wt1a和wt1b在斑馬魚(yú)腎臟發(fā)育中的功能研究.pdf

1、WT1(Wilms'tumor suppressor gene1)是一種編碼鋅指蛋白的轉(zhuǎn)錄因子，對(duì)哺乳動(dòng)物泌尿生殖系統(tǒng)的發(fā)育有重要作用，哺乳類(lèi)WT1基因突變會(huì)導(dǎo)致腎、性腺和脾等器官缺陷。在斑馬魚(yú)(Danio rerio)中存在兩個(gè)WT1同源基因，分別命名為wt1a和wt1b。本實(shí)驗(yàn)采用CRISPR/Cas9技術(shù)在斑馬魚(yú)中分別敲除wt1a和wt1b來(lái)研究其對(duì)斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育的作用。純合的wt1a-/-突變體后代表現(xiàn)出生長(zhǎng)發(fā)育畸形，出現(xiàn)心包積

2、液、卵黃囊水腫同時(shí)腎小球的發(fā)育也會(huì)受損;純合的wt1b-/-突變體表型正常、能正常存活，沒(méi)有觀察到類(lèi)似于敲降wt1b時(shí)所出現(xiàn)的表型。
　　足細(xì)胞是機(jī)體形成腎小球?yàn)V過(guò)屏障的重要部分，其缺失能引發(fā)多種腎臟相關(guān)的疾病。為進(jìn)一步驗(yàn)證wt1a-/-突變體發(fā)育畸形是否與腎臟足細(xì)胞發(fā)育相關(guān)，我們選取了足細(xì)胞標(biāo)記基因podocin和nephrin，通過(guò)二者的表達(dá)量變化可知wt1a的缺失會(huì)阻斷足細(xì)胞的分化并抑制podocin和nephrin的表達(dá)。

3、然而podocin和nephrin在wt1b-/-突變體中能正常表達(dá)。因此，wt1a在斑馬魚(yú)腎臟發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮著重要作用而wt1b可能不是腎臟發(fā)育所必須的基因。細(xì)胞自噬(autophagy)是真核細(xì)胞中一種普遍而又重要的生命現(xiàn)象，在維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)和細(xì)胞生命活動(dòng)等方面起重要作用，自噬異常與細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育及多種疾病密切相關(guān)。檢測(cè)發(fā)現(xiàn)在wt1a-/-突變體中自噬水平明顯降低，為進(jìn)一步研究自噬、wt1a在足細(xì)胞發(fā)育中的功能，我們選取自噬激活藥物雷帕