Arx的表達(dá)與C2C12細(xì)胞分化的關(guān)系.pdf

1、同源異型蛋白是一類含有60個(gè)氨基酸長(zhǎng)度的同源異型結(jié)構(gòu)域的重要轉(zhuǎn)錄因子。Arx(Aristaless-relatedhomeobox)是同源異型結(jié)構(gòu)域家族蛋白中的成員，在生長(zhǎng)發(fā)育中起著關(guān)鍵的作用，與胰腺，底板，前腦，性腺和老鼠胚胎肌肉的發(fā)育有關(guān)。前期研究發(fā)現(xiàn)在C2C12細(xì)胞分化過程中內(nèi)源的Arx有出核的現(xiàn)象。通過異核體實(shí)驗(yàn)證明Arx是一個(gè)核質(zhì)穿梭的蛋白質(zhì)，然而在C2C12分化過程中Arx的表達(dá)量變化以及Arx的表達(dá)對(duì)于C2C12的影響還不

2、清楚。
　　本篇論文以小鼠成肌細(xì)胞系C2C12細(xì)胞為模型進(jìn)行研究。從蛋白質(zhì)水平和RNA水平上證明了內(nèi)源Arx的表達(dá)量在C2C12細(xì)胞分化過程中沒有變化。然而，免疫熒光實(shí)驗(yàn)證明C2C12細(xì)胞分化過程中Arx能夠從細(xì)胞核進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)中，而且過表達(dá)Arx能夠抑制C2C12細(xì)胞的分化，將內(nèi)源的ARX敲除之后能夠促進(jìn)C2C12細(xì)胞的分化。我們猜測(cè)Arx作為轉(zhuǎn)錄因子對(duì)下游靶基因調(diào)控進(jìn)而影響細(xì)胞分化。通過數(shù)據(jù)庫(kù)篩選我們找到SIX1基因，有研究表明

3、SIX1基因缺失的小鼠其肌細(xì)胞分化停滯，Six1在C2C12細(xì)胞分化過程中表達(dá)水平上調(diào)。我們?cè)贑2C12細(xì)胞中過表達(dá)Six1之后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的分化水平升高;敲除了SIX1之后，細(xì)胞的分化受到抑制。另外，我們發(fā)現(xiàn)SIX1基因的啟動(dòng)子區(qū)含有Arx的結(jié)合位點(diǎn)TAATTA，通過熒光素酶活性測(cè)定和EMSA實(shí)驗(yàn)，我們證實(shí)了Arx能夠特異結(jié)合SIX1的啟動(dòng)子區(qū)。通過Westernblot和半定量RT-PCR實(shí)驗(yàn)證明，在C2C12細(xì)胞中過表達(dá)Arx之后，