核酸適配體試紙條法快速檢測黃曲霉毒素B1殘留.pdf

1、本文建立了一種新型的基于核酸適配體的試紙條快速檢測技術(shù)，并首次用于水中的黃曲霉毒素B1的檢測，該技術(shù)的實現(xiàn)主要基于黃曲霉毒素B1和DNA探針對適配體的競爭反應(yīng)。核酸適配體是人工合成的單鏈DNA或RNA，能與多種物質(zhì)特異性結(jié)合且特異性強，利用核酸適配體代替?zhèn)鹘y(tǒng)膠體金側(cè)流免疫層析技術(shù)中的抗原抗體，可以使試紙條快速檢測技術(shù)的應(yīng)用范圍更廣，靈敏度更高;納米金粒子在大量聚集時呈現(xiàn)紅色，肉眼可見，即可以實現(xiàn)試紙條的現(xiàn)場實時檢測。
　　(1)納

2、米金粒子的制備和納米金粒子與核酸適配體的偶聯(lián)。本實驗通過Frens法制備納米金粒子，考察了轉(zhuǎn)速、反應(yīng)時間和還原劑添加量，并利用紫外光譜法、透射電子顯微鏡等手段進行納米金粒子的表征。核酸適配體末端修飾巰基，巰基可以與納米金粒子形成共價鍵，在納米金粒子與核酸適配體偶聯(lián)時利用檸檬酸三鈉并調(diào)節(jié)pH的方法，將偶聯(lián)的時間從使用氯化鈉陳化的1-2天縮短為3-4個小時，并利用熱重分析核酸適配體在納米金粒子表面上的連接量在7wt％左右。
　　(2)

3、試紙條優(yōu)化并檢測黃曲霉毒素B1。本試驗考察了納米金-核酸適配體添加量、封閉劑、硝化纖維膜和鏈霉親和素的種類，并通過免疫色譜讀取儀測定吸光度，最終確定黃曲霉毒素B1的肉眼檢測限為10ng/mL，免疫色譜讀取儀的檢測限為1.05ng/mL，線性范圍為1-50000ng/mL。加標(biāo)樣品的回收率在107.26％-116.59％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍在2.95％-4.73％之間。與此同時，選取黃曲霉毒素B1的結(jié)構(gòu)類似物，驗證了該試紙條的特異性，說明此