溶藻弧菌誘導(dǎo)紅笛鯛仔魚差減文庫的構(gòu)建及其表達(dá)序列標(biāo)簽分析.pdf

1、本論文以滅活溶藻弧菌誘導(dǎo)的紅笛鯛仔魚為研究對象,選擇仔魚母源抗體完全降解,而其自身免疫尚未完全建立這段“特異性免疫應(yīng)答無能期”,通過抑制消減雜交技術(shù)(SSH),構(gòu)建了誘導(dǎo)組和對照組的cDNA差減文庫,并對與紅笛鯛仔魚抗菌免疫和免疫系統(tǒng)成熟相關(guān)功能基因的表達(dá)序列標(biāo)簽(ESTs)進(jìn)行了分析。
　　 本研究以滅活溶藻弧菌(1.0×108 cfu/mL)浸泡的紅笛鯛仔魚cDNA為tester,以PBS浸泡的紅笛鯛仔魚cDNA為drive

2、r,利用抑制性差減雜交技術(shù)構(gòu)建cDNA差減文庫。經(jīng)檢測文庫容量為2×106個克隆,藍(lán)白斑檢驗表明重組率為90％,PCR檢測表明目的片段大多分布在0.3～1.0 kb之間,符合建庫要求。通過對1000個隨機(jī)篩選的克隆進(jìn)行測序,共獲得ESTs910個。BLASTx同源性分析表明:720個ESTs序列與NCBI非冗余蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫中的蛋白質(zhì)序列存在顯著的相似性,140個ESTs序列與NCBI非冗余蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫中的蛋白質(zhì)序列存在一定相似性,50個

3、ESTs序列與數(shù)據(jù)庫中的蛋白質(zhì)序列沒有相似性。將BLASTx同源性分析結(jié)果進(jìn)行GO分類可將獲得的ESTs分為以下8類:免疫防御應(yīng)激類(7個ESTs,占1％)、細(xì)胞骨架類(34個ESTs,占4％)、核糖體類(258個ESTs,占29％)、細(xì)胞代謝/呼吸鏈類(430個ESTs,占51％)、細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)/粘附類(43個ESTs,占5％)、細(xì)胞周期/DNA復(fù)制/蛋白調(diào)控/轉(zhuǎn)錄/翻譯類(25個ESTs,占3％)、轉(zhuǎn)運(yùn)類(17個ESTs,占2％)、