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文檔簡介
1、2002年底,在我國南方發(fā)現(xiàn)了一種新型的傳染性嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合征(severeacuterespiratorysyndrome,SARS),并波及眾多國家和地區(qū),引起廣泛關(guān)注。隨后經(jīng)過各國研究者通力合作,很快確證了一種新的冠狀病毒為導(dǎo)致該疾病的病原體,并命名為SARS相關(guān)冠狀病毒(SARS-CoV)。緊接著完成了SARS-CoV的基因組測(cè)序,并通過多種途徑分析了其基因組結(jié)構(gòu)特征。據(jù)預(yù)測(cè),SARS-CoV的基因組有14個(gè)潛在的編碼蛋白
2、大于40個(gè)氨基酸的開放閱讀框架(ORF),包括復(fù)制相關(guān)蛋白酶基因和四個(gè)主要的結(jié)構(gòu)蛋白(S、M、N、E)基因,以及幾個(gè)與其它已知蛋白無明顯同源性的未知蛋白的編碼基因。未知蛋白X2由ORF4編碼,共154個(gè)氨基酸,與其它已知蛋白沒有明顯的同源性。本研究把X2基因插入綠色熒光蛋白表達(dá)載體pEGFP-N1、pEGFP-C1和載體pCMV-myc,構(gòu)建重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染293、COS-7和VERO細(xì)胞,通過細(xì)胞熒光和免疫熒光觀察發(fā)現(xiàn),X2蛋白定位于細(xì)
3、胞核,并且呈點(diǎn)狀聚集;進(jìn)一步與核仁蛋白C23共定位,發(fā)現(xiàn)X2蛋白定位于核仁,且在不同細(xì)胞中,X2蛋白的定位狀態(tài)表現(xiàn)一致。通過構(gòu)建一系列X2蛋白缺失突變體與EGFP融合表達(dá)載體,在轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行與C23的共定位,發(fā)現(xiàn)X2的核仁定位信號(hào)位于C端的134-154位氨基酸殘基,這與用生物信息學(xué)方法分析的結(jié)果一致。采用流式細(xì)胞儀分析,發(fā)現(xiàn)X2蛋白的表達(dá)能引起Vero、293和COS-7細(xì)胞出現(xiàn)G0/G1期阻滯,并且能夠誘導(dǎo)COS-7細(xì)胞發(fā)生凋亡。
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