果蠅CG30427 mRNA前體3’端互斥可變剪接的調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、可變剪接是真核生物mRNA前體一種重要的加工機(jī)制，有助于調(diào)控基因表達(dá)水平及組織特異性、豐富蛋白質(zhì)種類等?；コ饪勺兗艚邮且环N重要的可變剪接形式，在之前研究的互斥可變剪接事件中，兩個或者多個選擇性外顯子的可變剪接不是單獨(dú)發(fā)生的，而是相互協(xié)同，僅有一個選擇性外顯子被選擇剪入成熟的mRNA中。然而，多個外顯子串聯(lián)成簇，作為一個整體參與互斥可變剪接的現(xiàn)象鮮有研究。
　　CG30427基因?yàn)榈鞍拙幋a基因，其編碼的蛋白具有脂酰輔酶A還原酶活性，

2、參與成體壽命確定、細(xì)胞吞噬等生化過程。黑腹果蠅CG30427基因共有2個組成型外顯子和3個可變多外顯子簇，分別含有4個、4個、5個外顯子，這3個可變多外顯子簇的剪接協(xié)同發(fā)生，最終只有一個可變多外顯子簇剪入成熟的mRNA中。
　　在該研究中，運(yùn)用生物信息學(xué)方法分析了21種果蠅的CG30427基因序列，發(fā)現(xiàn)可變多外顯子簇內(nèi)部內(nèi)含子均偏小，并且剪接信號強(qiáng)度較大。我們設(shè)計了內(nèi)含子延長實(shí)驗(yàn)和剪接信號強(qiáng)度減弱實(shí)驗(yàn)，試圖破壞多個外顯子成簇參與互

3、斥可變剪接的局面。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)可變多外顯子簇內(nèi)部內(nèi)含子發(fā)生序列延長或者剪接信號強(qiáng)度減弱后，原本多個外顯子成簇參與互斥可變剪接的局面遭到破壞，表明內(nèi)含子偏小和剪接信號強(qiáng)度較大是外顯子發(fā)生成簇剪接的影響因素。此外，我們還通過實(shí)驗(yàn)證明了可變外顯子簇內(nèi)部內(nèi)含子優(yōu)先剪接以保證外顯子成簇剪接的假想的正確性。
　　通過比較基因組學(xué)方法，在果蠅CG30427基因可變外顯子簇1和2上游分別發(fā)現(xiàn)了38bp和40bp的兩段保守序列。刪除突變實(shí)驗(yàn)結(jié)果