侵染大蒜12種病毒CP基因的原核表達(dá)、抗血清制備及其病毒檢測(cè).pdf

1、獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得燃大妞其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者始關(guān)砝確簽字日期加J多年占月鄉(xiāng)日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解大孽有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)

2、保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)睦盛大婀以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。學(xué)位篡鬻鯽械纛名：亨釤％學(xué)位論文作者始關(guān)祺鶿導(dǎo)師簽名：多秒氣簽字日期：矽眵年易月鄉(xiāng)。日簽字日期：力防；年‘冉7日工作單位：通訊地址：電話：郵編：侵染大蒜12種病毒CP基因的原核表達(dá)、抗血制備及其病毒檢測(cè)量的IPTG，誘導(dǎo)CP基因原核表達(dá)，12％S

3、DS—PAGE凝膠電泳檢測(cè)表達(dá)結(jié)果，實(shí)驗(yàn)表明目的基因在大腸桿菌內(nèi)成功表達(dá)。采用兩次電泳的方法純化CP蛋白，先是12％SDS—PAGE，然后是5％一20％SDS—PAGE，將純化的CP蛋白研磨均勻后免疫小白鼠，就可以獲得抗CP血清。蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)制得的抗血清，結(jié)果顯示抗血清特異性都很高，說(shuō)明均合格，用制得的12種抗血清分別與原核表達(dá)的病毒蛋白做Westemblot分析，GarVD和GarVE的CP之間有交叉反應(yīng)，其他病毒之間無(wú)交叉反應(yīng)。

4、酶聯(lián)免疫法檢測(cè)得出，天然病毒粒子的表達(dá)蛋白都能與抗血清特異性結(jié)合。檢測(cè)大蒜是否感染12種病毒采用3種方法，分別是蛋白質(zhì)印跡法、間接ELISA法和Dot—ELISA法。其中，蛋白質(zhì)印跡法的陽(yáng)性顯示和對(duì)照不明顯，因此不能用于檢測(cè)，間接ELISA法和DotELISA法的檢測(cè)效果都很好，并且實(shí)驗(yàn)過(guò)程都相對(duì)比較簡(jiǎn)單容易操作，因此可以用于檢測(cè)大蒜病毒。檢測(cè)結(jié)果為，洋蔥黃矮病毒的感染率最高，其次是青蔥潛隱病毒，大蒜X病毒，大蒜普通潛隱病毒，胡蔥黃條病