胃蛋白酶酶解酪蛋白制備酪啡肽的研究.pdf

1、本文采用試驗方法對胃蛋白酶酶解酪蛋白制備酪啡肽進行了研究，本次試驗主要由三個部分組成。第一部分，酪啡肽生成最佳水解條件的確立。首先通過單因素試驗研究了底物濃度，酶濃度，溫度和PH對水解的影響，并依據(jù)水解度的差異，選取了單因素最佳條件。而后選取四因素三水平正交試驗設(shè)計對最佳酶解進行進一步探討，并根據(jù)試驗結(jié)果結(jié)合實際因素得出最佳試驗條件。得到最佳條件后，繼續(xù)研究水解時間與水解度的關(guān)系，以水解時間0.5h-3.5h為限制備樣品一組7個。

2、 第二部分，柱層析條件的確立與樣品的分離。本部分首先根據(jù)試驗目標產(chǎn)物的特點，結(jié)合凝膠介質(zhì)的性質(zhì)選擇交聯(lián)葡聚糖凝膠作為分離介質(zhì)。選擇均一胃蛋白酶酶解樣品對于紫外檢測波長，洗脫緩沖液，柱層高度，洗脫流速等因素進行比較，對分離圖譜進行分析并確立各因素最佳選擇。在此優(yōu)化條件下將標準品上柱，用緩沖液以穩(wěn)定的速度進行洗脫，根據(jù)適當?shù)南疵擉w積測出其吸光度，繪制標準曲線。隨后對前一部試驗制備的水解樣品進行分離，根據(jù)標準曲線判斷洗脫峰的分子量，并以此為