DADS對RhoGDI2高表達MGC803細胞遷移侵襲的影響.pdf

1、目的：我們前期實驗表明，二烯丙基二硫（diallyl disulfide，DADS）通過阻斷Rac1-Pak1/Rock通路下調(diào)LIMK1抑制人胃癌MGC803細胞的遷移與侵襲。近來蛋白組學(xué)發(fā)現(xiàn)，DADS可下調(diào)RhoGDI2蛋白。本研究在前期研究基礎(chǔ)上，通過構(gòu)建RhoGDI2穩(wěn)定高表達 MGC803細胞系，探討DADS對RhoGDI2高表達MGC803細胞生物學(xué)行為的影響。
　　方法：將 pIRES2-EGFP-RhoGDI2真核

2、表達載體轉(zhuǎn)染 MGC803細胞，構(gòu)建RhoGDI2穩(wěn)定高表達 MGC803細胞系。Western blot驗證RhoGDI2蛋白的表達水平。劃痕實驗與Transwell侵襲實驗檢測DADS對RhoGDI2高表達MGC803細胞遷移侵襲的影響。裸鼠成瘤實驗檢測DADS對RhoGDI2高表達MGC803細胞移植瘤生長的影響。
　　結(jié)果：
　　1.成功建立RhoGDI2穩(wěn)定高表達的MGC803細胞系。
　　兩組轉(zhuǎn)染細胞（Rh

3、oGDI2/MGC803與pIRES2-EGFP/MGC803）均可見綠色熒光。Western blot顯示，RhoGDI2/MGC803細胞中RhoGDI2的蛋白表達量均明顯高于pIRES2-EGFP/MGC803及MGC803細胞，證明成功構(gòu)建RhoGDI2穩(wěn)定高表達的MGC803細胞系。
　　2. DADS對RhoGDI2高表達MGC803細胞遷移的影響。
　　劃痕實驗顯示，RhoGDI2/MGC803組的劃痕距離小于

4、pIRES2-EGFP/MGC803組和MGC803組(P<0.05)，表明 RhoGDI2高表達促進MGC803細胞的遷移。DADS處理24h的MGC803組、空載體組、RhoGDI2高表達組的劃痕距離明顯分別大于相對應(yīng)的DADS未處理組(P<0.05)，表明DADS抑制MGC803、 RhoGDI2/MGC803的遷移。
　　3. DADS對RhoGDI2高表達MGC803細胞侵襲的影響。
　　侵襲實驗顯示，RhoGDI

5、2高表達組穿膜細胞數(shù)顯著多于MGC803組和空載體組(P<0.05)，表明RhoGDI2高表達促進MGC803細胞的侵襲。DADS處理24h后的MGC803組、空載體組、RhoGDI2高表達組的穿膜細胞數(shù)明顯小于DADS未處理的相對應(yīng)各組(P<0.05)，表明 DADS抑制 MGC803、RhoGDI2/MGC803的侵襲。
　　4. DADS對RhoGDI2高表達MGC803細胞成瘤能力的影響。
　　裸鼠成瘤實驗顯示，MG

6、C803組移植瘤生長速度慢于RhoGDI2高表達組(P<0.05)，RhoGDI2高表達可促進MGC803細胞移植瘤的生長能力。DADS處理組的移植瘤生長速度顯著慢于未處理組(P<0.05)，表明DADS可抑制MGC803組與RhoGDI2高表達組移植瘤生長。移植瘤免疫組化顯示，DADS處理組較相應(yīng)的未處理組，E-cadherin表達量增多，Vimentin、Ki-67、CD34的表達量減少；RhoGDI2高表達組較 MGC803組的V