SOX9和VEGF在小兒先天性脊柱側彎頂椎生長板軟骨的表達研究.pdf

1、先天性脊柱側彎(Congenital scoliosis,CS)是臨床上較常見的一種小兒先天性脊柱畸形,其發(fā)生發(fā)展主要歸因于先天存在的異常脊椎導致脊柱縱向不平衡生長。在脊柱縱向發(fā)育過程中脊椎生長板軟骨是縱向生長的基礎,頂椎作為先天性脊柱側彎的觸發(fā)點,其生長板軟骨的化骨活性直接關系到側彎的發(fā)生發(fā)展情況。以往研究已證實脊椎生長板具有類似長骨生長板的特性,生長分化受多種細胞因子的調(diào)控。其中SOX9是一個與哺乳動物的性別決定因子SRY(Y染色體

2、上的性別決定區(qū))具有高度同源性的轉錄因子,表達于除肥大軟骨細胞外所有分化型軟骨細胞,并貫穿整個軟骨形成過程,被認為在軟骨內(nèi)成骨的初始階段發(fā)揮著重要作用。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是刺激內(nèi)皮細胞生長和血管再生的一個重要因素,研究發(fā)現(xiàn)在軟骨內(nèi)化骨過程中對于軟骨細胞死亡,細胞外基質(zhì)重塑,血管生成和骨骼形成是一種基本的調(diào)節(jié)物質(zhì)。因此通過對側彎頂椎凸凹兩側生長板軟骨VEGF和SOX9表達情況的檢測可以判斷側彎兩側軟骨板成骨能力的差異,推斷小兒先

3、天性脊柱側彎發(fā)病和進展的分子生物學基礎,為進一步的分子生物學研究奠定基礎。
　　 目的：
　　 通過免疫組化和mRNA原位雜交方法判定先天性脊柱側彎患兒凸凹兩側生長板軟骨SOX9和VEGF的表達部位和情況,了解兩側生長板軟骨生物活性的差異,發(fā)現(xiàn)SOX9和VEGF表達的相關性,探討影響先天性脊柱側彎發(fā)病和進展的分子生物學基礎。
　　 方法：
　　 取2010年10月～2011年9月我院收住的20例1～5歲先

4、天性脊柱側凸患者,男8例,女12例,平均年齡3.2(3.2±0.9)歲,術前均接受詳細的體格檢查和影像學檢查(包括X線片,全脊柱螺旋CT+三維重建,MRI)。入院后經(jīng)患者直系親屬的知情同意后,取術中切除的半椎體凸凹兩側生長板軟骨,常規(guī)HE染色并應用免疫組化和mRNA原位雜交的方法對頂椎生長板的SOX9和VEGF表達進行檢測,觀察SOX9和VEGF在頂椎生長板軟骨的表達位置,以及在頂椎凸凹兩側生長板軟骨的表達情況,同時對SOX9、VEGF

5、和VEGFmRNA的表達進行相關性研究。凸凹兩側因子表達結果采用配對t檢驗,p＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。相關性分析采用Pearson相關性分析,以p＜0.05為檢驗水準。
　　 結果：
　　 1、凸凹兩側生長板的形態(tài)學觀察,兩側軟骨板HE染色可見生長板有類似長骨生長板的結構,大致可以分為靜止層、增殖層和肥大層軟骨區(qū)。凸側生長板軟骨的增殖區(qū)和肥大區(qū)厚度更大,細胞排列也較緊密。
　　 2、SOX9主要表達于靜止層

6、和增殖層軟骨細胞,VEGF主要表達肥大軟骨區(qū),少量表達于增殖層,但靜止層未見表達。SOX9在凸側生長板軟骨表達量為154,376±8.055,凹側為121.413±6.751,VEGF在凸凹兩側生長板軟骨的表達量分別為134.989±9.731,108.498±8.737,VEGFmRNA在凸凹兩側生長板的表達為116.517±7.536和97.077±6.627,分別經(jīng)配對t檢驗p均＜0.05,SOX9、VEGF、VEGFmRNA在頂

7、椎凸凹兩側生長板軟骨的表達差異有統(tǒng)計學意義。
　　 3.對脊椎生長板軟骨SOX9和VEGF的表達進行Pearson相關性分析,r=0.650,p＜0.05,有統(tǒng)計學意義。對VEGF的表達和VEGFmRNA的表達進行相關性分析,r=0.343,p＞0.05。無統(tǒng)計學意義。
　　 結論：
　　 1、先天性脊柱側彎患者頂椎生長板軟骨,大體觀凸側較凹側具有較高的生物活性。
　　 2、SOX9、VEGF和VEGFm