相關(guān)性，C2cd4d基因在大鼠早期發(fā)育睪丸組織中一直有表達，主要表達于精原干細胞的增殖，減數(shù)分裂尤其是第一次減數(shù)分裂及成