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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:研究長(zhǎng)鏈非編碼RNA SNHG5對(duì)食管癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響,并探討SNHG5抑制食管癌細(xì)胞發(fā)生EMT轉(zhuǎn)變的可能機(jī)制。
方法:
1、應(yīng)用qPCR法檢測(cè)食管癌組織、癌旁組織、非癌組織和食管癌細(xì)胞中SNHG5和MTA2的表達(dá),并分析SNHG5與MTA2二者表達(dá)水平的相關(guān)性,同時(shí)分析SNHG5的表達(dá)水平與食管癌患者臨床病理特征的相關(guān)性。
2、應(yīng)用MTS法、Transwell遷移和Matrigel侵
2、襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過(guò)表達(dá)/敲低SNHG5對(duì)食管癌細(xì)胞增殖活性、遷移能力和侵襲能力的影響。
3、應(yīng)用qPCR法檢測(cè)食管癌細(xì)胞經(jīng)不同放射劑量照射后SNHG5和MTA2表達(dá)水平的變化。
4、應(yīng)用qPCR法檢測(cè)食管癌細(xì)胞經(jīng)放線菌酮處理后過(guò)表達(dá)SNHG5對(duì)MTA2表達(dá)水平的影響。
5、應(yīng)用RNA-pulldown實(shí)驗(yàn)及Western blotting實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SNHG5能否與MTA2蛋白結(jié)合。
6、應(yīng)用細(xì)胞免疫熒光法
3、檢測(cè)過(guò)表達(dá)SNHG5食管癌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。
7、應(yīng)用qPCR法檢測(cè)過(guò)表達(dá)/敲低SNHG5對(duì)MTA2及EMT相關(guān)基因表達(dá)水平的影響。
8、應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)過(guò)表達(dá)SNHG5對(duì)MTA2及EMT相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響。
9、應(yīng)用Transwell遷移、Matrigel侵襲、qPCR及Western blotting實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過(guò)表達(dá)SNHG5同時(shí)過(guò)表達(dá)MTA2對(duì)食管癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響以及EMT相關(guān)基因和蛋
4、白表達(dá)水平的變化。
結(jié)果:
1、qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與食管非癌組織相比,食管癌組織中SNHG5的表達(dá)水平下調(diào)(P<0.01)、MTA2的表達(dá)水平上調(diào)(P<0.05);與正常食管上皮細(xì)胞相比,食管癌細(xì)胞中SNHG5的表達(dá)水平下調(diào)(P<0.05)、MTA2的表達(dá)水平上調(diào)(P<0.05),且食管癌組織和細(xì)胞中SNHG5與MTA2表達(dá)水平均呈明顯負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.47,P<0.001;r=-0.74,P<0.05);食
5、管癌組織中SNHG5與U50的表達(dá)水平呈明顯正相關(guān)關(guān)系(r=0.62,P<0.001)。食管癌組織中SNHG5的表達(dá)水平與患者的年齡、臨床分期、組織學(xué)分級(jí)和腫瘤大小無(wú)關(guān)(P>0.05),而與腫瘤的淋巴結(jié)浸潤(rùn)和遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)。
2、MTS法檢測(cè)結(jié)果顯示,過(guò)表達(dá)SNHG5對(duì)食管癌KYSE-30和KYSE-510細(xì)胞增殖活性無(wú)明顯影響(P>0.05)。
3、Transwell遷移結(jié)果顯示,過(guò)表達(dá)SNHG5能夠
6、抑制食管癌KYSE-30和KYSE-510細(xì)胞遷移能力(P<0.05);敲低SNHG5能夠促進(jìn)KYSE-30和KYSE-510細(xì)胞的遷移能力(P<0.05)。Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,過(guò)表達(dá)SNHG5能夠抑制食管癌KYSE-30細(xì)胞侵襲能力(P<0.05);敲低SNHG5能夠促進(jìn)KYSE-30細(xì)胞侵襲能力(P<0.05)。
4、qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組相比,1Gy、5Gy處理組KYSE-30細(xì)胞中SNHG5的
7、表達(dá)水平上調(diào)(P<0.05),MTA2的表達(dá)水平下調(diào)(P<0.05)。
5、RNA-pulldown聯(lián)合Western blotting實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,SNHG5在食管癌細(xì)胞中能夠與MTA2蛋白相結(jié)合。
6、細(xì)胞免疫熒光法結(jié)果顯示,過(guò)表達(dá)SNHG5能夠誘導(dǎo)食管癌KYSE-30細(xì)胞形態(tài)發(fā)生上皮樣改變。
7、qPCR實(shí)驗(yàn)和Western blotting實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,過(guò)表達(dá)SNHG5能夠降低MTA2、N-cad、
8、Vimentin、CD24、MYLK和IGF2BP1基因和蛋白表達(dá)(P<0.05),促進(jìn)上皮標(biāo)志物E-cad基因和蛋白表達(dá);敲低SNHG5能夠促進(jìn)MTA2、N-cad、Vimentin、CD24、MYLK和IGF2BP1基因表達(dá),抑制E-cad基因表達(dá)(P<0.05)。
8、qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,食管癌細(xì)胞經(jīng)放線菌酮處理后,CD511B轉(zhuǎn)染組與SNHG5轉(zhuǎn)染組中MTA2的降解程度無(wú)明顯差異(P>0.05)。
9、與S
9、NHG5單獨(dú)轉(zhuǎn)染組相比,過(guò)表達(dá)MTA2可逆轉(zhuǎn)SNHG5對(duì)細(xì)胞功能遷移和侵襲能力的影響,并引起食管癌細(xì)胞E-cad的表達(dá)水平下調(diào),N-cad、Vimentin等表達(dá)水平上調(diào),且細(xì)胞的遷移和侵襲能力顯著增加(P<0.05)。
結(jié)論:
SNHG5在食管癌組織和細(xì)胞中表達(dá)下調(diào),MTA2在食管癌組織和細(xì)胞中表達(dá)上調(diào),且兩者表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。SNHG5對(duì)食管癌細(xì)胞增殖活性無(wú)明顯影響,但能夠抑制細(xì)胞的遷移、侵襲,并抑制食管癌細(xì)
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