非洲爪蟾卵母細(xì)胞ATP-激活電流特征及其調(diào)制.pdf

1、第一部分 非洲爪蟾卵母細(xì)胞ATP-激活電流特征及pH值改變的影響 目的：研究非洲爪蟾卵母細(xì)胞ATP受體激活電流(IATp)的特征及pH改變對(duì)IATP的影響及其機(jī)制。 方法：在未去濾泡膜的卵母細(xì)胞標(biāo)本上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，用16～18℃任氏液灌流細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)用雙電極電壓鉗技術(shù)將卵母細(xì)胞膜電位鉗制在-50mV，記錄外加ATP溶液所引起的內(nèi)源性ATP-激活電流及細(xì)胞外液pH值改變對(duì)ATP-激活電流的影響。 結(jié)果：共檢測(cè)了85個(gè)細(xì)

2、胞，其中75例對(duì)ATP敏感，所記錄到的ATP-激活電流包括三種成分：快內(nèi)向電流(D1)，慢內(nèi)向電流(D2)和慢外向電流(H)。各種成分的出現(xiàn)率(incidence)約為：(1)D1+D2+H(74.7％；53/75；(2)D1+H(17.3％；15/75)；(3)D1+D2(5.7％；5/75)；(4)D1(2.3％；2/75)。根據(jù)3種成分出現(xiàn)率的不同，本實(shí)驗(yàn)所觀察到的ATP激活電流表現(xiàn)為四種基本形式，且同一蛙體各個(gè)卵母細(xì)胞對(duì)ATP的

3、反應(yīng)電流的形式不盡相同。以pH=7.4，10-3mol/LATP受體激活電流為對(duì)照，當(dāng)細(xì)胞外pH降低到6.0、5.5時(shí)，10-3mol/L的ATP引起的IATP幅值明顯被抑制，以對(duì)D1電流抑制最明顯。當(dāng)細(xì)胞外pH為7.9時(shí)，ATP-激活電流幅值也被抑制。 結(jié)論：運(yùn)用雙電極電壓鉗技術(shù)在帶有濾泡膜的非洲爪蟾卵母細(xì)胞標(biāo)本上，外加ATP可引起內(nèi)源性ATP-激活電流，pH值降低對(duì)爪蟾卵母細(xì)胞IATP的抑制可能通過(guò)對(duì)P2X受體的影響實(shí)現(xiàn)的。

4、 第二部分 Zn2+對(duì)帶濾泡膜的非洲爪蟾卵母細(xì)胞ATP-激活電流的增強(qiáng)效應(yīng) 目的：研究Zn2+對(duì)非洲爪蟾卵母細(xì)胞內(nèi)源性ATP受體介導(dǎo)電流的調(diào)制作用，探討Zn2+對(duì)離子型ATP受體的調(diào)制作用。 方法：在未去濾泡膜的卵母細(xì)胞標(biāo)本上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，用16～18℃任氏液灌流細(xì)胞，用雙電極電壓鉗技術(shù)將細(xì)胞膜電位鉗制在-50mV，觀察并記錄細(xì)胞外液中加入微量的Zn2+時(shí)對(duì)外加ATP所引起的ATP-激活電流(IATP)的影響。

5、 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)Zn2+對(duì)AT-P激活電流(尤其是D1部分)有明顯的增強(qiáng)效應(yīng)。在大多數(shù)細(xì)胞(61/75，81.33％)，10-4mol/LATP激活電流可被Zn2+增強(qiáng)。3×10-6和3×10-5mol/LZn2+分別可使10-4mol/LATP激活電流幅值增加53.8±28.8％(n=9);127.6+82.1％(n=11)，此種增強(qiáng)效應(yīng)具有濃度依賴性。10-5mol/L的Zn2+使ATP受體介導(dǎo)電流反應(yīng)的量效曲線左移，但并

6、不改變反應(yīng)的最大和最小幅值。 結(jié)論：Zn2+對(duì)ATP-激活電流調(diào)制效應(yīng)是非G蛋白依賴性的，而是一種變構(gòu)性的調(diào)制，通過(guò)改變受體對(duì)配體的親和力實(shí)現(xiàn)的。 第三部分 毒蕈堿樣乙酰膽堿受體對(duì)非洲爪蟾卵母細(xì)胞ATP受體的調(diào)制作用 目的：研究乙酰膽堿(Ach)對(duì)ATP-激活電流(IATP)的調(diào)制作用。 方法：在爪蟾新鮮分離未去濾泡膜的卵母細(xì)胞標(biāo)本上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞膜電位鉗制在-50mV，應(yīng)用雙電極電壓鉗技術(shù)記錄Ach對(duì)

7、IATP的影響。 結(jié)果：大部分受檢細(xì)胞(89.5％,77/86)對(duì)ATP敏感，10-％10-3mol/LATP可引起劑量依賴性特征性的電流。在此77個(gè)細(xì)胞中，預(yù)加Ach對(duì)IATP的影響如下：對(duì)50.6％(39/77)的細(xì)胞產(chǎn)生抑制作用，28.6％(22/77)的細(xì)胞產(chǎn)生增強(qiáng)作用，其余的無(wú)明顯作用(20.8％，16/77)。在濃度10-7～10-3mol/L范圍的Ach對(duì)IATP的抑制或增強(qiáng)作用依賴于乙酰膽堿的濃度。胞內(nèi)透析GDP