侵染百合和水仙的部分線狀植物病毒外殼蛋白基因的原核表達(dá)、抗血清制備及檢測(cè)應(yīng)用.pdf

1、由于長(zhǎng)期的無性繁殖，造成植物病毒在水仙和百合中大量積累，是造成水仙和百合商業(yè)價(jià)值損失的重要原因，線狀植物病毒對(duì)這兩種作物影響尤其嚴(yán)重，其中侵害水仙的線狀病毒主要有水仙黃條病毒(Narcissusyellowstripevirus，NYSV)、水仙花葉病毒(Narcissusmosaicvirus，NMV)、水仙潛隱病毒(Narcissuslatentvirus，NLV)、水仙普通潛隱病毒(Narcissuscommonlatentvir

2、us，NCLV)、水仙退化病毒(Narcissusdegenerationvirus，NDV)、虎年萬年青花葉病毒(Ornithogalummosaicvirus，OrMV)和水仙遲黃病毒(Narcissuslateseasonyellowsvirus，NLSYV)等；侵害百合的線狀病毒主要有百合斑駁病毒(Liltmottlevirus，LMoV)、百合X病毒(LilyvirusX，LVX)和百合無癥病毒(Lilysymptomless

3、virus，LSV)等。這些病毒往往復(fù)合侵染，難于分離。研究這些病毒間的血清學(xué)關(guān)系，建立相關(guān)的檢測(cè)體系，有助于對(duì)病毒病害的防治。 根據(jù)已發(fā)表的序列，設(shè)計(jì)NYSV、NCLV、OrMV、LMoV、LVX和LSV的CP特異表達(dá)引物，應(yīng)用RT-PCR和PCR技術(shù)擴(kuò)增了NYSV、NCLV、OrMV、LMoV、LVX和LSV的全長(zhǎng)CP基因，并將這些DNA片段克隆至載體pGEM-T，序列分析表明成功獲得相對(duì)應(yīng)的全長(zhǎng)CP基因。將各CP基因插入原

4、核表達(dá)載體pSBET后，在大腸桿菌BL21(DE3)plysS中進(jìn)行原核表達(dá)。SDS-PAGE分析表明，各CP基因在大腸桿菌中高效表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物分子量大小與預(yù)期相符。目的蛋白切膠后免疫小鼠制備多克隆抗體。Western-blot檢測(cè)表明獲得的各CP抗血清與目的蛋白起特異反應(yīng)，與陰性對(duì)照無反應(yīng)，表明抗血清具有很強(qiáng)的特異性。 進(jìn)一步研究NYSV、NCLV、OrMV、LMoV、LVX和LSV外殼蛋白之間的血清學(xué)關(guān)系表明，NYSV、NC

5、LV和OrMV之間沒有交叉血清學(xué)反應(yīng)，LMoV、LVX和LSV之間也沒有交叉血清學(xué)反應(yīng)。以上病毒CP抗血清分別與同屬部分病毒CP之間的血清學(xué)研究表明，NYSV外殼蛋白抗血清與同屬的ScaMV、TuMV、ZYMV和DsMV外殼蛋白有較弱的反應(yīng)，OrMV、NCLV、LMoV、LSV和LVX與被測(cè)試的同屬病毒的CP之間無血清學(xué)反應(yīng)。 用制備的NYSV、NCLV、OrMV、LMoV、LVX和LSV的CP抗血清，對(duì)田間栽種的水仙和百合樣品